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《华中农业大学》 2010年
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林荫银莲花离体快繁体系的优化及其有效成分的研究

王俊  
【摘要】: 林荫银莲花(Anemone flaccida Fr. Schmidt)属银莲花属(Anemone)植物,其干燥根茎名地乌,可入药,具有祛风湿、助筋骨、消肿止痛等功效。本研究通过分析林荫银莲花组培各环节如不定芽增殖、拟球茎诱导、生根及炼苗移栽的影响因素,从而得到最佳的培养条件,优化了林荫银莲花离体快繁体系。并采用分光光度法、FTIR和HPLC法,对地乌的栽培品、野生品和组培品中的可溶性糖、可溶性蛋白、总皂苷、化学组分和有效成分进行了定量或定性的分析比较。研究结果为林荫银莲花种苗的产业化生产和人工栽培提供了一定的理论基础和技术支持,主要结果如下: (1)继代培养中不定芽增殖的最适培养基为:1/2 MS(220 mg/L CaCl2·2H2O) +6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L+750 mg/L CH,增殖系数为4.11,芽苗整齐健壮。 (2)继代培养中拟球茎诱导的适宜培养基为:MS(440 mg/L CaCl2·2H2O)+6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L+500 mg/L CH,CLS的诱导率为80%左右,球茎基部直径较大,芽苗健壮。 (3)适当的密植(4-5株/瓶)和继代周期(30 d)有利于外植体的继代增殖;继代培养基可用食用白糖和自来水分别代替蔗糖和蒸馏水来配制,研究结果可大大降低成本。 (4)加入100 mg/L Vc能有效抑制外植体的褐变,培养40 d后褐变率为58%,较不添加处理低27个百分点,且褐变程度均较轻。 (5)生根培养以1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+1.0 g/L AC最优,培养55 d后,生根率为93.9%,平均根条数为10.5,根最长达1.73 cm,根较粗且褐变轻微。 (6)生根苗以放入灭菌后的潮土基质,在5-6℃环境中炼苗7-10d最佳;移栽时选择潮土和河沙混合基质(8:2体积比),成活率达96%,出苗率为86%;组培苗就地栽培或移至原产地均可,成活率均高于95%,出苗率大于92%。 (7)紫外分光光度法测定可溶性糖、可溶性蛋白、总皂苷的含量,结果如下:可溶性糖含量为:栽培品组培品野生品;可溶性蛋白含量为:组培品野生品栽培品;总皂苷含量以栽培品的最高,野生品与组培品的差异不明显。 (8)地乌组培品、栽培品和野生品原粉的红外图谱的峰型、峰位基本一致,由此推断它们所含的化学成分种类相同。 (9)地乌组培品和野生品的HPLC色谱图中,6.69 min时齐墩果酸特征峰明显,其中野生品峰面积稍大,表明野生品中的齐墩果酸含量较高。
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