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《华中科技大学》 2010年
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小鼠睾丸特异性表达基因TSEG-2的功能初步研究

胡涛  
【摘要】: 第一部分TSEG-2基因真核表达载体的构建及其在细胞内的表达 目的:构建睾丸特异表达基因2 (testis specific expressed gene 2, TSEG-2)的真核表达载体,探讨TSEG-2在细胞中的表达及其生物学功能。 方法:以小鼠睾丸组织cDNA为模版,设计携带HindⅢ和BamHⅠ酶切位点的引物序列,聚合酶链反应扩增基因片段,克隆至携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体pEGFP-N1;在阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)的介导下,重组质粒转染体外培养的精母细胞株GC-2spd,荧光显微镜下观察TSEG-2基因在细胞内的表达定位,MTT法测定细胞生长活性,AO/EB荧光染色法、Hoechst 33258荧光染色法、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电位,实时定量PCR测定Fas、Bcl-2、Bax表达水平。 结果:.成功构建了TSEG-2与EGFP的融合表达载体pEGFP-TSEG2,转染GC-2spd细胞后可见胞浆内绿色荧光蛋白表达。转染pEGFP-TSEG2 48h后,GC-2spd细胞生长抑制39.2%(P0.05),出现细胞凋亡形态学改变,凋亡率为28.3%(P0.05);线粒体膜电位显著低于对照组(P0.05), GC-2spd细胞中Fas和Bcl-2的表达下调,而Bax的表达上调。 结论:成功构建TSEG-2基因的真核表达载体,在精母细胞株中表达并促进细胞凋亡,并提示TEGS-2可能通过内源性凋亡途径诱导细胞凋亡。为进一步在细胞和动物水平开展TSEG-2功能研究奠定了基础。 第二部分TSEG-2基因在小鼠睾丸扭转复位模型中的表达特征 目的探讨睾丸特异表达基因2(testis specific expressed gene 2,TSEG-2)在小鼠睾丸扭转复位模型中的表达特征。 方法昆明小鼠36只,随机分组为对照组(6只)、假手术组(6只)、单侧睾丸扭转复位实验组(24只)。实验组分为2组,每组12只,左侧睾丸扭转720度维持2 h,分别于复位后1、7天取扭转侧睾丸。采用HE染色、原位末端标记技术(TUNEL)观察睾丸组织形态改变;黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性;原位杂交法观测TSEG-2在睾丸生精细胞内的表达定位;实时定量PCR法检测TSEG-2基因在睾丸组织中的表达水平。 结果对照组和假手术组生精上皮排列规则,扭转复位后1、7天的睾丸组织内生精上皮结构松散,出现生精细胞凋亡,Johnsen's评分分别降低23.4%、64.1%(P0.01),SOD活性降低11.6%、22.2%(P0.05),MDA活性升高69.6%、93.2%(P0.01)。TSEG-2基因表达定位于小鼠睾丸生精小管的精原细胞和精母细胞。与对照组比较,扭转复位1、7天后睾丸组织内TSEG-2表达水平分别上调2.2倍、6.6倍(P0.01) 结论成功建立小鼠睾丸扭转复位模型,TSEG-2表达上调可能与抗氧化酶活性下降、生精细胞凋亡有关。 第三部分睾丸特异性基因TSEG-2在隐睾模型中的表达及其在生精细胞凋亡中的作用 目的进一步探讨睾丸特异表达基因2(testis specific expressed gene 2,TSEG-2)的功能及其在隐睾模型中的表达特点。 方法35只BALB/C小鼠(8周龄)随机分组为单侧手术隐睾组(20只)、假手术组(10只)、空白对照组(5只)。在手术隐睾组中,将右侧睾丸固定于腹壁内侧。real-timePCR法检测TSEG-2基因在隐睾模型中的表达特点。在聚乙烯亚胺(PEI)的介导下,采用睾丸内注射方法,将重组载体pEGFP-TSEG-2(n=5)和空载体(n=5)转染至正常雄性小鼠睾丸,荧光显微镜观测转染效率,TUNEL法检测生精细胞凋亡。 结果原位杂交显示TSEG-2 mRNA表达定位于小鼠睾丸生精小管的精原细胞和精母细胞。与假手术组和对照组比较,隐睾组睾丸组织内TSEG-2表达显著上调(P0.05),生精细胞凋亡比例增高(P0.05)。PEI能有效介导TSEG-2转染至曲精小管,转染1周后生精细胞凋亡显著增多(P0.05)。 结论这些结果提示TSEG-2可能参与了生精细胞的凋亡和隐睾的病理过程。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R341

