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《华中农业大学》 2010年
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天蓝放线紫红素生物合成上调基因的克隆及其对阿维菌素产量的影响

余姣姣  
【摘要】: 放线紫红素和阿维菌素都属于聚酮类抗生素,其中放线紫红素由天蓝色链霉菌通过Ⅱ型聚酮合酶(PKS)途径合成,阿维菌素由阿维链霉菌通过Ⅰ型PKS途径合成。天蓝色链霉菌A3(2)和阿维链霉菌NRRL8165基因组测序已经完成。比较研究不同链霉菌对次级代谢的调控作用有重要理论价值,同时也对相关抗生素工业生产有指导意义。 本论文在实验室初筛获得11个对放线紫红素合成有上调作用的天蓝色链霉菌基因组文库粘粒的基础上展开研究,利用属间接合转移系统将11个粘粒分别转到天蓝色链霉菌M145和变铅青链霉菌1326中,发现SCOL5E7, SCOL6G2, SCOL5C10, SCOL5C12, SCOL5F10, SCOL5B9在两种菌中皆对放线紫红素合成有上调作用。将这6个粘粒导入阿维链霉菌NRRL8165,经摇瓶发酵和HPLC检测,发现SCOL5B9对阿维菌素多个组份合成均有明显上调作用,其中组分B1a产量提高8倍;其它粘粒没有明显作用。通过粘粒末端测序并亚克隆,将SCOL6G2中对放线紫红素表达有上调作用的基因定位到SCO0431和SCO0432,分别编码一个可能的分泌蛋白和一个可能的胞外肽水解酶;其它粘粒中的功能基因定位尚无定论。 阿维链霉菌可作为异源表达抗生素生物合成基因簇的良好宿主,但是需要优化含有大片段DNA质粒的接合转移效率。我们选取MgCl2、NaCl、Ca(NO3)2和CaCl2等4种无机盐,在0-200 mM浓度范围内分别研究其对大质粒向阿维链霉菌接合转移的影响,发现CaCl2有极明显促进作用,MgCl2也有一定提高作用。进一步通过完全随机试验组合CaCl2、MgCl2,筛选出显著提高阿维链霉菌接合转移效率的最佳组合,使大质粒的接合转移效率提高11倍。同时,本研究还发现阿维链霉菌异源表达放线紫红素的最适培养基,成功表达放线紫红素,为进一步研究阿维链霉菌中放线紫红素生物合成的调控奠定基础。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q93

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【参考文献】
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1 黄曦,邓子新;聚酮分子生物学进展[J];国外医药(抗生素分册);1998年03期
2 宋渊,曹贵明,陈芝,李季伦;阿维菌素高产菌株的选育及阿维菌素B_1的鉴定[J];生物工程学报;2000年01期
3 苏建亚,沈晋良;阿维菌素的生物合成与途径工程[J];生物技术通报;2003年06期
4 张和春,季文明,王武;天蓝色链霉菌产蓝色素的工业化培养基优化[J];无锡轻工大学学报;2000年02期
5 孙宇辉;邓子新;;聚酮化合物及其组合生物合成[J];中国抗生素杂志;2006年01期
【共引文献】
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1 牛永东,许丽艳,李恩民;酵母单杂交诱饵质粒pHis-3NF和pLacZ-3NF的构建与鉴定[J];癌变.畸变.突变;2003年01期
2 欧阳松应,徐寿水,沈文律,周传香,李春艳,欧阳红生;人PTEN基因表达载体的构建及其在U_(251)细胞中的表达[J];癌变.畸变.突变;2004年04期
3 李涛,石年,吴又桐,周丽,董洁,王素青,陈亮;Bcl-2在溴氰菊酯诱导神经细胞凋亡机制中的作用[J];癌变.畸变.突变;2004年05期
4 史冬燕;程在全;;元江普通野生稻金属硫蛋白基因的获得和序列分析[J];安徽大学学报(自然科学版);2009年03期
5 鞠玉栋;郑回勇;吴维坚;陈永快;何炎森;吴松海;;中国水仙MADS-box基因克隆及其序列分析[J];安徽农学通报;2008年21期
6 张金洲;项智锋;王清华;李学斌;赵海涛;张廷虎;郭玉娇;;利用RAPD标签分析3种鲤科鱼群体的遗传变异[J];安徽农业科学;2008年23期
7 曾青兰;;纤维素降解细菌的分离鉴定和筛选方法的研究[J];安徽农业科学;2008年24期
