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《华中科技大学》 2010年
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Galectin-3特异性siRNA对肺癌肿瘤干细胞生物学功能影响的研究

万黎  
【摘要】: 目的:肿瘤干细胞对化疗药物的敏感性差,往往成为肿瘤复发的根源,研发特异性针对肿瘤干细胞的新型药物是目前临床治疗肿瘤的最具潜力的研究方向。肺癌干细胞分离后,通过表面标记纯化肺癌干细胞,研究它们的基因表达模式,找到肺癌发生过程中必需的功能蛋白,把该蛋白作为新的药物靶标来治疗肺癌,是目前肺癌防治的一个新的研究方向。本研究检测了肺腺癌CD133+细胞中Galectin-3的表达情况,并利用体外化学合成的特异性针对galectin-3的siRNA研究了CD133阳性肺腺癌肿瘤干细胞中表达的Galectin-3的生物学功能。 方法:第一部分实验是从10例肺腺癌患者切除的肿瘤标本中通过磁珠分选技术分选出CD133+肺腺癌细胞,通过流式细胞术检测分选出的细胞中CD133+细胞百分率。第二部分实验是采用FQRT-PCR和Westernblot的方法分别在转录和翻译两个水平检测了CD133+肺腺癌细胞中Galectin-3的表达,同时流式细胞术检测了CD133+细胞中galectin-3的分布情况。第三部分研究内容旨在深入研究Galectin-3在CD133+细胞中高表达的生物学意义。采用针对galectin-3的特异性siRNA来研究降低CD133+细胞中galectin-3的表达对CD133+肺腺癌细胞的增殖,转移能力及其诱导CD8+T细胞凋亡能力的影响。首先通过FQRT-PCR和Westernblot检测siRNA对galectin-3的干扰效率,随后单克隆形成实验以及MTT法检测了特异性针对galectin-3的siRNA对CD133+肺腺癌细胞增殖的影响,Boyden小室模型检测了siRNA对CD133+肺腺癌细胞转移能力的影响,最后AnnexinV和PI双染检测转染siRNA的CD133+肺腺癌细胞上清诱导CD8+T细胞凋亡能力。 结果:第一部分的实验结果表明,磁珠分选出的细胞中CD133+细胞数达到了90%,体外培养2-3天后经过磁珠分选出来的CD133+细胞能形成典型的肿瘤干细胞球。第二部分FQRT-PCR和Westernblot结果发现Galectin-3在CD133+细胞中的表达量分别为CD133-细胞中的1.24倍和1.5倍,差异有统计学意义(p0.05)。流式细胞仪检测结果表明CD133+肺腺癌肿瘤干细胞胞内以及细胞膜上均有galectin-3的分布,且平均荧光强度统计结果显示CD133+细胞内(17.8±2.5)以及细胞膜(25.6±5.1)上的galectin-3的表达量均较CD133-细胞内(7.3±3.1)以及细胞膜(10.3±3.4)上galectin-3的表达量高,并且差异具有统计学意义(p0.05)。第三部分的实验结果显示,针对galectin-3的siRNA平均干扰效率为80.3%,明显降低CD133+细胞中galectin-3的表达,并抑制CD133+细胞增殖,转染96h后细胞活率为未转染组的(75±3.5)%,转染siRNA后的CD133+细胞单克隆形成率(60.12±4.32)%明显较未转染组(87.34±4.89)%下降,差异具有统计学意义(p0.05)。Boyden小室模型检测结果表明:转染siRNA后,CD133+细胞的转移侵袭能力(68±7)明显较未转染组(100±8)下降,差异具有统计学意义(p0.05),凋亡检测结果表明CD133+细胞的上清诱导CD8+T细胞凋亡率为(18.6±3.5)%,并且这种诱导凋亡的能力能被乳糖以及抗Galectin-3的抗体中和,转染siRNA的CD133+肺腺癌细胞上清诱导CD8+T细胞凋亡率为8.2%,与未转染组凋亡率18.6%相比诱导凋亡的能力明显下降,差异有统计学意义(p0.05)。 结论:以上结果表明磁珠分选技术能够有效地从肿瘤标本中分选出CD133+的肺癌肿瘤干细胞,分选效率高,所分选的细胞体外培养能形成典型的肿瘤干细胞球。Galectin-3在CD133+肺腺癌细胞中高表达,在其细胞内以及细胞膜上均有表达且均高于CD133-细胞细胞内以及细胞膜的表达量。CD133+细胞表达出的Galectin-3具有很强的生物学活性,在体外具有明显的诱导CD8+T细胞凋亡的功能,针对galectin-3的siRNA能高效抑制galectin-3在CD133+细胞中的的表达,并能降低CD133+细胞的增殖能力、单克隆形成能力、体外转移能力及诱导CD8+T细胞凋亡的能力,具有潜在的临床应用价值。本研究进一步阐明了Galectin-3在肿瘤的发生发展中的作用,为抗肿瘤药物的研发提供了一条新的思路。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R734.2

