收藏本站
《华中农业大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

金黄色葡萄球菌肠毒素B作为免疫佐剂的研究

周晓芬  
【摘要】: 动物疫病的频发给养殖业发展造成了困扰,尤其是病毒性疫病缺少有效的治疗,积极的免疫预防是不可或缺的。目前畜禽用的疫苗有各种类型,包括很多新型疫苗,如亚单位疫苗,重组疫苗和合成多肽疫苗等,但此类疫苗免疫原性较弱,单独免疫难以达到有效的免疫效果,开发活性高而副作用低的新型免疫佐剂的研究日益迫切。 佐剂是指与抗原同时或预先应用,能增强机体针对抗原的免疫应答能力,提高免疫效果的物质;目前研究的佐剂有上百种,其功能主要是增强机体应答、减少抗原接种剂量和接种次数、促进疫苗在免疫应答能力弱的群体中的免疫效果、加快免疫应答的速度和延长持续时间等,具备这种免疫功能的物质都有成为免疫佐剂的潜力。 金黄色葡萄球菌分泌的肠毒素B(SEB)是一种具有超抗原性质的外毒素,具有MHC结合的非限制性;可激活外周血T细胞,调节NK细胞以及刺激淋巴细胞产生TFN-α和活化Thl细胞等功效。能够刺激T细胞活性,提高机体免疫水平,尤其是细胞免疫水平。SEB非特异性地激活免疫细胞,引起众多细胞因子产生的能力使其具备成为免疫佐剂的潜力。本课题的研究内容主要包括: 根据SEB DNA序列设计合成了一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌S6株基因组为模板,采用PCR方法扩增了SEB基因并克隆到pMD18-T载体,对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定,结果表明该基因全长720 bp,与已报道的PM36株序列同源性达100%。构建了原核表达质粒pKG-SEB和pET-28a-SEB,并分别在大肠杆菌中进行了高效表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析,结果分别出现了与预期分子量大小一致的54 KD和28 KD的蛋白条带,Western-blotting分析表明表达的融合蛋白产物均具有良好的生物学活性,为今后进一步的研究奠定了坚实基础。 将含有禽流感病毒H5亚型HA1的原核表达载体pKG-HA1在大肠杆菌中进行诱导表达,对表达产物上清及包涵体进行SDS-PAGE电泳分析,出现了与预期融合蛋白GST-HA1分子量大小一致的蛋白条带约60 KD,且目的蛋白多以包涵体形式存在。 本实验采用几个浓度的重组SEB和标准SEB分别与AIV H9/NDV二联灭活苗免疫两周龄艾维因肉鸡,通过对抗体滴度及淋巴细胞活性的测定反映SEB的免疫增强效果。实验数据显示重组SEB按5μg/只的剂量免疫肉鸡时有较好的免疫增强效果;在免疫前期SEB免疫组较疫苗对照组抗体效价增长快,7d和14 d时,重组SEB中剂量组抗体效价比疫苗对照组高约2.0个滴度,到28 d时,仍比疫苗对照组抗体效价高约1.5个滴度,统计分析表明SEB免疫组的效价显著高于疫苗对照组(P0.05),重组SEB中剂量组与其他SEB免疫组的效价均有显著差异(P0.05);淋巴细胞活性在免疫后15d达最高,重组SEB中剂量组比疫苗对照组高约2.5倍,统计分析差异显著(P0.05),到25 d时差异减小但仍显著。 将重组SEB按5μg/只的剂量分别与AIV H5灭活苗、重组蛋白GST-HA1免疫雏鸡,同时设各对照组,实验数据显示重组SEB对灭活苗及重组亚单位苗的免疫都起到了增强效果,其中疫苗和SEB免疫组的抗体效价显著高于疫苗免疫组和疫苗空载免疫组(P0.05),HA1和SEB免疫组的抗体效价也显著高于HA1免疫组(P0.05)。 SEB作为一种超抗原具有超强的免疫激活能力,本实验通过三次动物实验优化了SEB较好发挥免疫效果时的免疫剂量,实验表明适当剂量的SEB可增强机体对疫苗的免疫应答,无论是体液免疫还是细胞免疫。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R392

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李晋涛,吴玉章;转基因植物疫苗研究进展[J];第四军医大学学报;2001年S1期
2 孙永科,王云峰,杨增岐,童光志;禽痘病毒分子生物学特性及在哺乳动物中的应用[J];动物医学进展;2004年05期
3 周红蕾;李春玲;王贵平;侯加法;;脂质体作为疫苗免疫佐剂的应用研究进展[J];动物医学进展;2006年02期
4 姜建波;提金凤;李志杰;;新型疫苗研究概况[J];动物医学进展;2007年01期
5 徐冰;粘膜途径疫苗接种的免疫调节剂和送递系统(上)[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2002年01期
6 郭淑玲;新型免疫佐剂及其作用机理[J];国外医学.药学分册;1995年06期
7 黄常新,王青青;超抗原的免疫功能及其作用机制研究现状[J];国外医学(免疫学分册);2003年06期
8 王小红;谢笔钧;史贤明;;金黄色葡萄球菌B型肠毒素的构象研究[J];现代食品科技;2008年04期
