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《华中农业大学》 2010年
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禽霍乱免疫复合物疫苗的初步研究

崔卫涛  
【摘要】: 禽霍乱(Fowl Cholera)是由禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,PM)引起的主要侵害家禽和野禽的一种急性、接触性传染病。PM菌体外膜蛋白(P1pE)是一种交叉保护因子,对异种血清型菌株的感染能提供一定的保护作用。本研究克隆了PMP1pE基因,并以其表达蛋白为抗原制作免疫复合物疫苗,对其免疫效果进行初步研究,结果如下: 1.P1pE基因的克隆与原核表达 根据禽多杀性巴氏杆菌ATCC12948株脂蛋白E基因(P1pE)序列设计一对特异性引物,经PCR从禽多杀性巴氏杆菌C48-1株中扩增获得了全长P1pE基因,大小为1011 bp,与已报道的基因核苷酸序列同源性为92%-99%,氨基酸序列同源性为90%-99%。将P1pE片段插入原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-P1pE并在大肠杆菌中进行了高效表达。SDS-PAGE电泳结果显示,表达的重组蛋白P1pE约为37.8 kDa,与预期大小相符。Western blot检测结果表明重组蛋白P1pE能与C48-1菌体阳性血清发生特异性反应。用纯化的重组蛋白P1pE免疫小鼠,二免后2 W用10 LD50 C48-1菌株攻毒,免疫小鼠获得了100%保护,表明该蛋白具有良好的免疫原性,为禽霍乱亚单位疫苗研制奠定了基础。 2.禽霍乱免疫复合物疫苗的初步研究 用大肠杆菌表达的禽多杀性巴氏杆菌重组蛋白P1pE作为抗原,与用该蛋白做抗原免疫鸡制得的血清配制成不同比例的免疫复合物,用白羽肉鸡做动物试验。试验鸡随机分成6组,A、B、C组(抗原抗体比例分别为2:1、4:1、8:1)分别注射3种不同比例的复合物疫苗,D组为只注射蛋白的对照组,E组为生理盐水对照组。各组从免疫后第1W起至第5W,每周采血,用ELISA方法检测抗体效价,第5次采血后用禽多杀性巴氏杆菌C48-1株攻毒。试验结果显示以抗原抗体比例为8:1(C组)免疫后所获得的抗体水平和攻毒保护率较高,近期保护率可达90%,A、B、D、E组分别为80%、60%、70%、0。即C组为抗原抗体比例比较合适的一组。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S852.5

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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