收藏本站
《武汉科技大学》 2016年
加入收藏

丹参通过促进Nrf2表达抑制H_2O_2诱导的心肌细胞氧化损伤

聂琦  
【摘要】:目的:观察丹参对H_2O_2导致的大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用,探讨丹参抗氧化损伤的分子机制。方法:1.建立H_2O_2氧化损伤模型:1)大鼠心肌H9C2细胞加入不同浓度H_2O_2孵育相同时间后进行SRB检测,计算细胞生长抑制率,确定H_2O_2最佳孵育浓度。2)大鼠心肌H9C2细胞加入相同浓度H_2O_2孵育不同时间后进行SRB检测,计算细胞生长抑制率,确定H_2O_2最佳孵育时间。2.建立丹参抗氧化损伤模型:1)大鼠心肌H9C2细胞加入不同浓度丹参孵育相同时间后加入H_2O_2处理,SRB检测计算细胞存活率,确定丹参最佳孵育浓度。2)大鼠心肌H9C2细胞加入相同浓度丹参孵育不同时间后加入H_2O_2处理,SRB检测计算细胞活力,确定丹参最佳孵育时间。3.大鼠心肌H9C2细胞分组处理后进行DAPI染色,显微镜下观察细胞数及细胞核形态变化。4.通过实时荧光定量PCR检测Myocardin mRNA和Nrf2 mRNA的表达情况,观察H_2O_2及丹参处理后大鼠心肌H9C2细胞中Myocardin mRNA和Nrf2 mRNA的表达变化。5.Western Blotting检测Myocardin蛋白和Nrf2蛋白的表达,研究H_2O_2及丹参对大鼠心肌H9C2细胞中Myocardin蛋白和Nrf2蛋白的影响。6.观察Myocardin基因和Nrf2基因对细胞增殖的影响:分别过表达Myocardin基因和Nrf2基因后检测细胞增殖情况;下调Myocardin基因和Nrf2基因后检测细胞增殖情况。7.观察Myocardin对Nrf2表达的影响:通过过表达Myocardin基因和下调Myocardin基因检测Nrf2基因mRNA和蛋白的表达情况。结果:1.200μM H_2O_2孵育24h最接近半数致死量,此时显微镜下观察细胞数较对照组明显减少,细胞核肿胀、固缩、碎裂多见,为最佳H_2O_2氧化损伤模型。2.0.15mg/m L丹参预孵育1h可明显减轻H_2O_2所致心肌氧化损伤,此时显微镜下观察丹参+H_2O_2组细胞数较H_2O_2组增多,细胞核均一性以及细胞核肿胀、固缩、碎裂等状况均较H_2O_2组有好转。3.H_2O_2抑制Myocardin mRNA及蛋白的表达,增加Nrf2 mRNA及蛋白的表达;而丹参进一步下调Myocardin mRNA及蛋白的表达,同时明显上调Nrf2 mRNA及蛋白的表达。4.过表达Myocardin基因后检测相对活细胞数较对照组减少,而下调Myocardin基因后相对活细胞数较对照组增多;过表达Nrf2基因后检测相对活细胞数较对照组增多,而下调Nrf2基因后相对活细胞数较对照组减少。5.过表达Myocardin基因后检测Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白表达出现明显下调;而下调Myocardin基因后检测Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白表达明显上调。结论:1.H_2O_2造成心肌细胞氧化损伤可激活Nrf2主导的抗氧化损伤信号通路。2.丹参能抑制H_2O_2导致的氧化损伤,其作用机制可能是通过下调Myocardin基因表达及进一步促进Nrf2表达实现的。3.Nrf2促进细胞增殖,Myocardin抑制细胞增殖,二者对细胞增殖表现为相反的作用。4.Myocardin基因可能调控Nrf2基因的表达。
【关键词】:丹参 心肌细胞 H9C2细胞 过氧化氢(H_2O_2) Myocardin Nrf2
【学位授予单位】:武汉科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R285.5
【目录】:
  • 摘要4-6
  • Abstract6-12
  • 1、前言12-16
  • 2、实验材料与方法16-25
  • 2.1 实验细胞16
  • 2.2 主要质粒16
  • 2.3 实验试剂16-18
  • 2.3.1 大鼠心肌H9C2细胞培养相关试剂16
  • 2.3.2 建立H_2O_2氧化损伤及丹参抗氧化损伤模型相关试剂16-17
  • 2.3.3 DNA和RNA提取、PCR实验相关试剂17
  • 2.3.4 Western bloting法相关试剂及相关溶液配制17-18
  • 2.3.5 质粒转染相关试剂及配制18
  • 2.3.6 细胞染色相关试剂及配制18
  • 2.4 实验仪器18
  • 2.5 实验方法18-25
  • 2.5.1 细胞培养18-19
  • 2.5.2 细胞计数19
  • 2.5.3 实验技术19-23