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 陈道桢;薛文群;龚健;詹惠英;汤月萍;吴高雄;王家俊;;PEI-氧化铁磁性纳米颗粒作为基因载体的实验观察[J];第四军医大学学报;2008年01期
2 王智宇;童强松;曾甫清;刘媛;顾朝辉;郑丽端;蔡嘉斌;蒋国松;;小鼠睾丸新基因TSEG-2的克隆及表达分析[J];中华男科学杂志;2009年02期
3 ;Expression of a novel bHLH-Zip gene in human testis[J];Asian Journal of Andrology;2003年02期
4 ;Gene functional research using polyethylenimine-mediated in vivo gene transfection into mouse spermatogenic cells[J];Asian Journal of Andrology;2006年01期
5 孙杰;刘国华;赵海腾;;别嘌呤醇对睾丸扭转的治疗作用[J];中华小儿外科杂志;2006年06期
6 来利华;姜启英;陈丹;虎义平;余海;王青青;汤谷平;;TAT短肽修饰的聚乙烯亚胺-β-环糊精基因载体[J];浙江大学学报(医学版);2009年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 夏小雨;陈学进;;哺乳动物精子发生中转录调控机制的特点[J];医学分子生物学杂志;2008年01期
2 王保琳;;基因治疗载体的研究进展[J];淮海医药;2011年02期
3 王智宇;童强松;曾甫清;刘媛;顾朝辉;郑丽端;蔡嘉斌;蒋国松;;小鼠睾丸新基因TSEG-2的克隆及表达分析[J];中华男科学杂志;2009年02期
4 林盈;薛恩生;梁荣喜;黄伟钦;余亮;陈舜;俞丽云;林礼务;;实验性睾丸缺血超声表现与别嘌醇药物保护作用的相关性研究[J];中华男科学杂志;2010年12期
5 万磊;安丽梅;夏欣一;;圆头精子症的分子遗传学研究进展[J];中华男科学杂志;2011年10期
6 余振东;蔡志明;唐爱发;桂耀庭;;睾丸特异性新基因TSC23在小鼠和人睾丸组织中的表达分析[J];中国男科学杂志;2007年01期
7 张皓;侯欣欣;张东生;;磁性纳米材料在肿瘤热化疗中的研究进展[J];东南大学学报(医学版);2012年04期
8 张鑫;苗向阳;尹逊河;马艳芳;曲朝杰;张秋婷;;小鼠精子形成各阶段转基因效率的研究[J];生物化学与生物物理进展;2009年08期
9 余振东;唐爱发;桂耀庭;张立兵;张键荣;郭新;蔡志明;;新基因TSBAG的生物信息学分析及其在小鼠睾丸组织中的表达[J];生殖与避孕;2007年01期
10 王炜;朱伟杰;李菁;何锵恒;;氯化镉对大鼠附睾结构及精子的影响[J];生殖与避孕;2007年05期
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 汤育新;人睾丸特异表达基因TDRG1编码蛋白质功能的初步研究[D];中南大学;2010年
2 罗永峰;靶向核酸纳米归巢气雾装置的构建[D];广州医学院;2010年
3 马全红;小鼠精子发生相关基因的克隆及分析[D];中国协和医科大学;2006年
4 姜中武;苹果多倍体育种体系建立及生物学特性研究[D];山东农业大学;2008年
5 周永翠;三个新的精子发生相关基因在人和小鼠睾丸中的表达特征[D];汕头大学;2009年
6 顾朝辉;生物信息挖掘新基因预测平台的建立与TSEG-3的克隆和功能初步研究[D];华中科技大学;2010年
7 任香梅;硒对镉致雄性小鼠生殖毒性的保护作用及其机理的研究[D];南京医科大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 沈健;小鼠精子发生相关蛋白表达谱的构建及蛋白LaminA/C的功能研究[D];南京医科大学;2009年
2 柳丽梅;纳米羟基磷灰石的表面修饰及其细胞相容性的研究[D];浙江理工大学;2010年