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【参考文献】
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1 朱睿,张开立,邹向阳;RNA干扰(RNAi)技术及其在功能基因组学研究中的应用[J];大连医科大学学报;2003年02期
2 李婕;张尚福;;Galectin-3与肺癌的关系[J];中国肺癌杂志;2007年04期
3 任声权;易绍琼;陈薇;;Galectin-1的生物学活性及其研究进展[J];微生物学免疫学进展;2008年02期
4 刘静;郭文君;;肺癌干细胞的研究进展[J];国际病理科学与临床杂志;2008年05期
5 周炼红,胡燕华,汪道文;重组腺相关病毒经不同途径转染鼠眼球组织[J];眼科新进展;2004年03期
6 魏益平;王梅;华平;吴澄;曹永科;杨艳旗;陈炬;张惠忠;;肿瘤干细胞标志物CD133在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[J];中山大学学报(医学科学版);2008年03期
【共引文献】
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1 程剑;林彬;施启丰;;44例胃癌组织Galectin-3和E-cadherin蛋白表达的观察[J];重庆医学;2011年31期
2 琚晨焰;胡小云;;半乳糖凝集素-3与消化道肿瘤侵袭和转移关系的研究进展[J];长治医学院学报;2009年06期
3 王明栋;王洪;马文斌;史彦芳;王任直;;慢病毒载体介导半乳凝素-3-shRNA沉默基因对肿瘤细胞的影响[J];第四军医大学学报;2008年12期
4 王建明;孙乃学;惠娜;范雅稚;冯海晓;赵世平;;rAAV介导BDNF基因转染对急性高眼压兔眼神经损害的保护作用[J];南方医科大学学报;2009年09期
5 王建明;孙乃学;惠娜;范雅稚;冯海晓;赵世平;;rAAV介导hBDNF基因转染对急性高眼压兔眼视网膜BDNF表达的影响[J];南方医科大学学报;2009年11期
6 凌宗帅,刘友清,潘学昌,周长桥,魏联果;RNA干扰技术及其应用[J];动物医学进展;2004年02期
7 王伟强;陈军;;BAG-1蛋白在人癌细胞中的表达和功能[J];中国肺癌杂志;2008年03期
8 林旭勇;刘树立;刘楠;杨小湜;徐洪涛;王恩华;;干细胞标记物CK19、Notch3、CD133、P75NTR、STRO-1及ABCG2在肺鳞癌中的表达及意义[J];中国肺癌杂志;2009年04期
9 吴丹;胡兰;石娇;谭克;刘雷;杨群辉;;RNA干扰的实验方法及应用[J];饲料工业;2007年05期
10 汤明芳;陆晓和;马骊;温茜;罗微;周瑾;袁伟;宫玉波;;重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因经角膜基质瓣转染兔角膜基质细胞的实验研究[J];广东医学;2008年04期
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1 王泽荣;SiRNA下调Smad3基因后对大鼠HSC及大鼠四氯化碳肝纤维化模型的纤维化相关影响[D];苏州大学;2011年
2 卿柳庭;猪细小病毒非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2的研究[D];华中农业大学;2005年
3 崔仑标;对苯二甲酸诱发大鼠膀胱癌机制的探讨[D];南京医科大学;2006年
4 张永强;腺病毒介导FasL基因转染大鼠角膜组织的实验研究[D];第一军医大学;2006年
5 孙晓炜;Galectin-3在子宫内膜异位症的表达及调节[D];复旦大学;2007年
6 丁芝祥;rAAV2介导的HSV-TK/GCV系统对晶状体上皮细胞抑制作用的研究[D];中南大学;2007年
7 周东文;人源半乳糖凝集素类似蛋白GRP的结构与功能研究及人源gal-8的初步晶体学研究[D];中国科学技术大学;2008年
8 陈悦;黄芩苷抑制牙周炎牙槽骨吸收的作用及机理研究[D];第四军医大学;2008年
9 吴正蓉;Cripto-1(CR-1)在鼻咽癌中的作用及其机制研究[D];南方医科大学;2009年
10 文加斌;NCI-H446人小细胞肺癌细胞株细胞亚群克隆异质性与肿瘤干细胞的实验研究[D];大连医科大学;2009年
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1 张伟;PTEN、Galectin-3和Ki-67在胸腺瘤中的表达及其临床意义[D];郑州大学;2010年
2 龙志晶;干扰Hes1基因对骨髓基质细胞向胆碱能神经元分化前期的影响[D];山西医科大学;2011年
3 刘彩玉;脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1的表达对关键基因的影响[D];山西医科大学;2011年