8 王延云;;峨边花牛肌肉生长抑制素基因cDNA克隆及序列分析[J];安徽农业科学;2008年25期
9 卢高峰;夏平安;邱璜;李伟娟;王中明;刘明莉;;PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因的克隆及表达载体的构建[J];安徽农业科学;2008年26期
10 程宝艳;余为一;彭明义;程帮照;戴银;陈芳芳;;鸡新城疫病毒F基因部分片段克隆表达及其抗体制备[J];安徽农业科学;2008年29期
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1 田永强;张荣意;朱中元;;人乳头瘤病毒线性平行杂交分型检测条件的建立及优化[A];2009年海南省微生物学检测及质量保证研讨会论文集[C];2009年
2 梁权;毛培菊;罗春贞;王缦;;HIV-1跨膜蛋白gp41的截短表达及其免疫反应性[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
3 朱勤勋;严雪;韩友斌;;鼠源IgG抗体F(ab')2片段及Fab片段的制备纯化及其免疫活性研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
4 朱美财;占志;王雅静;蔡庆;;刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体在大肠杆菌中的表达及在TPA纯化中的应用[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
5 刘俊莹;张华鹏;王聪聪;张剑峰;;马铃薯卷叶病毒ORF1克隆及序列分析[A];马铃薯产业与科技扶贫(2011)[C];2011年
6 冯琦;孙秉中;赵永同;孙凯;张英起;颜真;韩苇;;Bcr-abl特异性系列核酶载体的构建及初步鉴定[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
7 白玉杰;苏成芳;杨安刚;;抗人CD3单链抗体基因的构建及表达[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
8 赵洁;刘楚吾;;笛鲷AFLP分析体系的确立[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
9 马艳芝;张玉星;;梨属植物基因组DNA提取部位对RAPD扩增的影响[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
10 高水平;范丙友;刘改秀;史国安;李嘉珏;孔祥生;;牡丹ACS反义基因植物表达载体的构建[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
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1 王庆莲;苹果多胺和脯氨酸合成代谢相关基因的功能鉴定[D];山东农业大学;2009年
2 郭爱疆;猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原表位及组织定位的研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 王燕;两株海洋病原菌的分离鉴定、致病机理研究及三株海洋新菌的分类鉴定[D];中国海洋大学;2010年
4 郑小坚;家蚕类胰岛素基因BBX-B8的功能研究[D];苏州大学;2010年
5 王发明;柚(citrus grandis Osbeck)单染色体AFLP分子标记体系及文库的建立[D];福建农林大学;2010年
6 张延妮;珠子参化学成分及其活性成分的筛选研究[D];陕西师范大学;2010年
7 王大红;粘细菌Stigmatella WXNXJ-B产生新型抗肿瘤抗生素的研究[D];江南大学;2010年
8 山广志;Hsp90抑制剂—格尔德霉素的结构优化及抗病毒构效关系研究[D];北京协和医学院;2009年
9 于蕾;野西瓜极性生物碱A10组分诱导SGC-7901细胞凋亡线粒体通路的研究[D];北京中医药大学;2010年
10 王欣梅;大肠杆菌f2噬菌体分子印迹膜的制备、评价和应用[D];华中科技大学;2011年
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1 韩秀萍;幽门螺杆菌基因敲除方法的建立及其应用研究[D];华中农业大学;2010年