3 祁玉娟;Arl3在精子变形过程中的功能研究[D];南京医科大学;2011年
4 陈哲东;纳米羟基磷灰石基因载体的表面修饰及其转染研究[D];中南大学;2011年
5 肖小旺;Clusterin蛋白在男性不育症睾丸组织中的表达及意义[D];中南大学;2011年
6 袁娲;NORPEG基因不同转录本在人睾丸中的表达研究[D];南京医科大学;2005年
7 李岩;NYD-SP6基因在无精症患者和不同年龄段人群睾丸中的表达[D];南京医科大学;2006年
8 左岩;黄芪注射液对大鼠睾丸扭转复位后保护作用的研究[D];河北医科大学;2007年
9 屈旭光;联会复合体相关基因与犏牛雄性不育关系的研究[D];南京农业大学;2008年
10 王智宇;睾丸新基因的克隆及其在隐睾模型中的表达分析[D];华中科技大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 孙杰,刘国华,赵海腾,叶惟靖;睾丸扭转手术复位加重组织损伤[J];伤残医学杂志;2003年04期
2 孙杰,刘国华,沈立松,赵海腾,徐卯升;青春期前睾丸扭转对大鼠生精能力的长期影响[J];中华小儿外科杂志;2001年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李化茂;;超声加热对小鼠睾丸的特定效应[J];国际生物医学工程杂志;1991年03期
2 王小芬,张树来,李厚勇,张卫东,郭启明,史岩;二甲苯对小鼠睾丸毒性作用的研究[J];卫生毒理学杂志;1992年03期
3 沙家豪,周作民,林敏,王黎熔,P·J·O'Shausnnessy;小鼠睾丸雄激素受体mRNA与17α-羟化酶mRNA相关性研究[J];生殖与避孕;1997年06期
4 文夏玲,蔡亚娜,谢宝缪,何惠平;海洛因染毒小鼠睾丸和附睾组织病理学改变[J];卫生毒理学杂志;1999年02期
5 金明华,姜春明,王欣,张晶,刘晓梅,王华,王雯,孙志伟;甲基汞对小鼠睾丸生殖细胞凋亡的作用机制[J];毒理学杂志;2005年S1期
6 杨卫超;左派欣;徐颖;姜红;洪丽华;;普绿通生物蛋白致突变性实验研究[J];中国职业医学;2007年01期
7 李鸿业,刘桂香,李振峰;He-Ne激光照射对小鼠睾丸影响的组织学及组织化学观察[J];中国激光;1991年04期
8 杨荫森,杨维玲,卢刚,蒋博;三硝基甲苯对小鼠睾丸和卵巢形态学影响的研究[J];卫生毒理学杂志;1993年S1期
9 郭国祯,郭鹞;微波照射小鼠睾丸对精子形态和DNA含量的影响[J];中华劳动卫生职业病杂志;1994年01期
10 ;维生素C对小鼠睾丸内放射性核素的防护作用:暗示俄歇效应引起损伤的机理[J];国外医学.放射医学核医学分册;1995年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 尹郸丹;梁英民;韩骅;侯丽宏;王耀春;胡兴斌;张萍;康志杰;时宏伟;;RBP-J与KyoT2真核表达载体的构建与鉴定[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
2 蔺丽慧;崔玉宝;李莉;;Fcγ-Der f2载体构建及融合蛋白表达[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
3 郭鹏;闫承慧;郭亮;康建;韩雅玲;;小鼠E1A激活基因阻遏子RNA干扰表达载体的构建及鉴定[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
4 彭旭;谭江琳;袁顺宗;马兵;贺伟峰;黄正根;程文广;王晓娟;甘成军;胡婕;杨世伟;杨俊杰;陈希炜;胡晓红;张小容;罗高兴;吴军;;HT036是纤维化相关基因P311的相互作用蛋白[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
5 杨英;刘树铮;;pNEgr-mIL-12真核表达载体的构建及其在体外和体内生物学活性的检测[A];中华医学会放射医学与防护学分会第三次全国中青年学术交流会论文汇编[C];2001年
6 高蕾;陈幸华;张曦;彭贤贵;孔佩艳;刘林;刘红;张怡;刘耀;;VCAM-1基因的克隆及VCAM-1-pcDNA3.1(+)真核表达载体的构建[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