4 赵世彬;IVF失败者子宫内膜galectin-3表达及其容受性评估[D];河北医科大学;2011年
5 张同方;Galectin-3促进骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞增殖和血管生成的研究[D];安徽医科大学;2011年
6 宾莉;慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白两种途径体内转染大鼠角膜基质细胞的实验研究[D];重庆医科大学;2011年
7 王瑾;Elmo1协同Dock180对细胞运动及卵巢癌恶性浸润的作用[D];重庆医科大学;2011年
8 刘丹丹;110例睾丸生殖细胞肿瘤的临床资料及预后分析[D];新疆医科大学;2011年
9 阮红峰;鸡骨骼肌硒蛋白W对不同硒水平的响应及其功能初探[D];东北农业大学;2011年
10 徐厚巍;低分子柑橘果胶杀伤结肠癌细胞过程中关键凋亡蛋白的活化[D];广州医学院;2010年
【二级参考文献】
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1 郭再玉,姜晓丹,徐如祥,张世忠,徐强,邹雨汐,杜谋选,蔡颖谦;骨髓基质细胞源性神经干细胞体外分化及电生理特性的研究[J];中华神经医学杂志;2005年06期
2 陈迪文,程春生,于皆平;Galectin-3在胃癌及其转移淋巴结中表达及临床意义[J];广东医学;2005年01期
3 张唯;蔡荣;张红峰;钱程;;肿瘤干细胞[J];生命的化学;2006年06期
4 王丽华,赵咏桔,王晓颖,郑林,肖家诚,徐锦屏,罗邦尧;Galectin-3蛋白在甲状腺肿瘤中的表达及其意义[J];中华内分泌代谢杂志;2004年04期
5 程超,谷力加,吴一龙,翁毅敏,冯卫能,钟文昭,黄邵洪;影响PN2非小细胞肺癌术后远处转移及预后的因素探讨[J];中山大学学报(医学科学版);2004年S1期
6 邢变枝,毛善平;Galectin-3在人脑星形胶质瘤细胞中的表达[J];卒中与神经疾病;2004年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 倪勤;RNA干扰技术防治病毒性肝炎的研究[J];国外医学.流行病学.传染病学分册;2003年04期
2 李光明,谢青,史毅,李定国,金由辛;siRNA对HSC结缔组织生长因子的抑制作用[J];上海第二医科大学学报;2005年02期
3 燕春艳;RNA干扰技术研究进展[J];实用医药杂志;2003年09期
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5 郭述良,罗永艾;RNA干扰及其在呼吸系统疾病研究中的应用[J];国外医学.内科学分册;2004年12期
6 赵洪波,张嘉宁;RNA干扰技术的应用[J];大连医科大学学报;2003年04期
7 范怡敏,耿飞,吴兴中;RNAi的机制及RNAi技术的应用[J];医学综述;2004年04期
8 王占黎,卢景芬,张亮仁,张礼和;RNA干扰与药物的研究进展[J];国外医学.药学分册;2004年04期
9 熊洁,陈宝安;RNA干扰技术在白血病研究中的应用前景[J];国外医学.肿瘤学分册;2004年11期
10 胡晓霞,李力;RNA干扰技术及在妇科肿瘤研究中的应用[J];国外医学.妇产科学分册;2005年02期
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1 邓清华;刘国文;刘磊;王建国;朱晓岩;李小兵;王哲;;siRNA特异性抑制犊牛原代肝细胞SREBP-1c基因的表达[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(上册)[C];2011年
2 季爱民;苏丹;车鸥;李文适;孙靓;张忠义;杨彬;;壳聚糖/siRNA纳米粒介导的功能性基因沉默研究(英文)[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
3 娄域峰;张华;施新萍;;半乳糖凝集素-3在心脏疾病诊断中的应用[A];2011年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2011年
4 黄伟;吕明;金明姬;杨长青;高钟镐;;mPEG-PCL-g-PEI聚合物的合成及其siRNA递送性能[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
5 陈宇;郑海涛;杨力建;陈少华;沈琦;刘思初;李萡;李扬秋;;靶向抑制PPP2R5C基因的siRNA的筛选[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
