收藏本站
《华中农业大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

百合AGAMOUS同源基因的克隆、载体构建及遗传转化

詹菁  
【摘要】: 百合(Lilium spp.)为多年生球根花卉,花朵硕大,花色艳丽,花姿优美,寓意百年好合,是重要的切花之一,深受人们的喜爱。但百合的花型却很单一,野生的百合原种绝大多数为单瓣花,此外,百合花粉量大,污染花瓣,十分影响美观,瓶插寿命也会大大缩短。长期以来,人们将百合花形育种视为最重要的育种目标之一,希望获得具有更高观赏价值的百合新品种。然而,在自然界突变的重瓣或无花粉百合很难找到,即使遇到这样的材料也很难将它作为育种亲本培养百合新品种,分子生物学与生物技术的发展为这些问题的快速解决提供了可能性。花发育ABC模型是近年来的研究热点,通过对拟南芥,金鱼草等模式植物的深入研究,人们已经对ABC模型有了更深层次的了解。 本实验从百合品种‘西伯利亚’中克隆出了花发育C类基因LLAG,构建了该基因的超量表达载体、反义载体以及干涉载体,一方面将这三个载体转化烟草对该基因进行功能验证,同时将这三个载体转化矮牵牛,期待对矮牵牛的花型产生改变,以丰富矮牵牛的品种,并为最终转化百合获得重瓣或无花粉的百合新品种提供理论支持。实验结果如下: 1.依据已发表的麝香百合花发育C类基因设计引物,从百合品种‘西伯利亚’中克隆了麝香百合花发育C类基因LLAG1的同源基因LLAG,该基因与NCBI中报道的各个百合花发育C类基因的同源性都很高,初步认定LLAG为‘西伯利亚’中控制花发育的C类基因。 2.利用已克隆的LLAG基因核苷酸序列设计引物引入适当的酶切位点,利用pMV载体构建了超量表达载体和反义载体;利用pHANNIBAL和pART27构建了干涉载体,并将这三个载体转入农杆菌菌株EHA105。 3.将构建好的三个载体分别转化了烟草和矮牵牛,获得阳性植株。经统计,pMV-oxLLAG转化烟草共获得49株阳性植株,pMV-anti-LLAG转化烟草共获得31株阳性植株,pA-LLAGRi转化烟草共获得21株阳性植株。pMV-oxLLAG转化矮牵牛共获得12株阳性植株,pMV-anti-LLAG转化矮牵牛共获得4株阳性植株,pA-LLAGRi转基因矮牵牛共获得6株阳性植株。 4.超量表达载体转基因烟草的花器官出现三种不同类型的同源异型变化。第一种类型表现为花萼膨大,花冠筒在幼期尚未伸出花萼时即张开,花瓣皱缩不能完全张开。第二种类型的花芽花萼膨大较第一种类型更为显著,花冠筒先端呈鼓突状,花瓣向内反卷不能完全张开。第三种类型的花芽表型变化最为强烈,花萼先端细尖外向反卷,基部膨大。花瓣向内反卷且在花冠基部出现一类似花瓣的附属物。扫描电镜结果显示,转基因烟草花瓣细胞形态与野生型的花药细胞相似,有花瓣雄蕊化的倾向。RT-PCR结果证明外源C类基因能够抵制内源A类基因的表达。超量表达载体转基因矮牵牛萼片直立,花冠筒明显变小。花瓣先端呈皱折状。反义载体转基因矮牵牛花色变淡,烟草表型有待观察。干涉载体转基因植株较小,有待进一步观察。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S682.29

知网文化
【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 黄洁;刘晓华;管洁;吕英民;;百合分子育种研究进展[J];园艺学报;2012年09期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 魏传斌;张萍;张凤银;覃芸;;龙牙百合在干旱胁迫下的生理变化及耐旱性评价研究[J];安徽农业科学;2010年04期
2 王艳青,陈雪梅,李悦,蒋湘宁,刘群录,李素艳;植物抗逆中的渗透调节物质及其转基因工程进展[J];北京林业大学学报;2001年04期
3 郑小林,胡木林,罗晓莹,陈燕,曾富华;假俭草低温胁迫的伤害与适应[J];草业科学;2002年07期
4 徐清燏,戴思兰;蓝色花卉分子育种[J];分子植物育种;2004年01期
5 吴小萍;席梦利;缪红艳;施季森;;百合总RNA提取方法的比较和分析[J];分子植物育种;2006年06期
6 杨梁;王爱菊;唐金富;陈振德;;百合花发育的分子生物学研究进展[J];华北农学报;2006年S1期
7 张晗;信月芝;郭惠明;程红梅;;CBF转录因子及其在植物抗冷反应中的作用[J];核农学报;2006年05期
8 马男,蔡蕾,陆旺金,谭辉,高俊平;外源乙烯对月季(Rosa hybrida)切花花朵开放的影响与乙烯生物合成相关基因表达的关联[J];中国科学C辑:生命科学;2005年02期
