收藏本站
《华中农业大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

dsRNA介导的番木瓜环斑病毒(PRSV)的抗病性研究

张帆  
【摘要】: 番木瓜环斑病毒病是番木瓜的第一大病毒性病害,到目前为止,还没有完全根治该病的方法,只能采取以栽培措施为主的综合防治措施。植物基因工程的发展为植物抗病毒的研究提供了一条新的途径,尤其是随着RNAi领域研究的快速发展,利用反向重复表达载体对植物进行遗传转化成为研究植物抗病毒研究的一大热点。将来源于病毒本身的基因导入病毒的植物寄主,均能够使植物获得一定的抗病性。 本研究以烟草、番木瓜和拟南芥作为实验材料,利用农杆菌介导法将外壳蛋白CP基因反向重复表达载体pHellsgate12-CPIR导入到受体材料中,并分析了转基因的抗病性,主要研究结果如下: (1)选取实验室保存的pHG12-CPIR转基因烟草和野生型烟草进行摩擦接种攻毒试验,同时设置对照处理。接种3d后观察表型,发现各个处理之间,接种叶并无明显表型变化。 RT-PCR检测结果显示,在接种PRSV后,野生型烟草中有高浓度的病毒CPmRNA的积累,而转pHG12-CPIR基因烟草中几乎没有病毒CP mRNA的积累,说明转pHG12-CPIR基因烟草中已启动RNAi机制抑制了CP基因的表达。 (2)选取番木瓜苗进行农杆菌瞬时表达实验,对子叶注射含有pHG12-CPIR载体的农杆菌,并设置对照。4d后子叶接种PRSV。在接种病毒7 d后对顶生新叶进行症状观察发现,不接种农杆菌或接种农杆菌GV3101后,顶生新叶产生明显的枯斑且叶片有邹缩、褪绿的现象,而接种农杆菌pHG12-CPIR-GV3101后无明显表型变化。说明后者对PRSV已产生抗性。 RT-PCR检测结果显示,在接种PRSV后,不接种农杆菌或接种农杆菌GV3101的番木瓜内有高浓度的病毒CP mRNA的积累,而接种农杆菌pHG12-CPIR-GV3101的番木瓜内几乎没有病毒CP mRNA的积累,说明接种农杆菌pHG12-CPIR-GV3101的番木瓜内已启动RNAi机制抑制了CP mRNA的表达。 (3)采用花浸法对拟南芥进行pHG12-CPIR载体的遗传转化,对T1代种子进行抗性筛选获得3株阳性苗。提取基因组DNA后用CP基因和NPTⅡ基因特异引物进行PCR检测均有目的扩增条带。3株阳性苗分别用pHG12-1、pHG12-2和pHG12-3表示。而后对这3株阳性苗分单株收取T2代种子。抗性筛选后进行阳性率统计发现,pHG12—1和pHG12—3 T2代种子筛选的阳性率均接近75%,说明pHG12—1和pHG12—3 T1代阳性苗为杂合体。而pHG12—2 T2代种子筛选的阳性率接近于100%,说明pHG12—2 T1代阳性苗为纯合体。对pHG12—2T2代移栽阳性苗随机取6株提取基因组DNA后用CP基因和NPTⅡ基因特异引物进行PCR检测均有目的扩增条带。 选取播种30 d的pHGl2—2 T2代阳性苗和野生型拟南芥的轮状叶进行攻毒试验。7d后对非接种轮状叶进行表型观察发现,接种了PRSV的野生型拟南芥的非接种轮状叶有变黄的特征,而接种了PRSV的转基因拟南芥的非接种轮状叶无明显表型变化。 RT-PCR检测结果显示,在接种PRSV后,野生型拟南芥中有高浓度的病毒CP mRNA的积累,而转pHG12-CPIR基因拟南芥中几乎没有病毒CP mRNA的积累,说明转pHG12-CPIR基因拟南芥中已启动RNAi机制抑制了CP基因的表达。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S436.67

