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《华中科技大学》 2009年
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VKDC/VKOR在草酸钙尿石形成过程中的作用及分子机制的初探

乔建坤  
【摘要】: 第一部分维生素K依赖性羧化酶(VKDC)在草酸钙尿石症患者肾组织中活性及表达的研究 目的对草酸钙尿石症患者肾组织中维生素K依赖性羧化酶(VKDC or GGCX)的活性及表达进行检测,探讨其与草酸钙尿石形成的关系。 方法收集肾脏皮质组织标本71例,其中草酸钙尿石组44例,对照组27例(肾盂输尿管交界处狭窄和输尿管结核组6例,肾肿瘤皮质组21例)。采用超速离心提取羧化酶,运用同位素标记的羧化反应检测尿石症患者肾组织VKDC活性:应用免疫组织化学法确定VKDC在肾脏皮质组织中的表达部位,应用免疫印迹(Western blot)蛋白半定量法,检测各组VKDC蛋白的表达。 结果草酸钙尿石症患者肾组织中VKDC活性显著低于对照组。VKDC在结石组和对照组中均有表达,主要位于肾皮质肾小管上皮细胞的胞浆,但在尿石组中的表达(27.64±0.29)明显低于对照组(53.78±0.33、55.22±0.36),差异有统计学意义(P<0.05)。 结论VKDC在草酸钙尿石症患者肾组织的活性和表达均降低,这些改变可能与草酸钙尿石的形成有关。 第二部分草酸钙尿石症患者肾组织γ-羧基谷氨酸羧化酶(GGCX)基因3’-非翻译区(3’-UTR)变异的初步研究 目的探讨γ-羧基谷氨酸羧化酶(GGCX)基因3’-非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)的分子变异及与草酸钙尿石症的关系。 方法收集肾脏皮质组织标本,其中草酸钙尿石组42例,对照组31例(非尿石组及肾肿瘤组),提取肾脏组织RNA后采用快速cDNA末端扩增(RACE)技术扩增GGCX基因的3’-UTR,将扩增的特异带回收纯化,构建到原核表达载体中,提取质粒后进行酶切鉴定,并测序后与NCBI核酸数据库进行比对。 结果GGCX基因第一次套式PCR扩增未见明显特异带,2次套式PCR结果可见约1000bp特异带,回收后连接到pGEM-T中,转化到大肠杆菌中并少选阳性菌落,提取质粒进行酶切鉴定后测序,于NCBI核酸数据库进行比对,结果未发现该段序列存在插入或缺失。 结论草酸钙尿石患者VKDC表达下调可能与γ-羧基谷氨酸羧化酶(GGCX)基因的3’非翻译区无明显相关。 第三部分维生素K环氧化物还原酶亚单位1(VKORC1)在草酸钙尿石症患者肾组织中的表达及意义 目的探讨草酸钙尿石症患者肾组织中维生素K坏氧化物还原酶亚单位1(VKORC1)的表达及意义。 方法收集肾脏皮质组织标本71例,其中草酸钙结石组44例,对照组27例(肾盂输尿管交界处狭窄和输尿管结核组6例,皮质厚度小于1.0cm;肾肿瘤皮质组21例,皮质厚度大于1.0cm),应用免疫组织化学法检测VKORC1在组织中的表达部位,应用免疫印迹(Western blot)蛋白半定量法,检测各组VKORC1蛋白的表达,并分析其表达与肾脏积水及皮质厚度等因素的关系。 结果VKORC1定位于肾皮质肾小管上皮细胞的胞浆。对照组间VKORC1的表达(262.16±7.33和286.71±9.82)无明显差异,P>0.05,但结石组VKORC1蛋白的表达(122.33±11.34)明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论草酸钙尿石症患者肾组织内VKORC1表达降低在草酸钙尿石形成中有重要作用,并可能通过维生素K循环作用于VKDC而发挥机制。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R691.4

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