收藏本站
《华中科技大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

放射性核素~(99m)Tc标记新型凋亡显像分子探针Tat_(49-57)-DEVD的实验研究

常伟  
【摘要】: 研究99mTc标记穿膜肽HIV-Tat49-57修饰的Caspase-3底物多肽Tat49-57-DEVD的制备方法;及其体外人乳腺癌MCF-7细胞经环磷酰胺诱导的肿瘤细胞凋亡凋亡模型中标记物摄取动力学实验;以及在正常昆明小鼠体内的生物学分布特征;并进一步结合单光子发射计算机断层(SPECT)显像技术,评价其应用于在荷瘤裸鼠模型活体内实时、动态地检测靶组织细胞凋亡程度的可行性研究。 方法 1.99mTc-HYNIC-HIV-Tat-DEVD标记条件和生物分布的研究: (1)多肽探针标记条件的研究:合成穿膜肽HIV-Tat49-57修饰的Caspase-3底物多肽Tat49-57-DEVD,以双功能联结剂联肼尼克酰胺(HYNIC)为螯合剂,采用间接标记法,三羟甲基甘氨酸(tricine)与乙二胺二乙酸(EDDA)作为协同配体,99mTc标记后经Sep-PakC18反相层析柱进行纯化后,并对其标记率、放化纯、稳定性进行研究。 (2)正常小鼠体内生物学分布研究:正常昆明小鼠25只,随机分为5组,分别于尾静脉注射99mTc-HYNIC-Tat49-57-DEVD,每只动物注入标记物7.4MBq,注射后15min、30min、60min、180min、300min处死,取感兴趣器官称重并测量放射性计数,经时间衰减校正后计算每克组织的百分注射量(%ID/g)。 2.在肿瘤细胞凋亡模型中细胞摄取的体外研究: 将标记物与经过环磷酰胺诱导凋亡的人乳腺癌细胞株MCF-7细胞进行体外细胞摄取实验和竞争抑制实验,得到标记物与MCF-7细胞凋亡模型的在不同时间点的细胞摄取动力学研究,并比较其与正常细胞及不同凋亡水平下细胞模型的细胞摄取有无差异性进行研究。同时对诱导凋亡的肿瘤细胞行免疫组织化学研究,检测Caspase-3酶的表达情况。 3.体内凋亡显像和竞争抑制SPECT显像的研究: (1)荷乳腺癌裸鼠显像研究:荷人乳腺癌裸鼠在经制模(经荷瘤裸鼠腹腔内注射溶于1ml PBS磷酸盐缓冲液(PH=7.3)的环磷酰胺(药物剂量按体重150mg/kg))化疗72小时后注射示踪剂后30min、60min、90min、120min、180min、360min进行全身平面显像,图像处理采用感兴趣区(ROI)技术,计算不同时相肿瘤与对侧肢体相应部位的放射性比值。 (2)荷乳腺癌裸鼠体内分布研究:取5只荷瘤裸鼠于注射示踪剂90min后处死,取对侧肢体相应部位及肿瘤组织称重并测量放射性计数,计算二者的摄取比值。 (3)肿瘤组织切片免疫组织化学研究:采用免疫组织化学染色SP法(链霉卵白素-过氧化物酶法技术),检测Caspase-3酶的表达情况。 结果 1..99mTc-HYNIC-Tat49-57-DEVD标记条件的研究: ①采用tricine/EDDA作为协同配体,99mTc-HYNIC-Tat49-57-DEVD放化纯91%。与新鲜人血清孵育30mmin和120min后,放射化学纯度分别为91.5%和90.8%;经Sep-Pak C18反相层析柱分析,其间放射性峰均未见漂移。于室温下放置5h,其放射化学纯度为90%。 ②标记物在正常昆明小鼠体内生物学分布实验显示,99mTc-HYNIC-Tat49-57-DEVD血液清除速度较快,主要以肝脏和肾脏排泄。 2.标记肿瘤细胞凋亡模型中细胞摄取的体外研究 在化疗药物环磷酰胺的诱导下,人乳腺癌细胞株MCF-7细胞标记物在肿瘤细胞体外凋亡模型中细胞摄取率与不同的细胞凋亡水平有相关性(r=0.856,P0.01),且细胞摄取可被特异性的竞争抑制。药物诱导发生凋亡的MCF-7细胞Caspase-3呈阳性表达。 3.标记物在荷瘤裸鼠模型的体内凋亡显像研究 荷瘤小鼠注射显像剂后的SPECT显像在90min时可见肿瘤组织放射性浓聚明显异常,注射显像剂后肿瘤/肌肉放射性摄取比值T/B最高为2.23±0.13,与对照组比较有显著性差异(P0.01)。体内生物分布实验示,注射显像剂后肿瘤/肌肉放射性摄取比值为3.29±0.82。 