9 沈咏舟,谢三星,魏建忠,曾明华;免疫佐剂和免疫调节剂的研究近况[J];吉林畜牧兽医;1996年04期
10 金璐娟,金宇龙,王全民;动物疫苗的种类及其评价[J];吉林畜牧兽医;2003年07期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王占东;王小玲;陈砚凝;王占红;杨会钗;王永军;吴国祥;;树突状细胞与胃间质瘤相关性的探讨[J];癌变.畸变.突变;2006年01期
2 官杰;吴艳敏;王慧;钱丽丽;李殿俊;;壳寡糖协同双歧杆菌对荷瘤鼠免疫功能的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年06期
3 石毅;;核酸疫苗的研究进展[J];安徽农业科学;2006年04期
4 玄红专;桑青;沈保涛;;蜂花粉、蜂胶、蜂王浆、蜂蜜抗氧化作用的研究[J];安徽农业科学;2008年03期
5 陈国良,李晓山,单菁萱,盛晓蓉;纳米级二氧化硅N-1、N-2抗疱疹病毒2型效果的实验观察[J];安徽医学;2002年06期
6 刘青云;徐先祥;;蜂胶的药理作用研究进展[J];安徽医药;2007年01期
7 赵成;李秀翠;王忠明;刘桂荣;;同步放化疗联合香菇多糖对晚期非小细胞肺癌患者免疫功能影响及疗效的临床研究[J];安徽医药;2011年11期
8 韩妙君,韩冷;高半胱氨酸膳食对小鼠生长和免疫力的影响[J];氨基酸和生物资源;2004年02期
9 李文艺;;论新型疫苗的研究概况与进展[J];现代农业科技;2009年05期
10 郜世隽;林晨;;超抗原及其增强疫苗免疫效应的意义[J];癌症进展;2008年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨忠东;王石磊;许文婷;李冬梅;;禽流感H5N1灭活疫苗与不同纳米化佐剂联合免疫研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
2 赵凤;曲行光;吕学娜;张光辉;满朝新;姜毓君;;原料乳中金黄色葡萄球菌生长模型的建立[A];中国奶业协会年会论文集2009(下册)[C];2009年
3 方忠意;崔保安;;动物基因工程疫苗研究进展[A];新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会论文集[C];2010年
4 黄达娜;吴少庭;袁仕善;张仁利;高世同;耿艺介;;弓形虫表面抗原SAG1真核表达重组质粒的构建与表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
5 张勇;周阿高;孔德云;张惠珍;王树军;李伟毅;葛海良;蒉纲;任秋华;毛旭明;;中药攻毒方对H22肝癌小鼠抑瘤及免疫调节的机理研究[A];第三届全国中医药免疫学术研讨会论文汇编[C];2006年
6 陈莹莹;金鑫;娄安钢;任春雨;费景春;车达;;细菌性疾病抗原分析的研究进展[A];低碳经济与科学发展——吉林省第六届科学技术学术年会论文集[C];2010年
7 来琳琳;黄婷婷;张景海;宋永波;;转基因植物生产药用蛋白研究概述[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
8 张天笑;王秀利;袁野;;DNA疫苗佐剂研究进展[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
9 张小燕;潘志明;胡青海;胡茂志;孙林;李玉君;董慧;单艳菊;张成全;白海;焦新安;;鸡CD3分子单克隆抗体及其免疫生物学特性[A];中国家禽业——机遇与挑战——第十三次全国家禽学术讨论会论文集[C];2007年
10 赵莉;张壮志;石保新;古努尔·吐尔逊;王进成;张文宝;阿布利兹;阿依努尔;阿布里克木;阿不都;张玲;崔德胜;艾尔肯;;用ELISA方法检测EgM家族蛋白免疫犬特异性抗体变化情况[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 许宁;~(125)I标记抗EGFR全人源Fab及其在肿瘤分子影像中的应用[D];南京医科大学;2009年
2 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
3 柳风祥;中药提取物免疫调节作用的研究及多糖的提取分离鉴定和分子量测定[D];山东农业大学;2009年
4 郭宪;抑制素基因工程疫苗的研究与应用[D];甘肃农业大学;2010年
5 王燕;两株海洋病原菌的分离鉴定、致病机理研究及三株海洋新菌的分类鉴定[D];中国海洋大学;2010年
6 韩瑞玲;鱼精蛋白包覆PLGA纳米粒用于疫苗载体的初步研究[D];华中科技大学;2010年
7 刘春;梅毒免疫相关基因的单核苷酸多态性研究[D];北京协和医学院;2010年
8 熊义;IRES调控α-干扰素的抗FMDV研究[D];武汉大学;2009年
9 张德庆;C3d分子佐剂核酸疫苗的构建与免疫效果研究[D];山东农业大学;2011年
