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《华中农业大学》 2009年
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AM真菌孢子萌发及其与紫云英转化根双重培养体系建立的研究

曹玲  
【摘要】:丛枝菌根(AM)在自然界中广泛分布,能够与自然生态系统中80%以上的维管属植物共生,形成丛枝菌根。AM真菌能够促进宿主植物矿质营养吸收,增强抗逆抗病能力,对维持陆生生态系统及植物多样性有重要作用。 由于AM真菌具有专性共生的特性,离体纯培养至今尚未实现。因此,AM真菌的单菌培养是40余年来人们一直探索的关键技术,也是AM真菌研究的重点和热点。世界各国都在积极开展AM真菌单菌培养的研究工作。 本论文研究了在离体培养条件下培养基质、金属离子等环境因素对AM真菌孢子萌发和芽管菌丝生长发育的影响;利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)转化的豆科植物紫云英Ri T-DNA转化根与AM真菌Glomus intraradices、Gigaspora margarita、Gigaspora rosea建立了双重培养体系。该双重培养体系是研究AM真菌形态学、生理学、生物与非生物胁迫应答、根际生物(PGPR、病原菌、线虫)相互作用、分类系统进化等方面的理想模式,更是目前公认的唯一能够提供纯净AM真菌材料的方法。采用此双重培养体系能够进行AM真菌与豆科植物相互识别信号和共生机制的研究。同时此双重培养体系也为构建AM真菌、豆科植物与根瘤菌离体三重培养体系提供了一些借鉴。论文取得主要结果如下: Gig. margarita、G. intraradices孢子在水琼脂、MSR、M、MS培养基上均能萌发,以水琼脂上萌发及菌丝生长状况最好。低浓度Zn2+、La3+促进Gig. margarita、Glomus intraradices孢子萌发,随浓度上升,孢子萌发及菌丝生长受抑制。 以发根农杆菌k599转化划伤处理的大豆子叶,并获得大豆转化根,但其不能在低离子浓度的人工培养基上生长,故没有用其与AM真菌构建双重培养体系。 以发根农杆菌k599转化紫云英下胚轴,研究不同卡那霉素浓度对转化根诱导率的影响,其结果为:适当的Km浓度(40μg/ml)会提高紫云英Ri T-DNA转化根形成的效率,而过高的Km浓度(60μg/ml)抑制转化根形成。 在MSR培养基上尝试以Gig. margarita、Gig. rosea、Glomus intraradices建立双重培养体系,且三菌种均与紫云英转化根成功建立双重培养体系。但是巨孢囊霉属的Gig. rosea未能产生新生孢子。原因可能是巨孢囊霉属的菌种侵染宿主后菌丝生长存在迟滞期,而次生孢子的产生又受到外生菌丝生物量及辅助细胞数量的影响。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S154.3;S551.9

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【参考文献】
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