环磷酰胺治疗对照组肿瘤组织切片免疫组化染色Caspase-3的表达主要见于肿瘤细胞胞浆中,呈棕色颗粒状或弥漫性分布,细胞核内少见。生理盐水治疗对照组的肿瘤细胞胞浆中,则没有见到明显染色。 结论 以HYNIC作为双功能螯合剂标记穿膜肽修饰的Caspase-3底物多肽Tat49-57-DEVD方法可行,步骤简便,标记率高,体外稳定性好,在体内主要以肝脏和肾脏排泄;体外细胞摄取较为理想,与细胞凋亡程度密切相关,而在正常昆明小鼠体内生物分布特征以及荷瘤裸鼠模型中体内凋亡显像研究均表明标记后的99mTc-HYNIC-Tat49-57-DEVD仍保持良好的生物学特性,是一种具有潜质的凋亡显像剂,为无创、动态、实时监测体内组织凋亡状态打下了基础,其临床应用有待进一步深入研究。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R817

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘璇,朱兴族;脑缺血中的细胞凋亡[J];中国药理学通报;1999年04期
2 陈永昌,张建中,李铁,蒋秀高,朱文玉;幽门螺杆菌诱导人胃上皮细胞株BGC-823凋亡[J];中国应用生理学杂志;1999年03期
3 裴明,曲绵域,于长隆,张波;凋亡在骨关节病发病机制中的作用[J];中华骨科杂志;1999年03期
4 夏革清;一氧化氮与妊娠免疫[J];国外医学.免疫学分册;2000年06期
5 冯涛,朱克,戚晓昆,熊斌;大鼠持续性局灶脑缺血后Fas基因表达及其与神经元凋亡的关系[J];中华老年心脑血管病杂志;2000年06期
6 荆俊杰!350025,章翔,吴景文,高大宽,易林华,郭衍,梁景文,刘先珍,王煊;重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响[J];肿瘤防治研究;2000年05期
7 李杰恩!530021南宁,唐安洲!530021南宁,周永!530021南宁,李佳荃!530021南宁,黄光武!530021南宁,谭颂华!530021南宁;鼻咽癌放疗前及放疗中细胞凋亡的变化和意义[J];肿瘤防治研究;2000年05期
8 刘兴德,陈运贞;大鼠心肌IP第二窗对I/R心肌细胞凋亡的影响及对bcl-2、bcl-xl表达的调节[J];重庆医科大学学报;2000年02期
9 任波,齐振华,张国平;rhG-CSF增强Ara-C诱导白血病细胞凋亡作用的实验研究[J];中国现代医学杂志;2000年09期
10 李小刚,朱克,李楠,马向晨,李建国;谷氨酸对神经元钙离子内流和凋亡的影响及谷氨酸受体拮抗剂保护作用的研究[J];中华老年心脑血管病杂志;2001年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 马越波;;瘢痕的治疗[A];2008年浙江省医学美容暨整形外科学术会议论文汇编[C];2008年
2 张利兴;;放射性核素分析在军控核查中的应用[A];第三届(2005年)同位素技术与应用学术研讨会会议文集[C];2005年
3 吕传君;刘春立;王驹;孙建永;苏锐;张雪杉;陈涛;杨瑞雪;;衰变和吸附对放射性核素在花岗岩中扩散特性的影响[A];首届核化学与放射化学青年学术交流会论文摘要集[C];2006年
4 李冬梅;徐茂泉;刘广山;李超;许文彬;;福建兴化湾外近海沉积物岩心放射性核素分布[A];第八届全国同位素地质年代学、同位素地球化学学术讨论会资料集[C];2005年
5 姚熠;刘书田;;陆源生态系统中锕系元素从土壤到植物的转移系数的研究[A];第七届全国核化学与放射化学学术讨论会论文摘要集[C];2005年
6 董峰;余奕波;;32P-胶体内照射治疗颌面部恶性肿瘤的临床应用[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
7 刘静;;30例恶性肿瘤病人32~P内照射治疗的护理[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2005年
8 俞惠新;王正武;张睿;陈波;张莉;谭成;林秀峰;曹国宪;;微乳及微乳凝胶包封放射性核素在体内外的缓释作用研究[A];第三届全国核素显像暨核素治疗学术交流会论文汇编[C];2006年
