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《华中科技大学》 2009年
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慢性鼻窦炎和鼻息肉中miRNAs的差异性表达及其意义

张心浩  
【摘要】: 第一部分慢性鼻窦炎和鼻息肉中miRNAs的差异性表达研究 背景:慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)和鼻息肉(nasal polyps,NP)是鼻腔鼻窦的慢性炎症性疾病,它的发病机制尚未完全阐明。MicroRNA(miRNA)已被证明广泛参与免疫反应。我们对慢性鼻窦炎伴和鼻息肉及正常人群的miRNA(miR)进行差异性表达的研究,筛选出部分miRNA,验证表达的差异性。 方法:采用miRNA芯片(miRNA array)方法对慢性鼻窦炎,鼻息肉和正常鼻粘膜miRNA的表达谱进行了检测分析。根据文献报道,筛选出miR-125b和miR-26a,用实时定量(real-time)逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chainreaction,RT-PCR)和原位杂交进一步验证芯片结果。 结果:慢性鼻窦炎组中,有4种miRNAs表达上调,23种miRNAs表达下调;鼻息肉组织中,有7种miRNAs表达上调,69种miRNAs表达下调。实时定量RT-PCR显示miR-125b鼻息肉表达升高,且有统计学意义(P<0.05)。miR-125b在BEAS-2B细胞上存在表达,miR-26a在BEAS-2B细胞无表达。miR-125b在人体鼻息肉组织的上皮表达上调。 结论:miRNA在慢性鼻窦炎和鼻息肉的表达存在差异。miR-125b在鼻息肉中表达明显上调,可能与鼻息肉的发生发展有关。研究其调控方式,可为进一步探索鼻息肉的发病机制提供线索。 第二部分MiR-125b表达上调在鼻息肉发病机制中的意义 背景:miR-125b已被证明在鼻息肉表达增强。用生物信息学方法预测出4EBP1的3’非编码区与miR-125b有互补系列。4EBP1通过对Ⅰ型IFN信号通路有调控作用。我们对4EBP1是否为miR-125b的直接靶点进行验证,并对miR-125b是否通过调控4EBP1在鼻息肉发病中发挥作用进行了探讨。 方法:采用免疫组织化学方法检测4EBP1在慢性鼻窦炎及鼻息肉中的表达情况。将miR-125b的mimic及inhibitor转染BEAS-2B细胞,24小时后采用免疫印迹法(Western blot)检测4EBP1蛋白质表达水平;构建将4EBP1 3’UTR的部分序列嵌入pGL3质粒,以构建pGL3-4EBP1质粒;重组质粒与miR-125b的mimic共转染BEAS-2B细胞,检测荧光素酶吸光度;实时定量RT-PCR用于检测慢性鼻窦炎及鼻息肉中IFN-β和IL-5 mRNA的表达水平有无差异,对IFN-β和IL-5 mRNA表达水平进行相关性分析。 结果:免疫组化发现与正常对照比较,4EBP1蛋白质水平在鼻息肉出现下调;体外实验发现,分别上调和下调miR-125b水平后,4EBP1蛋白水平相应出现下降和升高。荧光素酶报告基因检测发现共转染重组有miR-125b互补结合序列的质粒和miR-125b mimic后,荧光素强度明显降低,提示miR-125b能抑制4EBP1的表达。实时定量RT-PCR显示与对照组相比,IFN-β和IL-5 mRNA在鼻息肉表达增强,且有统计学差异(P<0.05)。慢性鼻窦炎及鼻息肉中IFN-β和IL-5 mRNA水平呈负相关(P<0.05)。 结论:4EBP1是miR-125b的直接靶向调控分子。miR-125b通过介导4EBP1的表达,在鼻息肉的发病中发挥作用。4EBP1表达水平能影响IFN-β产生量,可能对鼻粘膜天然免疫发挥影响。IFN-β在鼻粘膜不仅与天然免疫有关,而且与鼻息肉中Th1/Th2失衡关系密切。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R765

【共引文献】
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