  • 2.5.4 实验分组23
  • 2.5.5 实验步骤23-24
  • 2.5.6 统计学分析24-25
  • 3、结果25-37
  • 3.1 建立H_2O_2氧化损伤模型25-27
  • 3.1.1 确定H_2O_2孵育浓度25-26
  • 3.1.2 确定H_2O_2孵育时间26-27
  • 3.2 建立丹参抗氧化损伤模型27-28
  • 3.2.1 确定丹参孵育浓度27
  • 3.2.2 确定丹参孵育时间27-28
  • 3.3 H_2O_2氧化损伤及丹参抗氧化损伤过程中大鼠心肌H9C2细胞数及细胞核形态学改变28-29
  • 3.4 检测H_2O_2及丹参对大鼠心肌H9C2细胞中Nrf2 mRNA的影响29-30
  • 3.5 检测H_2O_2及丹参对大鼠心肌H9C2细胞中Nrf2蛋白的影响30
  • 3.6 Nrf2基因对细胞增殖的影响30-31
  • 3.7 Myocardin基因与氧化损伤及Nrf2基因的关系31-37
  • 3.7.1 检测三组细胞Myocardin m RNA的变化31-32
  • 3.7.2 检测H_2O_2及丹参对大鼠心肌H9C2细胞中Nrf2蛋白和Myocardin蛋白的影响32
  • 3.7.3 过表达Myocardin基因抑制细胞增殖32-33
  • 3.7.4 下调Myocardin基因促进细胞增殖,而下调Nrf2基因抑制细胞增殖33
  • 3.7.5 过表达Myocardin基因引起Nrf2 mRNA表达下调33-34
  • 3.7.6 Myocardin基因下调引起Nrf2基因mRNA表达上调34-35
  • 3.7.7 过表达Myocardin基因引起Nrf2基因蛋白表达下调35-36
  • 3.7.8 Myocardin基因下调引起Nrf2基因蛋白表达上调36-37
  • 4、讨论37-41
  • 5、结论与展望41-42
  • 致谢42-43
  • 参考文献43-47
  • 文献综述 Keap1-Nrf2-ARE通路与氧化应激相关性疾病47-62
  • 一、Keap1-Nrf2-ARE通路的结构与功能特点47-50
  • 1、Keap1结构与功能47-48
  • 2、Nrf2结构与功能48
  • 3、ARE结构与功能48-49
  • 4、Keap1-Nrf2-ARE通路49-50
  • 二、Keap1-Nrf2-ARE通路与氧化应激相关性疾病的关系50-55
  • 1、脓毒症50
  • 2、心肌缺血再灌注损伤50
  • 3、肿瘤50-51
  • 4、神经系统病变51-52
  • 5、糖尿病52
  • 6、紫外线致皮肤氧化应激损伤52-53
  • 7、肝脏疾病53-55
  • 参考文献55-62
  • 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文62-63
  • 附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目63

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘力,庄志雄,马涧泉;DNA氧化损伤的修复及其与致癌的关系[J];中华劳动卫生职业病杂志;1999年03期
2 杨冬梅,于涛,陶恒沂;细胞外超氧化物歧化酶在有关氧化损伤疾病中的作用[J];中华航海医学与高气压医学杂志;2005年03期
3 农清清;蓝勇波;竹内亨;张志勇;何敏;;不同方法检测微囊藻毒素-LR致DNA氧化损伤[J];中国热带医学;2008年09期
4 葛一蒙;;浅谈几种中药对肝氧化损伤的保护作用[J];黑龙江科技信息;2013年02期
5 黄碧霞;阮迪云;林淑钦;陈树喻;施丽君;;铅致氧化损伤中的锌代谢变化[J];微量元素;1991年01期
6 钟进义,孙丰运,张燕滨;硒对DNA氧化损伤的防护作用研究[J];中国公共卫生;1997年09期
7 宫芸芸;氧化损伤与癌症的发生和预防[J];国外医学(卫生学分册);2000年01期
8 朱茂祥,杨陟华,龚诒芬,陆颖,曹珍山;辐射诱发细胞内活性氧增高与DNA氧化损伤研究[J];辐射研究与辐射工艺学报;2001年04期
9 井军虎;李立宇;;氧化损伤在慢性阻塞性肺疾病中的作用机制研究进展[J];实用心脑肺血管病杂志;2010年12期
10 柳虎军;王晓辉;罗石猛;;线粒体与氧化损伤[J];疾病监测与控制;2013年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈芝兰;吕美玲;庄国强;汪海林;;对氧化损伤敏感的细菌传感器的研究[A];中国化学会第27届学术年会第02分会场摘要集[C];2010年
2 李芸;罗云敬;王云海;钟儒刚;;过亚硝酸根对DNA氧化损伤及其抑制作用研究[A];第二届全国环境化学学术报告会论文集[C];2004年