7 王郡甫;许晓群;张彩;张建华;高春义;;人白细胞介素21真核表达载体的构建及其在NK92细胞中的表达[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
8 胡敬海;王春喜;;抑癌基因TIP30真核表达载体的构建[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
9 郭鹏;闫承慧;郭亮;康建;韩雅玲;;小鼠E1A激活基因阻遏子RNA干扰表达载体的构建及鉴定[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年
10 魏中南;夏剑波;;乙型肝炎病毒前S2基因克隆及真核表达载体的构建[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;1.3倍乙型肝炎病毒全基因真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的表达[N];中国医药报;2003年
2 张中桥;反义Cortactin基因能抑制肝癌细胞转移[N];中国医药报;2006年
3 张中桥;Survivin是脑胶质瘤基因治疗的良好靶点[N];中国医药报;2006年
4 吴一福;首次成功分离出HPA全长编码基因[N];中国医药报;2005年
5 吴一福;四军医大成功建立HCV多表位基因P815细胞系[N];中国医药报;2006年
6 张中桥;西京医院建立稳定表达MAGE-n细胞系[N];中国医药报;2006年
7 王淑玲;补肾化痰药治疗慢支的机理[N];中国医药报;2003年
8 万同己;乙肝的基因治疗[N];中国医药报;2004年
9 张中桥;可诱导性真核表达载体构建成功[N];中国医药报;2004年
10 吴一福;四军医大首次构建成永生化胚胎肝细胞系[N];中国医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 胡涛;小鼠睾丸特异性表达基因TSEG-2的功能初步研究[D];华中科技大学;2010年
2 胡涛;小鼠睾丸特异性表达新基因TSEG-2的功能初步分析[D];华中科技大学;2010年
3 郭凯文;ASAP3对人肝癌细胞侵袭转移能力的影响[D];华中科技大学;2011年
4 严俊;肝特异表达基因LFIRE-1/HFREP-1的功能研究及Tributyrin在胃癌治疗中应用的初步研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2003年
5 李援亚;水稻根特异表达基因的克隆及启动子元件分析[D];浙江大学;2011年
6 汤育新;人睾丸特异表达基因TDRG1编码蛋白质功能的初步研究[D];中南大学;2010年
7 廖婵;抗人CD45亚类新单抗ZCH-6-3A4识别抗原表位的研究[D];浙江大学;2011年
8 孙宇辉;人Ang-2基因真核表达载体的构建及对宫颈癌肿瘤血管形成的影响[D];吉林大学;2004年
9 朱叶飞;加热致小鼠睾丸生精障碍相关蛋白质及其功能的研究[D];南京医科大学;2006年
10 李健;miR-155真核表达载体的构建及其在胰腺癌中功能的初步研究[D];中国协和医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 拜潇;微囊藻毒素暴露对小鼠睾丸的生理生化影响[D];河南师范大学;2012年
2 张鹏飞;柠檬酸对小鼠睾丸组织抗氧化酶活性的影响[D];河南科技大学;2012年
3 宋晖;KAI1基因真核表达载体的构建及其对卵巢癌细胞侵袭抑制作用的体外研究[D];第四军医大学;2004年
4 左国伟;人乳头瘤病毒11型E6基因的克隆、真核表达及其功能的初步研究[D];重庆医科大学;2005年
5 涂亦娴;猪瘟病毒E2基因的克隆及其DNA疫苗免疫效果的研究[D];新疆大学;2005年
6 周丹;猪细小病毒SC1株VP2基因表达载体的构建及其表达的研究[D];四川农业大学;2005年
7 李一冬;hTERT真核表达载体的构建与表达[D];郑州大学;2005年
8 李强;重症肌无力抗乙酰胆碱受体单链抗体A7基因真核表达载体的构建[D];延边大学;2006年
9 王青;新城疫病毒F基因在真核及原核表达系统中的表达[D];西北农林科技大学;2007年
10 许子志;乳腺癌细胞Id1 miRNA真核表达载体构建转染及对MMP9的影响[D];福建医科大学;2009年
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