9 洪波;仝征;马男;李建科;Mie Kasuga;Kazuko Yamaguchi-Shinozaki;高俊平;;AtDREB1A基因在菊花中的异源表达提高了植株对干旱和盐渍胁迫的耐性[J];中国科学C辑:生命科学;2006年03期
10 刘强,赵南明,K.Yamaguch-Shinozaki,K.Shinozaki;DREB转录因子在提高植物抗逆性中的作用[J];科学通报;2000年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 缪红艳;百合AG类基因的同源克隆和分析[D];南京林业大学;2006年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邱乾栋;吕晓贞;臧德奎;张雷;张立才;杜淑辉;;植物抗寒生理研究进展[J];山东农业科学;2009年08期
2 牛永强;高鹏;路来明;杨华;;草坪草的低温胁迫及抗寒性的研究进展[J];山东农业科学;2012年03期
3 彭金光;孙玉宏;师瑞红;谢国生;;10℃低温对西瓜幼苗耐性生理指标的影响[J];安徽农学通报;2006年10期
4 高士杰;李继洪;张岩;高敬伟;;作物的抗旱性及抗旱品种选育[J];安徽农学通报;2007年01期
5 刘志雄;周高峰;廖启荣;费永俊;;低温胁迫对几个狗牙根品种生理生化特征的影响[J];安徽农学通报;2007年04期
6 葛宝宇;林轶;侯和胜;;ERF类转录因子的结构与功能[J];安徽农学通报;2007年20期
7 陈哲;孔祥翔;张斐斐;龚明;;植物抗逆性基因工程研究进展[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
8 李秋娜;梅曼;郭靖;;中华景天地上部分对自然降温的适应性研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年19期
9 李支成;;果树生理生化状况与抗寒性的关系研究进展[J];安徽农学通报(上半月刊);2012年11期
10 向太和,倪大虎,张盘娣,吴家道,杨剑波,贾士荣;抗菌肽Shiva A基因导入杂交水稻恢复系明恢63的初步研究[J];安徽农业科学;1999年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高燕;胡永红;;牡丹花发育相关基因的克隆与分析[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
2 钱仁卷;刘洪见;林霞;黄建;张旭乐;;不同苗龄无柄小叶榕对低温胁迫的生理响应研究[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
3 席梦利;潘梅;徐进;施季森;;百合花发育基因LLTCP1在花蕾发育过程中的时空表达[A];中国球根花卉研究进展2011[C];2011年
4 刘录祥;赵林姝;梁欣欣;郑企成;刘强;王晶;郭会君;赵世荣;陈文华;;基因枪法获得逆境诱导转录因子DREB1A转基因小麦的研究[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
5 郝晓燕;陈明;徐惠君;高世庆;程宪国;李连成;杜丽璞;叶兴国;马有志;;GH-DREB基因转化小麦及转基因植株后代的抗旱生理指标鉴定[A];2005年全国作物遗传育种学术研讨会暨中国作物学会分子育种分会成立大会论文集(二)[C];2005年
6 王巧燕;陈明;邱志刚;程宪国;徐兆师;李连城;马有志;;一个新的编码大豆DREB转录因子基因的克隆及鉴定[A];2005年全国作物遗传育种学术研讨会暨中国作物学会分子育种分会成立大会论文集(二)[C];2005年
7 程林梅;孙毅;任永玲;;转基因耐盐植物研究进展[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
8 常乐;郑日如;夏宜平;;国际百合研究新进展——第27届国际园艺大会有关百合研究论文综述[A];中国园艺学会球根花卉分会2008年会暨球根花卉产业发展研讨会论文集[C];2008年
9 宗成文;赵巍巍;陶建敏;章镇;;葡萄AGAMOUS-like MADS-box基因的克隆与表达特性研究[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