10 陈克研;猪血凝性脑脊髓炎免疫层析检测试纸及其灭活疫苗的研制[D];吉林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 梁斌;一种能同时检测金黄色葡萄球菌A型和B型肠毒素单克隆抗体的制备及特性分析[D];华中农业大学;2010年
2 任静晓;炭疽杆菌A16R免疫蛋白质组学的研究[D];华中农业大学;2010年
3 周勇;草鱼出血病转基因植物疫苗表达载体的构建[D];华中农业大学;2010年
4 王云;鸡胸腺发育形态学研究[D];华中农业大学;2010年
5 刘欣;生长抑素DNA免疫对小鼠体组织的影响及表达产物的分布规律[D];华中农业大学;2010年
6 孟睿;重组全长副肌球蛋白在小鼠与水牛中杭日本血吸虫感染的保护力研究[D];南京医科大学;2009年
7 王骏俊;鸡血清IgG的纯化及其单抗制备与鉴定[D];安徽农业大学;2010年
8 高海霞;中草药添加剂对香猪生长性能、肉品质及血液生化指标的影响[D];甘肃农业大学;2010年
9 刘莉;HSV-2 gD模拟抗原表位、IL-18重组核酸疫苗的构建及免疫效果观察[D];泰山医学院;2010年
10 应巧玲;海鳗脱脂及抗氧化技术的研究[D];浙江工商大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 柳钟勋,左增艳,林赴田,于锋,许津,宋坤改,刘海群;ASDP/ASDE3作为乙型肝炎基因工程疫苗新型复合佐剂的效果及安全性[J];病毒学报;1992年04期
2 乔彦良,孙爱玉,李桂华,赵金东,郭步术,遇欣,盛英霞,杨汉春;西咪替丁对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响[J];山东家禽;2002年01期
3 王传强;马保臣;秦卓明;袁小远;;疫苗佐剂的研究进展[J];家禽科学;2006年07期
4 张国红,王刚,吴江;诺贝脂质体注射液的临床应用研究[J];当代畜牧;2002年11期
5 历风元,吴鄂生,胡成平,杨红忠,张卿,欧阳取长;金黄色葡萄球菌DNA体内抗肿瘤研究[J];中国医师杂志;2004年06期
6 陈吉祥,薛飞群,李广林,赵荣材,于康震,陈化兰,陈洪岩,刘胜旺;CTAB脂质体介导鸡新城疫病毒核酸免疫研究[J];动物医学进展;2001年01期
7 孙永科,王云峰,杨增岐,童光志;禽痘病毒分子生物学特性及在哺乳动物中的应用[J];动物医学进展;2004年05期
8 王武军,黄一帆;免疫调节剂研究进展[J];福建畜牧兽医;2001年06期
9 柯惟中,余多慰;胰蛋白酶溶液的激光拉曼谱[J];光散射学报;1996年03期
10 龚非,姜述德;可生物降解微球作为口服疫苗载体的研究进展[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2000年05期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 张绍杰;表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];中国农业科学院;2000年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 梁受洪;;免疫佐剂在预防小儿呼吸道感染中的应用[J];河北医药;1980年06期
2 李冬;CpG DNA:一种新型免疫佐剂[J];生命的化学;1999年05期
3 金博,Richard Y.-H.Wang,程留芳,裘奇,史维国;免疫佐剂对不同剂量丙肝核酸疫苗效果的影响[J];世界华人消化杂志;2005年12期
4 曾超英;罗芳洪;黄萍;;激光免疫疗法对小鼠H22肝癌的长期抗瘤效应[J];中国激光医学杂志;2007年01期
5 赵占中;薛飞群;;DNA疫苗的免疫佐剂[J];中国动物传染病学报;2010年02期
6 金博,程留芳,孙涛;剂量和佐剂对丙型肝炎病毒脱氧核糖核酸疫苗免疫效果的影响[J];海军总医院学报;2005年03期
7 徐岗村;杜联峰;孙万邦;;壳聚糖的理化性及其作为免疫佐剂的研究进展[J];中国新技术新产品;2008年16期
8 赵爱华;李凤祥;贾淑珍;寇丽杰;乔来艳;王国治;;BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫佐剂作用[J];中国医药生物技术;2010年02期
9 张灵芝,董淑云,唐朝枢;脂质体——一种理想的免疫佐剂[J];国际免疫学杂志;1992年03期
10 汪江;细胞因子免疫佐剂作用研究[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1995年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 纪丽丽;戴永海;王中杰;;中草药免疫佐剂的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
2 谭兵;王红宁;;鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对IBV DNA疫苗的免疫佐剂效应研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