6 刘政;邱广斌;;MYCT-1基因特异的siRNA对GES-1细胞凋亡、增殖及细胞周期的影响[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
7 陈卫华;王跃闽;;Cb1-b特异性siRNA载体的筛选验证[A];华东六省一市泌尿外科学术年会暨2011年浙江省泌尿外科、男科学学术年会论文汇编[C];2011年
8 赵旭赟;;Galectin-1在HIF-1α诱导的髓系白血病分化过程中的作用[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
9 古爱军;周林玉;;Galectin-3在肾细胞癌中的表达及意义[A];华东六省一市泌尿外科学术年会暨2011年浙江省泌尿外科、男科学学术年会论文汇编[C];2011年
10 刘芳蕾;周勇;应可净;;肺癌PLK1基因多态性及siRNA干预的研究[A];2011年第三十三届浙江省呼吸系病学术年会暨呼吸疾病诊治新进展学习班论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 余志平;打开功能基因组学与未来治疗学的大门[N];中国医药报;2004年
2 庄北宁;防治非典,专家称找到基因“新药”[N];新华每日电讯;2005年
3 杨霞;防治SARS药研发获阶段性成果[N];中国医药报;2004年
4 记者 杨帆 实习生 杨周;“肿瘤干细胞研究”在渝实施[N];重庆日报;2009年
5 何雷;“973”计划肿瘤干细胞项目启动[N];健康报;2009年
6 记者 衣晓峰 靳万庆;三氧化二砷可击杀肿瘤干细胞[N];中国中医药报;2010年
7 衣晓峰 蓝建中;三氧化二砷可击杀肿瘤干细胞[N];医药经济报;2010年
8 衣晓峰;三氧化二砷可杀伤肿瘤干细胞[N];中国医药报;2010年
9 吕斌;湖南湘雅医院发现肿瘤干细胞[N];医药导报(中药报);2004年
10 香港麦迪信医学出版有限公司供稿;肿瘤干细胞将成治癌新靶点[N];医药经济报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 万黎;Galectin-3特异性siRNA对肺癌肿瘤干细胞生物学功能影响的研究[D];华中科技大学;2010年
2 陈锋;胶质瘤中Runx2、Galectin-3的表达及其相互关系[D];武汉大学;2010年
3 汤东;胰腺星状细胞高表达Galectin-1促进胰腺癌免疫抑制及进展的研究[D];南京医科大学;2012年
4 吕坤;Galectin-9在病毒性心肌炎发病中的作用及其机制[D];复旦大学;2009年
5 龙达;白色念珠菌诱导活化的巨噬细胞中半乳糖凝集素-3的表达及作用[D];中南大学;2012年
6 李来邦;重组腺病毒载体Ad5-galectin-9对大鼠肝移植抗排斥反应的实验研究[D];昆明医学院;2009年
7 胡平方;纤溶酶原激活物抑制剂-1 siRNA治疗实验性肝纤维化[D];第二军医大学;2010年
8 蔡磊;携带Survivin特异性siRNA的完全人源性肝癌单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白对肝癌凋亡的影响研究[D];第四军医大学;2010年
9 张伟;H5N1亚型高致病性禽流感病毒siRNA靶向制剂的研究[D];中国协和医科大学;2010年
10 郭炬;siRNA靶向沉默HPA基因对人膀胱癌BIU-87细胞的生物学及HPA相关基因的影响[D];华中科技大学;2011年
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1 郑亚婷;应用siRNA技术抑制铜绿假单胞菌外膜蛋白OprM表达的研究[D];昆明医学院;2010年
2 贾丽洁;ICP27特异性siRNA抑制HSV-1病毒复制的实验研究[D];郑州大学;2010年
3 付振宇;siRNA沉默HIF-1α基因对人前列腺癌PC3细胞生物学性状的影响[D];苏州大学;2010年
4 李晶;重组人Galectin-1蛋白的表达、纯化及生物活性的检测[D];第四军医大学;2010年
5 韦德芳;利用pSOS-HUS系统筛选靶向乙肝病毒X基因的siRNA的研究[D];重庆医科大学;2010年
6 马婧薇;ASGPR介导的靶向siRNA抑制HBV的复制与表达[D];华中科技大学;2009年
7 方首镕;siRNA干扰MDR1逆转舌癌耐药性表型的实验研究[D];广西医科大学;2011年
8 李杰;抑制PKM2的siRNA协同抑制CCND1的作用机制研究[D];安徽医科大学;2011年
9 张慧娟;半乳凝集素-3(Galectin-3)在心力衰竭患者中的表达及其对预后的影响[D];大连医科大学;2011年
10 王涵;应用siRNA技术下调Survivin抑制鼻咽癌细胞生长的研究[D];昆明医学院;2010年
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