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 彭世清,陈守才;拟南芥SHI基因在烟草中的表达和矮化、延迟开花的烟草植株的获得[J];应用与环境生物学报;2005年04期
2 孟成民;曹必好;刘娟旭;雷建军;;蔬菜作物原位转基因技术研究进展[J];中国蔬菜;2005年12期
3 王翠艳;丁东风;于小菊;韦珊;魏爱民;杜胜利;李明刚;;用floral dip法对黄瓜遗传转化的初步研究[J];生物学通报;2008年02期
4 王琢玉;李振波;阳永学;黄军艳;董彩华;刘胜毅;;油菜BnROP1同源基因沉默导致拟南芥雄性不育[J];中国油料作物学报;2011年01期
5 姚焱;王小兰;刘顺枝;汪珍春;黄富财;邱显程;田长恩;;转基因油菜种子抗性筛选中内生菌的鉴定与控制[J];种子;2009年04期
6 石磊,韩燕来,徐芳森,孟金陵,王运华;两种生态型拟南芥对缺硼反应差异的初步研究[J];山地农业生物学报;2004年01期
7 刘瑞娟;王海庆;沈裕虎;;拟南芥动蛋白AtOvKLP的序列分析及原核表达[J];甘肃农业大学学报;2010年03期
8 孙佃臣;沙爱华;单志慧;陈李淼;周新安;;拟南芥pre-miR399b植物表达载体的构建[J];华北农学报;2010年06期
9 杨剑平;拟南芥种子脱水过程中ABA作用的研究综述[J];湖北农学院学报;1995年02期
10 樊妙姬;克隆包含以拟南芥为寄主的甘蓝黑腐病菌Xcc1067无毒基因的DNA片段[J];广西农业生物科学;1996年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 胡远;赵德刚;;农杆菌介导拟南芥FAD8基因遗传转化小油桐的研究[A];全国“植物生物技术及其产业化”研讨会论文摘要集[C];2007年
2 刘兴娜;白庆荣;高洁;;农杆菌介导hrpZ_(Psg12)基因转化烟草的研究[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
3 李宏宇;鲁国东;王明海;郑武;王宗华;;农杆菌介导获得稻瘟病菌突变体[A];中国植物病理学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2002年
4 赵福永;李云锋;徐培林;;农杆菌介导的以草甘膦为选择标记的中棉35遗传转化[A];湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第八届第十七次学术年会论文汇编[C];2007年
5 徐春香;李华平;肖火根;范怀忠;;农杆菌介导的香蕉束顶病毒运动蛋白基因的初步转化[A];中国植物病理学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2002年
6 曹明霞;黄健秋;卫志明;;农杆菌介导的多基因转化获得优质高产水稻株系[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
7 黄军艳;许李明;张学江;刘胜毅;;人工microRNA干扰At3A06基因增强了拟南芥对菌核病的敏感性[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
8 王戈亮;许亦农;;农杆菌介导的大豆下胚轴遗传转化体系的建立和利用RNAi改良大豆油脂品质[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
9 乐超银;郭政宏;王健;廖甜甜;刘海军;李金鞠;;农杆菌介导魔芋鳞片遗传转化的研究[A];植物分子生物学与现代农业——全国植物生物学研讨会论文摘要集[C];2010年
10 王萍;邹艳;徐军田;李信书;周向红;易乐飞;;农杆菌介导条斑紫菜遗传转化影响因子的研究[A];庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 张小军;拟南芥基因组被完整破译[N];新华每日电讯;2000年
2 ;科学家看上拟南芥植物基因[N];中国环境报;2000年
3 张田勘;揭开植物生长的奥秘[N];河北日报;2001年
4 通讯员 陈胜伟 记者 叶辉;我成功克隆到将植物脂肪转化为糖类的基因[N];光明日报;2010年
5 记者 吴伟农;美把拟南芥列为植物基因研究重点[N];新华每日电讯;2000年
6 李山;植物拥有防止危险突变的保护机制[N];科技日报;2009年
7 美国《连线》 王金元 译;太空种植以备长居太空[N];北京科技报;2008年
8 李星星 本报记者 房琳琳;李家洋:寻求遗传发育的哲学灵光[N];科技日报;2004年
9 付毅飞;给基因装上“开关”[N];科技日报;2004年
10 张田勘;安全转基因食品让人类安心[N];大众科技报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 田娜;农杆菌介导的猕猴桃遗传转化及AtNHX1转化植株抗盐性分析;拟南芥At4G12490基因对逆境的抗性功能研究[D];西北大学;2010年
2 铁韦韦;农杆菌介导的籼粳稻转化差异[D];华中农业大学;2012年
3 毛同林;两种拟南芥65KDa微管结合蛋白的功能分析[D];中国农业大学;2005年
4 林文慧;拟南芥磷脂酰肌醇信号传导途径相关基因的表达谱分析及多磷酸肌醇-5-磷酸酶的生理功能研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
5 莫肖蓉;拟南芥HPA1基因功能研究[D];浙江大学;2006年
6 刘凯;拟南芥CBF1基因转化香蕉及其抗寒性研究[D];湖南农业大学;2012年
7 覃莲菊;高等植物侧生器官形态发育的分子机理初步研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
8 秦治翔;拟南芥1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶在光形态建成中的功能研究[D];中国农业大学;2005年
9 刘实忠;利用模式植物拟南芥鉴定和分离大丽轮枝菌外泌毒素中的致萎活性因子[D];中国农业大学;2005年
10 李虹;拟南芥OSR家族基因的表达模式分析及OSR2参与干旱胁迫反应的实验证据[D];中国农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李君君;F3'5'H基因超表达载体构建及转化菊花的初步研究[D];河南大学;2011年
2 韩笑;白菜浸花法转基因技术研究[D];曲阜师范大学;2012年
3 魏果;拟南芥Annexin5的克隆及其功能分析[D];兰州大学;2011年
4 宋政良;TAT-Cry1Ac融合蛋白在烟草、拟南芥中阳性植株的筛选及对小菜蛾治理研究[D];黑龙江大学;2010年
5 张帆;dsRNA介导的番木瓜环斑病毒(PRSV)的抗病性研究[D];华中农业大学;2010年
6 刘振林;同源序列法克隆甘蓝型油菜核不育基因BnMS1及其功能研究[D];浙江师范大学;2010年
7 吴贤婷;重组基因Lat52—DTA 的构建及其对拟南芥和烟草的转化[D];首都师范大学;2001年
8 高亚梅;拟南芥抗除草剂基因与核不育基因连锁关系的生物信息分析[D];华中农业大学;2003年
9 金建凤;AtCBF1基因转化水稻和拟南芥的比较研究[D];浙江大学;2004年
10 杨冠宇;拟南芥蛋白激酶AtPKL1对ABA和Ca~(2+)处理的响应[D];内蒙古农业大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026