10 刘栋;邢晓蕾;张晓磊;李雪梅;史宝胜;刘冬云;;金叶榆和白榆抗寒性比较[A];中国观赏园艺研究进展 2009[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
2 韩莹琰;白菜花粉发育相关的C2H2型锌指蛋白新基因BcMF20的克隆与功能验证[D];浙江大学;2011年
3 陆燕元;干旱胁迫及复水过程中转Cu/Zn SOD和APX基因甘薯生理生化响应机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
4 黄志;丛枝菌根真菌对甜瓜抗旱性的生理效应及分子机制的研究[D];西北农林科技大学;2010年
5 李晓薇;大豆两个MYB转录因子基因的克隆及其功能分析[D];吉林大学;2011年
6 刘冬云;野生山丹种质资源遗传多样性及利用研究[D];北京林业大学;2011年
7 孙翊;瓜叶菊PCFH基因对花青素苷合成及花色的影响[D];北京林业大学;2011年
8 李春明;杨树品系低温生理响应及相关差异蛋白分析[D];北京林业大学;2011年
9 张荻;百子莲花芽分化及开花机理研究[D];东北林业大学;2011年
10 戚晓利;拟南芥花异常株系AFDL的花发育及基因表达分析[D];东北林业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 万小云;脐橙次生果形成机理初探[D];华中农业大学;2010年
2 刘红梅;农杆菌介导百子莲抗寒基因CBF1高效转化体系的建立[D];华中农业大学;2010年
3 张威;阿特拉津对几种水生植物的毒理效应及降解研究[D];华中农业大学;2010年
4 张璜;水稻抗寒性分析评价及QTL初步定位[D];华中农业大学;2010年
5 高胡静;百合离体条件下的耐盐性评价和EMS诱变育种初步研究[D];华中农业大学;2010年
6 李秋丽;4个狗牙根品种(系)的耐寒性评价[D];华中农业大学;2010年
7 朱莹;分析耐盐基因与启动子功能的CRE/loxP重组激活系统的构建与检验[D];哈尔滨师范大学;2010年
8 高岩;拟南芥fad8基因在烟草叶绿体基因组表达研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
9 黄聪;花生中DREB、bZIP类转录因子耐逆性研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
10 张晓磊;栎类树种幼苗对淹水胁迫的响应[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李宏宇;马鸿翔;雷家军;余桂红;周建涛;;百合遗传转化高频直接分化受体系统的构建[J];安徽农业科学;2005年12期
2 刘毅;丁元明;李昆志;陈丽梅;;农杆菌介导的百合遗传转化受体系统的研究[J];安徽农业科学;2008年30期
3 王凯;车代弟;王金刚;樊金萍;;百合遗传转化体系的建立[J];东北农业大学学报;2008年05期
4 徐品三;刘岚;夏秀英;;农杆菌介导东方百合“西伯利亚”遗传转化体系建立[J];大连理工大学学报;2008年05期
5 王燕,刘雅莉,王跃进,贺明阳,徐文渊;百合基因转化直接分化受体系统的建立[J];西北植物学报;2005年11期
6 杨丽;刘雅莉;王跃进;徐伟荣;;百合查尔酮合成酶(CHS)基因的克隆与分析[J];西北植物学报;2006年05期
7 陈莉;马颖;马锋旺;梁东;华智锐;;根癌农杆菌介导麝香百合遗传转化体系的建立[J];西北植物学报;2007年07期
8 刘鲜艳;刘雅莉;王跃进;张宗勤;;百合ACC氧化酶基因全长cDNA的克隆及序列分析[J];西北植物学报;2008年04期
9 陈丽静;孙春玉;钟鸣;阮燕晔;明军;雷家军;;冷胁迫下王百合GPAT基因保守区克隆及表达分析[J];西北植物学报;2011年09期
10 刘菊华,金志强,徐碧玉,郑思乡,刘志敏;龙牙百合的植株再生与遗传转化[J];分子植物育种;2003年04期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 张忠琴;百合花粉酪蛋白激酶2α亚基cDNA克隆及其序列分析[D];河北师范大学;2002年
2 常小丽;百合查尔酮合成酶基因花特异启动子的功能分析[D];西北农林科技大学;2008年
3 王杰;百合杂交育种、遗传转化及胚性愈伤的初步研究[D];华中农业大学;2008年