9 吴华;张振蔚;;放射性核素-溶瘤病毒治疗肝癌的实验研究[A];第三届全国核素显像暨核素治疗学术交流会论文汇编[C];2006年
10 杨霞;张锦;郑西卫;李秀忠;;螺旋CT增强的肺动脉造影和放射性核素肺通气/灌注显像相结合在肺栓塞诊断中的作用[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 张定业 实习生 胡磊;直击济南放射性核素检测全过程[N];济南日报;2011年
2 记者 高莉;我区监测到来自日本的放射性核素[N];宁夏日报;2011年
3 记者 李天舒;微量放射性核素为何对人体无害[N];健康报;2011年
4 吴永刚;放射性核素治肿瘤——一箭双雕[N];大众卫生报;2002年
5 山东省济宁肿瘤医院 师恩义;放射性核素缓解骨转移痛[N];健康报;2000年
6 殷永哲;核酸与细胞的生理性凋亡[N];保健时报;2009年
7 新华;俄罗斯发现可清除人体内放射性核素物质[N];医药经济报;2000年
8 刘婷婷 第四军医大学唐都医院;临床须依法使用放射性核素[N];健康报;2009年
9 郑州市第三人民医院核医学科 侯振山;出现疼痛表明有效[N];健康时报;2009年
10 盛大林;“阳光”是最好的防“辐”剂[N];深圳特区报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张卫东;斑蝥素对肺癌A549细胞增殖抑制作用机制的研究[D];中国医科大学;2005年
2 王纯雁;非甾体类抗炎药物(non-steroidal anti-in-flammatory drugs, NSAIDs)对人卵巢癌细胞系CAOV3抑制机制的研究[D];中国医科大学;2005年
3 史颖弘;细胞凋亡与自噬在肝细胞癌侵袭及转移中的作用研究[D];复旦大学;2005年
4 冯莉;肾脏热缺血再灌注早期损伤及益生注射液的干预机理研究[D];四川大学;2005年
5 官立丽;HPV16 E6 siRNA对宫颈癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响[D];四川大学;2005年
6 李青南;Smad4与雌激素受体相互作用抑制乳腺癌生长的机理研究[D];四川大学;2005年
7 王金志;ING4基因重组表达及抗肿瘤效应的实验研究[D];苏州大学;2005年
8 张晨晓;泥鳅多糖的免疫调节和抗肿瘤作用机理[D];华中科技大学;2005年
9 刘永靖;病毒—基因系统CNHK500-hTRAIL治疗肺癌的实验研究[D];第二军医大学;2005年
10 关良;重组人TRAIL及突变体的原核表达和抗肿瘤生物活性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李化光;透明质酸促进体外培养关节软骨细胞整合素α5亚单位的表达[D];中国医科大学;2005年
2 李文化;色素上皮源性因子对缺血—再灌注视网膜神经节细胞的保护作用[D];山西医科大学;2005年
3 赖红琳;聚多曲霉菌提取液对培养人肺鳞癌细胞增殖作用的实验研究[D];第二军医大学;2005年
4 周曦;三氧化二砷及联合顺铂对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响[D];南华大学;2005年
5 刘勇;MEK抑制剂PD98059对HepG2细胞增殖及凋亡的影响[D];南华大学;2005年
6 袁丽铭;巴西蘑菇多糖(ABPS)诱导K562肿瘤细胞凋亡的分子机理研究[D];上海师范大学;2005年
7 许菊;抑癌基因ARHI在HeLa细胞中的表达[D];苏州大学;2005年
8 孙凌聪;己二酮诱导PC12细胞中毒模型的建立及神经生长因子的保护作用[D];武汉大学;2005年
9 刘韦;人TRAIL cDNA的克隆及在毕赤酵母中大规模发酵和纯化[D];吉林大学;2006年
10 邓国英;参杞合剂对人鼻咽癌细胞CNE凋亡及转移的影响[D];大连医科大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026