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《华中科技大学》 2010年
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姜黄素对多巴胺能细胞的保护作用及其机制的实验研究

崔群力  
【摘要】: 目的探讨姜黄素(Cur)对鱼藤酮(Ro)致PC12细胞损伤的保护作用及其机制。 方法用鱼藤酮建立PC12细胞损伤模型;姜黄素进行干预。用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活力;苏木素、伊红染色观察细胞形态学变化;比色法检测细胞内总超氧化物歧化酶(SOD)的活性;DCFH--DA染色检测细胞内活性氧类物质(ROS)水平;流式细胞术(Annexin-FITC/PI双染法)检测PC12细胞的凋亡。 结果0.5μmol/L—1.0μmol/L姜黄素均可减轻0.1μmol/L鱼藤酮对PC12细胞增殖活力的抑制;明显减轻了细胞损伤的形态学改变;明显增加了PC12细胞内SOD的活性;明显降低了PC12细胞内ROS的含量、明显抑制了鱼藤酮对PC12细胞凋亡的诱导作用。 结论:姜黄素可拮抗鱼藤酮致PC12细胞的损伤,其机制可能与清除细胞内ROS,诱导抗氧化酶的活性有关。 目的:探讨姜黄素(Curcumin)对α-突触核蛋白(α-synuclein)聚集的影响,及其拮抗鱼藤酮(Ro)诱导的PC12细胞损伤的作用机制。 方法:选用大鼠嗜铬细胞瘤株PC12细胞,利用鱼藤酮诱导其损伤建立帕金森病细胞模型,利用姜黄素进行干预;采用MTT法检测细胞活力、荧光酶标仪检测蛋白酶体水解酶活性、Western blotting法检测α-突出核蛋白表达、免疫荧光法检测细胞内α-突出核蛋白聚集、流式细胞仪检测PC12细胞凋亡。 结果:鱼藤酮组PC12细胞活力及蛋白酶体水解酶活性明显降低,α-突出核蛋白表达和聚集以及细胞凋亡率明显增加;经0.5、1.0、5.0、10μmol/L各浓度姜黄素预处理4h后与0.1μmol/L鱼藤酮共同孵育PC12细胞24h,0.5和1.0μmol/L的姜黄素使细胞活力以及蛋白酶体水解酶活性明显升高、α-突出核蛋白的表达和聚集明显减少、细胞凋亡率明显降低;5.0和10μmol/L姜黄素对鱼藤酮的拮抗作用明显减弱,细胞活力和蛋白酶体水解酶活性、以及细胞凋亡率与鱼藤酮组比较均无明显差异。 结论:低浓度姜黄素能够通过诱导PC12细胞蛋白酶体水解酶活性、抑制α-突出核蛋白的表达和聚集,从而拮抗鱼藤酮诱导的PC12细胞的损伤。 目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)通过诱导热休克蛋白(Hsp70)高表达、抑制α-突触核蛋白的异常表达和聚集、促进蛋白酶体系统降解异常α-突触核蛋白(a-synuclein)对多巴胺能细胞的保护作用 方法:选用大鼠嗜铬细胞瘤株PC12细胞,利用鱼藤酮诱导其损伤建立帕金森病细胞模型,利用姜黄素进行干预;采用MTT法检测细胞活力、荧光酶标仪检测蛋白酶体水解酶活性、Western blotting法检测Hsp70和α-突出核蛋白的表达、免疫荧光法检测细胞内Hsp70的表达和α-突出核蛋白的聚集。 结果:鱼藤酮组PC12细胞活力及蛋白酶体水解酶活性明显降低,Hsp70的表达轻度增加、α-突出核蛋白表达和聚集明显增加;经不同浓度姜黄素预处理4h后与0.1μmol/L鱼藤酮共同孵育PC12细胞24h,与鱼藤酮组比较,0.5μmol/L和1.0μmol/L的姜黄素使细胞活力以及蛋白酶体水解酶活性明显升高、Hsp70表达明显升高,α-突出核蛋白的表达和聚集明显减少;5.0μmol/L和10μmol/L姜黄素对鱼藤酮的拮抗作用明显减弱,细胞活力与鱼藤酮组比较均无明显差异(P0.05),胰蛋白酶、多肽-谷氨酰多肽水解酶活性与鱼藤酮组比较均无明显差异(P0.05)、10μmol/L姜黄素组糜蛋白酶样水解酶活性进一步降低,与鱼藤酮组比较有极显著性差异(P0.01)。 结论:低浓度姜黄素能够通过诱导PC12细胞表达Hsp70、诱导蛋白酶体水解酶活性、进而抑制α-突出核蛋白的表达和聚集,从而拮抗鱼藤酮诱导的PC12细胞的损伤。 目的:探讨小胶质细胞在多巴胺能细胞损伤中的作用,以及姜黄素通过抑制小胶质细胞反应保护多巴胺能细胞的机制。 方法:选用大鼠嗜铬细胞瘤株PC12细胞,利用鱼藤酮诱导其损伤建立帕金森病细胞模型,用姜黄素预处理4h的BV-2细胞再经鱼藤酮处理4h后的细胞上清作为条件培养液(Microglia conditioned medium with Curcumin,MCMC),处理PC12细胞,并设空白对照组。应用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞活力;DCFH-DA染色检测BV-2细胞内活性氧类物质(ROS)水平;磷脂结合蛋白(Annexin V)-碘化丙啶(PI)双染色流式细胞仪检测PC12细胞凋亡。Western blotting法检测NADPH氧化酶P47-phox亚基蛋白在BV-2细胞膜上的表达。 结果:与对照组组相比,姜黄素预处理的BV-2细胞,其ROS水平降低(P0.01);受MCMC处理的PC12细胞,细胞活力增加,细胞凋亡率降低(P0.01)。而单独用5nM鱼藤酮作用于PC12细胞,其存活率及凋亡率与空白组相比无明显差别(P0.05)。鱼藤酮诱导BV-2细胞激活后,结合与BV-2细胞膜的NADPH氧化酶P47-phox亚基蛋白明显增加(P0.01),姜黄素预处理使结合与BV-2细胞膜的NADPH氧化酶P47-phox亚基蛋白明显降低(P0.05)。 结论:鱼藤酮激活小胶质细胞NADPH氧化酶产生ROS,损伤多巴胺能细胞。姜黄素通过抑制小角质细胞内NADPH氧化酶的激活,减少ROS的产生,从而保护多巴胺能细胞。
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R285

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