4 化占勇;百合查尔酮合成酶(CHS)基因对花色调控影响的研究[D];西北农林科技大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 苏焕然,张丹,汪清胤,黄永芬;花卉基因工程研究进展[J];北方园艺;1996年04期
2 许卉;蓝光对菊花生长和开花的影响[J];滨州教育学院学报;2000年03期
3 李广敏,史吉平,董永华,韩建民,商振清;脱落酸和多效唑对水分胁迫条件下小麦幼苗活性氧代谢的影响[J];河北农业大学学报;1994年04期
4 任健,毛凯,范彦;假俭草的抗性[J];草业科学;1998年05期
5 王代军,温洋;温度胁迫下几种冷季型草坪草抗性机制的研究[J];草业学报;1998年01期
6 刘桂丰,杨传平,温绍龙,刘关君,王玉霞;盐逆境条件下三个树种的内源激素变化[J];东北林业大学学报;1998年01期
7 郝福玲,刘雅莉,王跃进;百合花瓣总RNA提取方法的研究[J];西北植物学报;2005年06期
8 徐清燏,戴思兰;蓝色花卉分子育种[J];分子植物育种;2004年01期
9 孟丽,戴思兰;F3′5′H基因与蓝色花的形成[J];分子植物育种;2004年03期
10 梁宗锁,康绍忠,高俊凤;植物对土壤干旱信号的感知、传递及其水分利用的控制[J];干旱地区农业研究;1999年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 高伟;玉米光周期反应与类LFY基因克隆的研究[D];河南农业大学;2004年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张少方;王新涛;吴连成;吴刘记;谢丽莉;郭书磊;陈彦惠;;玉米光周期敏感基因ZmELF4的克隆及其亚细胞定位[J];玉米科学;2011年02期
2 张玉江,程备久,储成才;水稻petH基因启动子的克隆及其转化载体的构建[J];安徽大学学报(自然科学版);2005年04期
3 陈选阳;林世强;袁照年;张招娟;郑金贵;;甘薯zds基因的克隆与植物表达载体构建[J];福建农林大学学报(自然科学版);2005年04期
4 代玉华;王锡锋;李莉;周广和;;一种适合水稻农杆菌转化的RNAi载体的构建和潮霉素对水稻转化的影响[J];植物保护;2007年02期
5 刘晓颖;陈芸;苗玉青;李冠;;10kD玉米醇溶蛋白基因的克隆与植物表达载体构建[J];生物技术;2007年04期
6 孟凡荣;司志飞;刘昊英;张问;;小麦甲基结合蛋白基因MBD3重组表达载体的构建和原核表达[J];中国农学通报;2008年11期
7 方桂杰;乔宪凤;;日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶原核表达载体的构建及序列分析[J];江西农业学报;2010年11期
8 詹振宏;吴伟伟;田月珍;徐新明;张廷虎;张艳花;狄江;哈尼克孜;玛尔孜亚;田可川;;基因打靶技术的研究进展[J];中国畜牧兽医;2011年02期
9 戴倩;田云;卢向阳;;同源重组介导的克隆策略研究进展[J];农产品加工(学刊);2011年06期
10 朱伟伟;陈远良;陈芳;高剑峰;;黄瓜芽黄突变相关基因ClpP克隆及植物表达载体构建[J];中国农学通报;2011年16期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曹秋芬;孙海峰;孟玉平;;板枣LEAFY同源基因的分子克隆初报[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
2 张可浩;傅玉才;章家新;;单细胞原生动物阴道毛滴虫中沉默信息调节因子2同源基因克隆及其原核表达[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
3 马君;章金刚;向华;李雪梅;史秋梅;宣华;;鹅细小病毒主要结构蛋白基因的克隆、测序及载体的构建[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
4 贝锦新;末武弘章;菊池潔;铃木譲;林浩然;;鱼类白细胞介素(IL)-15同源基因的克隆及其功能分析[A];第二届中国动物学会比较内分泌学分会和发育生物学分会联合学术研讨会论文集[C];2005年
5 师伟;裴雪涛;;HOXB4基因的表达谱初步研究与HOXB4基因的克隆及相关载体构建[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
6 倪为民;陈晓亚;卫志明;许智宏 ;薛红卫;;生长素极性运输相关的芥菜pin1同源基因的克隆[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年