3 孙鲜策;朴丰源;刘爽;;抗坏血酸对染砷小鼠肝脏氧化损伤拮抗作用[A];中国环境诱变剂学会第14届学术交流会议论文集[C];2009年
4 黄琰霞;牛膺筠;吴松兆;宋丽莉;尤怡;魏晓月;王永淑;;人视网膜色素上皮细胞氧化损伤线粒体机制的探讨[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
5 倪文庆;黄越;王宵玲;张竞文;吴库生;;电子垃圾拆解区新生儿多种重金属暴露及其DNA氧化损伤[A];中国毒理学会第六届全国毒理学大会论文摘要[C];2013年
6 陈昊;吴雄飞;;缺氧、氧化损伤后培养人肾小管上皮细胞能量代谢及细胞骨架改变的实验研究[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
7 杨鋆;洪峰;张爱华;;燃煤氟污染与砷对暴露人群肝功能及氧化损伤交互作用[A];中国毒理学会第六届全国毒理学大会论文摘要[C];2013年
8 霍艳英;段瑞峰;苟巧;胡迎春;李刚;吴德昌;周平坤;;抑癌基因PTEN对细胞内氧化损伤防御体系的影响及机制[A];中国毒理学会第二届全国中青年学者科技论坛会议论文集[C];2007年
9 廖伟棠;刘伟;纪旻辉;徐锡金;霍霞;;电子垃圾拆解区重金属铅、镉暴露儿童DNA氧化损伤修复基因hOGG1表达水平的研究[A];广东省环境诱变剂学会、广东省预防医学会卫生毒理专业委员会2010年学术会议资料汇编[C];2010年
10 李翠平;汪海林;;量子点结合毛细管电泳-激光诱导荧光检测DNA氧化损伤[A];中国化学会第29届学术年会摘要集——第20分会:环境与健康[C];2014年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 张中桥;CBP技术可减轻MODS患者的氧化损伤[N];中国医药报;2007年
2 马冠生 胡小琪 李艳平;蔬菜水果四大保健作用[N];健康报;2005年
3 市科技局 市富硒食品产业办;中国硒谷 绿色安康[N];安康日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王茜;苯酚对多刺裸腹溞生长繁殖代谢与氧化损伤的影响[D];山西大学;2014年
2 张黎;玉米幼芽提取物对皮肤氧化损伤的保护作用及其机制研究[D];西北农林科技大学;2007年
3 宗万松;环境氧化应激诱发蛋白质(多肽)氧化损伤评价新方法的研究[D];山东大学;2011年
4 刘志明;广西三纬度地区人群AFB_1暴露及其与DNA氧化损伤和修复关系的研究[D];广西医科大学;2013年
5 于珊珊;DNA氧化损伤修复反应体系及其对细胞寿命影响机制初探[D];山东大学;2009年
6 冯春燕;植物雌激素保护氧化损伤的人晶状体上皮细胞及其线粒体蛋白质组学机制研究[D];福建中医药大学;2012年
7 葛亚坤;内皮氧化损伤体外分析系统的建立及在药效评价中的应用[D];浙江大学;2009年
8 程秋芳;氧化损伤与白内障[D];中国协和医科大学;1995年
9 杨洁;内皮细胞EA.hy926氧化损伤及药物保护的脂质组学研究[D];天津大学;2012年
10 汪朝阳;促红细胞生成素抑制氧化损伤诱导RPE凋亡及其机制[D];浙江大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 仲昭财;黄曲霉毒素b1对肝细胞L-02氧化损伤及营养干预研究[D];南京理工大学;2015年
2 张丹梅;饮水铬暴露对人体健康危害及其氧化损伤影响的调查研究[D];宁夏医科大学;2015年
3 赵兆;葡萄原花青素B2抑制RPE细胞光氧化损伤的研究[D];上海交通大学;2015年
4 蒿亭凤;火腿水提物对氧化损伤修复功能作用的研究[D];上海应用技术学院;2015年
5 张园园;REGγ在氧化蛋白降解中的作用及其相关靶蛋白研究[D];华东师范大学;2014年
6 吴芹瑶;茶多酚对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护研究[D];福建农林大学;2016年
7 魏宏儒;阿魏酸对脑微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用[D];广州中医药大学;2016年
8 李利忠;PM2.5致人脐静脉内皮细胞氧化损伤及白藜芦醇的干预效应研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2016年
9 华秋翰;PM_(2.5)致人支气管上皮细胞及C57BL/6小鼠氧化损伤的初步研究[D];南京医科大学;2016年
10 吴道兵;SPATA12基因在氧化损伤中的作用及机制[D];湖南大学;2016年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026