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《华中农业大学》 2010年
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斑点叉尾鮰消化道益生菌的筛选与应用研究

丁伯文  
【摘要】: 为了了解斑点叉尾鮰消化道内正常菌群结构,采用平板涂布法对斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus Rafinsque)肠道中需氧和兼性厌氧菌进行了定量分析,并对分离菌株进行了分类鉴定。结果表明:斑点叉尾鮰前肠、中肠和后肠的细菌数量分别为3.72×106cfu/g、4.32×106cfu/g和16.25×106cfu/g。前肠的主要菌群为产碱菌属、气单胞菌属、肠杆菌科,中肠的主要菌群为肠杆菌科、气单胞菌属,后肠的主要菌群为肠杆菌科和气单胞菌属。 用正交试验法,通过对培养基基础成分、主要添加成分和无机离子对从养殖斑点叉尾鮰消化道中分离的芽孢杆菌BHI344和BHI346的生长影响,研究了优化培养基。确定菌株BHI344的优化配方为:蛋白胨1.0%、牛肉膏0.1%、食盐0.5%、酵母膏0.5%、葡萄糖1.0%、硫酸铵0.05%、MgSO4·7H2O 0.1g/L、CuSO4·5H2O 0.15mg/L、MnSO4·H2O 1.5mg/L和CoCl2·H2O 0.15mg/L; BHI346优化培养基配方为:蛋白胨1.0%、牛肉膏0.1%、食盐1.0%、酵母膏0.5%、硫酸铵0.05%、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4·H2O 1.5mg/L、CoCl2·H2O 0.15mg/L和CaCl2 0.02g/L。用优化培养基与普通营养肉汤(蛋白胨1.0%、牛肉膏0.3%和食盐0.5%)培养对照试验结果表明,优化培养基有效地提高了细菌产量。 在饵料中定量添加从斑点叉尾鮰肠道中分离的BHI344菌株后,在连续投喂斑点叉尾鮰21d的过程中,于第7d、14d和21d分别定时采集饲养池中的水样,测定水体中氨态氮、BOD和COD等主要理化因子的指标,探讨了在斑点叉尾鮰饲料中添加BHI344菌株对养鱼池水水质的净化效果,并且与对照池进行了比较。结果表明,将按BHI344菌株添加斑点叉尾鮰饵料中的试验组能有效地降低饲养水体中氨态氮、BOD和COD值;连续投喂14d后,分别测定试验和对照斑点叉尾鮰苗种的成活率,生长速度以及对环境因子耐受力的结果表明,在饵料中添加BHI344菌株具有提高斑点叉尾鮰苗种的成活率、促进生长和增加对环境因子的耐受力的效果。 为了提供将BHI344菌株作为微生态制剂的开发菌株的实验依据,将BHI344菌株定量添加在饲料中投喂斑点叉尾鮰后,通过检测白细胞的吞噬活性、溶菌酶的活性、淋巴细胞的转化率以及肠上皮内淋巴细胞的观察与计数等,探讨了BHI344菌株对斑点叉尾鮰免疫机能的影响。结果表明:与对照组相比试验组鱼体内血液中白细胞的吞噬活性、淋巴细胞的转化率、血清中溶菌酶活性以及肠上皮内淋巴细胞的数量均有所上升,但是并未出现显著性差别(t测验,p0.05)。本研究结果为将BHI344菌株作为微生态制剂的开发菌株提供了实验依据。
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