7 徐建华;何敏;黄宪章;柯培锋;林莲英;黎美贤;庄俊华;;Survivin shRNA载体构建及靶向下调PC3 mRNA表达实验研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
8 刘文文;赵永波;;大鼠GDNF真核表达载体构建[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
9 李克;王琳;成军;张玲霞;陆荫英;李莉;;丙型肝炎病毒核心蛋白基因的表达载体构建及在酵母中的表达[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年
10 李臻;金宁一;金洪涛;郑敏;付延军;辛苏文;;新型鸡痘病毒重组转移载体的构建[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李俊;以局域网为载体构建全市民事判例指引制度[N];江苏经济报;2004年
2 钟颖 黄卫星;雨湖区借三大载体构建联点共建新格局[N];湘潭日报;2009年
3 本版编辑 黄真 特约记者 吴吉兵 毕福林 记者 崔兰斌;警地合力打造安全发展平台[N];人民武警;2007年
4 杨富志;以法制建设为载体构建和谐社会[N];安康日报;2007年
5 高民;以活动为载体构建和谐邮政[N];济宁日报;2007年
6 记者 莫世武通讯员 韦肇飞;昭平以“四进家”为载体构建和谐社会[N];法治快报;2007年
7 赵建敏 唐军;龙山区以创“平安社区”为载体构建“平安龙山”软环境[N];辽源日报;2005年
8 记者 高铁耕;郊区以“平安家庭”为载体构建和谐社会[N];佳木斯日报;2008年
9 刘宗伟;山东服务业锁定“一圈一群一带”[N];青岛日报;2007年
10 海军大连舰艇学院 王秀清;依托载体构建和谐文化[N];大连日报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邹莉;天花粉蛋白基因表达载体的构建及转化杨树的研究[D];东北林业大学;2005年
2 胡泽斌;溶瘤腺病毒载体系统的构建及其功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
3 于磊;PTI-1基因siRNA干涉载体构建及对转染的前列腺癌细胞系的生长抑制作用研究[D];第四军医大学;2006年
4 宗成文;葡萄花发育相关基因的克隆与表达特性研究[D];南京农业大学;2007年
5 何富强;核桃LFY同源基因的克隆和表达[D];河北农业大学;2011年
6 俞志明;EXPA7亚家族调控水稻根毛伸长机制研究[D];浙江大学;2010年
7 李鹏;人类磷脂酰乙醇胺结合蛋白在TRAIL诱导的卵巢癌凋亡中的作用[D];山东大学;2004年
8 张薇;春小麦高分子量谷蛋白12亚基基因克隆及积累调控研究[D];东北农业大学;2003年
9 高春阳;异种脱蛋白松质骨为载体构建组织工程骨脊柱横突间融合的实验研究[D];第三军医大学;2006年
10 武金宝;PAK1在大肠癌演进和转移中的作用[D];南方医科大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 詹菁;百合AGAMOUS同源基因的克隆、载体构建及遗传转化[D];华中农业大学;2010年
2 王博;百合AGAMOUS同源基因的克隆、表达特性研究及载体构建[D];西南林业大学;2011年
3 肖新超;早竹TB1基因克隆及拟南芥转基因体系的探索[D];浙江林学院;2007年
4 常万霞;柽柳MnSOD基因的克隆及功能验证[D];东北林业大学;2006年
5 于晓明;人乳铁蛋白乳腺真核表达载体pBC1-hLF的构建[D];中国协和医科大学;2006年
6 楚宗艳;棉花抗草甘膦基因的表达及功能鉴定[D];中国农业科学院;2008年
7 张松焕;紫茎泽兰F3’H基因表达载体的构建及对烟草转化的研究[D];河南农业大学;2009年
8 邰付菊;棉花GhRGP1,GhRGP2,GhUPTG1和GhUPTG2基因克隆和表达分析[D];华中师范大学;2004年
9 张成伟;棉花GhADF基因克隆和表达分析[D];华中师范大学;2006年
10 林桂渺;TIMP-3真核表达载体构建以及在前列腺癌细胞株中作用的研究[D];吉林大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026