3 常维山;柴同杰;;CpG-ODN免疫佐剂在动物上的应用与研究进展[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
4 邹永新;肖智远;李剑荣;刘思伽;;复合中药免疫佐剂对鸽禽Ⅰ型副粘病毒病疫苗免疫效果的测定[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年
5 李茂;刘天强;肖丹;史子学;;兽用疫苗常用免疫佐剂的概况和发展趋势[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
6 崔保安;魏战勇;杨明凡;张素梅;;DNA疫苗免疫佐剂的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
7 马艳琴;聂向庭;;免疫佐剂CpG寡脱氧核苷酸对猪免疫学作用的研究[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
8 闵秀全;郑伟清;胡茜;吴霞;刘红菊;卢建民;李宏;;维生素A作为免疫佐剂用于提高儿童免疫功能的临床研究[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
9 杨小梅;张辉华;谢青梅;马静云;罗艳娜;毕英佐;曹永长;;鸡β-防御素-1对鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因DNA疫苗的免疫佐剂作用[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(下册)[C];2010年
10 孙洪范;杨菁;王满燕;唐丽娜;武莉;宋存先;;PLGA微囊免疫佐剂作用机理体外研究[A];中国生物医学工程学会第六次会员代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前6条
1 庄愉;基因疫苗研究的第三次革命[N];医药经济报;2001年
2 北京兽药研究所 蒋桃珍;脂质体佐剂的应用前景[N];中国畜牧水产报;2000年
3 侯嘉 何新乡;硒的神奇功能[N];中国食品质量报;2003年
4 ;黑色素瘤抗原特异性疫苗研究进展[N];中国医药报;2003年
5 张文;广西研制成功抗癌基因治疗疫苗[N];科技日报;2004年
6 记者 张桂敏;饲料添加剂推出新品[N];农资导报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 宋晓明;不同来源人参皂甙免疫佐剂作用的研究[D];浙江大学;2009年
2 李丽杰;中链脂肪酸甘油三酯作为免疫佐剂的免疫效果的研究和应用[D];中国海洋大学;2013年
3 史喜菊;牛IFN-α/γ基因的克隆、表达及重组蛋白的应用研究[D];中国农业大学;2004年
4 聂清;汉坦病毒核酸疫苗的研究[D];中国医科大学;2006年
5 孙红祥;远志中皂苷类免疫佐剂活性成分的分离及活性评价[D];浙江大学;2005年
6 李艳佳;HPV16E7DNA疫苗和IL-15重组质粒的联合免疫作用及对树突状细胞表面分子的表达和功能的影响[D];河北医科大学;2005年
7 谢勇;桔梗中皂苷的免疫佐剂活性研究[D];浙江大学;2008年
8 李公美;吉林白鹅α/γIFN原核表达、抗病毒活性及其核酸疫苗免疫佐剂作用的研究[D];吉林农业大学;2013年
9 张巧玉;鼠精子抗原Sp17与IL-5融合蛋白的克隆表达及其免疫性避孕效研究[D];第三军医大学;2004年
10 肖琛闻;木鳖子皂甙及油佐剂混合物的免疫佐剂作用研究[D];浙江大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李雪洁;交联型羧甲基壳聚糖的制备及其生物相容性与免疫佐剂活性研究[D];中国海洋大学;2008年
2 刘艳环;微生物来源CpG疫苗佐剂筛选研究[D];中国农业科学院;2006年
3 孙欣;IL-15表达质粒联合HPV基因疫苗诱导细胞免疫应答的实验研究[D];河北医科大学;2004年
4 徐巨;中药有效成分复方对猪口蹄疫疫苗的佐剂效果及相关机理研究[D];四川农业大学;2009年
5 周怀瑜;弓形虫表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因在毕赤酵母中的分泌表达、纯化与鉴定[D];山东大学;2005年
6 计越;口蹄疫病毒基因重组疫苗的实验免疫研究[D];吉林大学;2007年
7 孟秀彦;泰山松花粉对鸡兔免疫增强作用的研究[D];山东农业大学;2007年
8 李清;鱼腥草素钠对鸡BSA抗体及灭活菌苗免疫鸭的影响[D];西南大学;2008年
9 杨青;药用真菌杨树菇中免疫佐剂效应组分的鉴定[D];华中农业大学;2010年
10 潘杭君;三七总皂苷的免疫佐剂活性成分研究[D];浙江大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026