2 黄潘;鸡胚性分化早期性别差异表达miRNAs的鉴定及其特性分析[D];华中农业大学;2010年
3 吴婕;多拉菌素产生菌的诱变育种及培养条件的优化[D];华中农业大学;2010年
4 王萍萍;盾壳霉产孢相关基因的克隆及腺苷脱氨酶(CMADA)基因的初步研究[D];华中农业大学;2010年
5 曹晶;风疹病毒(RV)包膜糖蛋白E1特异基因片段的原核表达[D];南京医科大学;2009年
6 王涛;糖皮质激素受体基因转染阿霉素肾病大鼠模型改善糖皮质激素疗效的研究[D];南京医科大学;2009年
7 高岩;拟南芥fad8基因在烟草叶绿体基因组表达研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
8 王丽;MAGE-A3、HLA-A1及HLA-A2在食管鳞癌中的表达及其相关性研究[D];郑州大学;2010年
9 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
10 张磊;杜氏盐藻(Dunaliella salina)GPI多克隆抗体的制备及其在MDCK细胞中的定位[D];郑州大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 张和春,王武;天蓝色链霉菌产蓝色素的摇瓶发酵优化[J];食品与发酵工业;1999年05期
2 赵东红,陆玲,秦怀兰;一种微生物发酵产蓝色素的稳定性及毒性研究[J];食品与发酵工业;1998年05期
3 张部昌,赵志虎,马清钧;红霉素生物合成的分子生物学[J];生物技术通讯;2001年02期
4 陈芝,宋渊,文莹,李季伦;阿维链霉菌中aveD基因阻断对阿维菌素合成的影响[J];微生物学报;2001年04期
【相似文献】
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1 肖杰;天蓝色链霉菌中分化发育基因参与同源性重组[J];遗传学报;2000年12期
2 金松谟;颜望明;;RP_4质粒在兼性自养多能硫杆菌中的接合转移[J];山东大学学报(理学版);1991年01期
3 许铭翾;朱颖旻;沈美娟;姜卫红;赵国屏;覃重军;;变铅青链霉菌内源线性质粒接合转移必需功能区的鉴定(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2006年10期
4 钱海伦;;沙雷氏菌(Serratia marcescens)色素合成能力接合转移的分析[J];中国药科大学学报;1984年03期
5 管征,颜望明;接合性转座子Tn916的研究进展[J];微生物学通报;1994年02期
6 苏鸿声;相望年;戴秀玉;陆德如;;根癌土壤杆菌接合转移和生物型特性的遗传学研究[J];微生物学报;1989年03期
7 张学贤,周俊初,张忠明,李阜棣,陈华癸;紫云英根瘤菌与豌豆根瘤菌共生质粒间的相互作用[J];华中农业大学学报;1992年02期
8 赵巍,张成刚,蔺继尚;接合转移诱动系统在遗传分析和体内基因操作中的应用[J];微生物学杂志;1994年02期
9 王小东;康丽华;毛慧玲;江业根;马海滨;张希涛;;质粒pMC73A从催娩克氏菌到相思根瘤菌的接合转移[J];安徽农业科学;2007年03期
10 高峰;王斌;陈太春;汪志军;安德荣;;委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统的构建及透明颤菌血红蛋白的表达[J];微生物学报;2010年03期
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1 张杰;彭于发;赵建周;陈彩层;黄大昉;;用接合转移方法构建杀虫防病荧光假单胞菌[A];“植物病虫害生物学研究进展”——植物病虫害生物学国家重点实验室研究论文选[C];1995年
2 陈伟;文莹;;染色体自发重排导致阿维链霉菌的遗传不稳定性[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
3 朱冬青;邓子新;;阿维链霉菌中调节蛋白AdpA_a对阿维菌素和寡霉素合成的调节[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
4 周敏;覃重军;;天蓝色链霉菌基因组的改造工程[A];2010年第四届全国微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
5 王晓芳;陈芝;张晓琳;赵金雷;宋渊;李季伦;;阿维链霉菌调节基因aveR1,aveR2缺失对阿维菌素产量的影响[A];第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会论文集[C];2004年
6 方晔;李向阳;杨锦红;李方去;韩珍;;亚抑菌浓度头孢噻肟、头孢他啶对细菌耐药质粒接合转移的影响[A];2007年浙江省医学检验学学术年会论文汇编[C];2007年
7 方晔;李向阳;杨锦红;李方去;韩珍;;亚抑菌浓度头孢西丁对体外质粒接合转移的影响[A];2007年浙江省医学检验学学术年会论文汇编[C];2007年
8 李向阳;方晔;杨锦红;;亚抑菌浓度抗生素对携带CTX-M型基因质粒接合转移的影响[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
9 陈金辉;陈芝;宋渊;李季伦;;阿维链霉菌的诱变育种[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
10 肖杰;;链霉菌中高频率的质粒同源性重组[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
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1 记者 孙理;近物所利用重离子技术成功选育优良菌种[N];兰州日报;2010年
2 士心;基因工程:抗生素开发新领域[N];医药经济报;2001年
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1 薄永恒;阿维链霉菌高产菌株诱变选育及其基因与蛋白差异效果研究[D];甘肃农业大学;2012年
2 张鹏翼;双选择抗生素影响大肠杆菌间质粒接合转移的分子机制暨纤维堆囊菌So0157-2表达蛋白质组学分析[D];山东大学;2010年
3 张晓琳;阿维链霉菌中聚酮合酶基因的遗传改造[D];中国农业大学;2004年
4 喻云梅;纳米氧化铝促进多重耐药质粒RP4接合转移及其机理探讨[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
5 李文成;天蓝色链霉菌nsdA基因的研究及TTA密码子的生物信息学分析[D];华中农业大学;2007年
6 侯艳华;四株海洋放线菌遗传转化体系的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
7 达来宝力格;胸膜肺炎放线杆菌生物被膜突变体的筛选与生物学特性的研究[D];华中农业大学;2008年
8 夏志洁;纤维堆囊菌遗传操作体系建立及其在埃博霉素生物合成改造中的应用[D];山东大学;2007年
9 魏杰;金褐霉素基因工程菌的构建及表达产物的纯化[D];沈阳农业大学;2009年
10 胡晓敏;蜡状芽胞杆菌群菌株病原相关分析及其遗传改良[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2007年
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1 余姣姣;天蓝放线紫红素生物合成上调基因的克隆及其对阿维菌素产量的影响[D];华中农业大学;2010年
2 周豪;限制修饰缺失大肠杆菌的构建及其在微生物次级代谢研究中的应用[D];上海交通大学;2011年
3 孙隽;阿维链霉菌一氧化氮合酶的基因克隆及生物功能初步研究[D];浙江工商大学;2012年
4 林海;阿维菌素优良菌株的选育和整合型vgb载体的构建与表达[D];沈阳药科大学;2008年
5 杜翠娇;阿维链霉菌基因重组菌株的选育[D];河北科技大学;2011年
6 鲍玉杰;阿维链霉菌与刺糖多孢菌基因组重排筛选高效低毒杀虫剂产生菌的初探[D];浙江工业大学;2010年
7 刘隽;南昌链霉菌NS3226属间接合转移系统的建立及染色体物理图谱构建的初步尝试[D];华中农业大学;2001年
8 马颖谡;5-酮基阿维菌素基因工程菌的研究[D];沈阳药科大学;2007年
9 陈芬;肉桂地链霉菌接合转移体系的构建及nsdA基因中断对莫能菌素产量的影响[D];华中农业大学;2007年
10 王海娇;天蓝色链霉菌和阿维链霉菌的基因组比较及系统发育分析[D];天津大学;2008年
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