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《华中农业大学》 2010年
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重组杆状病毒介导的高致病性猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗研究

徐珊珊  
【摘要】: 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种能够导致母猪严重繁殖障碍及仔猪呼道症状和高死亡率的病毒性传染病。免疫接种一直是预防病毒性传染病的最主要手段,但目前针对PRRS的商品化灭活苗和弱毒苗存在免疫效果不理想或不安全的缺陷,尤其是近年来,由于高致病性PRRSV毒株的出现,由经典PRRSV毒株制备的疫苗更是难以诱导针对高致病性PRRSV的有效保护性免疫反应,因此急需研制针对高致病性PRRSV的新型疫苗。 SFV复制子载体是基于西门利克森林病毒的真核表达载体,它不仅具有自主复制功能,能够高水平表达外源基因,而且具有诱导宿主细胞凋亡的特性。杆状病毒是目前一种应用十分广泛的载体,主要用于基因治疗和疫苗开发等领域。研究发现,杆状病毒载体可以携带哺乳动物启动子驱动的外源基因表达盒进入哺乳动物细胞,从而使外源基因得到高效及稳定的表达。若经过适当的修饰或预处理,还可介导外源基因在哺乳动物体内进行表达,而其自身基因组并不复制和表达。 基于杆状病毒的高转导效率及SFV复制子的自主复制和诱导细胞凋亡的优势,同时为了消除杆状病毒的补体敏感性,本研究利用囊膜表面展示水泡性口炎病毒G蛋白的假型杆状病毒载体,构建了基于SFV复制子的,共表达高致病性PRRSVWUH3株ORF3、ORF4、ORF5(修饰的ORF5)、ORF6四个结构蛋白基因的重组杆状病毒BV-G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6,并对其免疫原性进行了评价。具体研究内容如下: 1.“自杀性”DNA疫苗pSCA1-CMV/SFV-ORF3/4/5/6的构建。 扩增高致病性PRRSV WUH3株的ORF3、ORF4、ORF5(修饰的ORF5)、ORF6基因以及西门利克森林病毒的26s亚基因组启动子,分别构建了由26s亚基因组启动子驱动的ORF3、ORF4、ORF5(修饰的ORF5)、ORF6基因的表达盒,进一步插入“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA1,获得共表达ORF3、ORF4、ORF5(修饰的ORF5)、ORF6基因的“自杀性”DNA疫苗pSCA1-CMV/SFV-ORF3/4/5/6。 2.重组杆状病毒BV-G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6的构建。 用SpeⅠ和SphⅠ分别双酶切质粒pSCA1-CMV/SFV-ORF3/4/5/6和载体pFastBac-VSV/G,将获得的片段CMV/SFV-ORF3/4/5/6插入到载体pFastBac-VSV/G中,得到穿梭质粒pFastBac-VSV/G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6。将构建的穿梭质粒转化DH10Bac感受态细胞,三抗筛选阳性重组子并提取重组Bacmid,经脂质体介导转染sf9昆虫细胞,获得共表达ORF3、ORF4、ORF5(修饰的ORF5)和ORF6基因的重组杆状病毒BV-G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6。 3.重组杆状病毒BV-G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6在小鼠体内诱发的保护性免疫反应。 将构建的重组杆状病毒BV-G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6以3种不同的剂量(109pfu/只,108pfu/只,107pfu/只)经后腿肌肉注射免疫Balb/c小鼠,同时与共表达相同基因的“自杀性”DNA疫苗pSCA1-CMV/SFV-ORF3/4/5/6进行比较。结果表明构建的重组杆状病毒能诱导更强的免疫反应,并呈明显的剂量依赖性,其中109pfu免疫组所诱导的免疫反应最强,首免6周后针对GP5蛋白和全病毒的ELISA抗体滴度分别达到1:4480和1:11200,针对经典毒株CH-1a株和高致病性毒株WUH3株的中和抗体分别达到1:39和1:45以上,ELISA检测IFN-γ水平达1065pg/mL以上,与“自杀性”DNA疫苗免疫组相比,均差异极显著(P0.01)。表明重组杆状病毒BV-G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6是一种具有良好发展前景的猪繁殖与呼吸综合征候选疫苗。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S858.28

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 王海,胡少敏,吴忠道,余新炳;杆状病毒表达载体系统的特点及其在寄生虫学上的应用[J];国外医学(寄生虫病分册);2004年04期
2 郑其升;李鹏;毕志香;牛明福;曹瑞兵;周斌;陈德胜;陈溥言;;PRRSV NJ-a株ORF5基因A表位的修饰与糖基化位点的突变对其DNA疫苗免疫效力的影响[J];生物工程学报;2007年01期
3 李成,李六金,谷守林,蔡虹,姜焕宏,赵世君,张海,李秦;猪繁殖与呼吸综合征病毒形态学特征[J];畜牧兽医学报;2001年06期
4 陈希文,尹苗,程安春;猪繁殖与呼吸综合征免疫学研究进展[J];养猪;2005年01期
5 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙;从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J];中国畜禽传染病;1996年02期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 樊惠英;猪圆环病毒2型基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2007年
2 江云波;猪繁殖与呼吸综合征病毒新型基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 赵骞;基于SFV复制子的重组杆状病毒的研究[D];华中农业大学;2008年
2 王升平;猪繁殖与呼吸综合征重组假型杆状病毒基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2008年
3 王中明;PRRSV GP3和GP4的免疫活性及其在感染细胞内的分布研究[D];河南农业大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 连京华,秦卓明,黄波;鸡传染性支气管炎研究进展[J];山东农业科学;2000年01期
2 钱凤芹,刘长梅,任红梅,李爱芹,庄文忠;鸡新城疫病毒山东分离株F蛋白基因的克隆与鉴定[J];山东农业科学;2001年03期
3 吴家强,颜世敢,胡北侠,任素芳,黄艳艳,张秀美;细胞培养对PRRSV-SD分离株滴度的影响[J];山东农业科学;2002年06期
4 东野传现;史玉颖;黄中利;刘玉山;亓丽红;傅剑;;“禽喘康颗粒冲剂”对鸡人工感染新城疫病毒临床效果的研究[J];山东农业科学;2007年02期
5 李子剑;李云龙;陈苏;艾武;宋敏训;李玉峰;;鸭肠炎病毒US2基因的序列测定与分析[J];山东农业科学;2008年03期
6 邹励丹;彭远义;彭涛;;鸡葡萄球菌病诊治一例[J];安徽农学通报;2007年17期
7 李祥辉;黄大鹏;黄玉兰;;鸡抗小鹅瘟病毒IgY提取方法的比较试验[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年23期
8 张小飞,潘孝成,汪秀娟,赵瑞宏,蒋书东;绩溪县浩寨兔病毒性出血症的诊断[J];安徽农业科学;2002年02期
9 金光明,杨倩;猪繁殖与呼吸综合症免疫学研究[J];安徽农业科学;2003年01期
10 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡传染性法氏囊病病毒冻干保护剂热稳定性研究[J];安徽农业科学;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 庄金秋;梅建国;沈志强;;赤羽病病毒检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 庄金秋;梅建国;沈志强;;犬瘟热病毒实验室检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 冷超粮;安同庆;田志军;;猪繁殖与呼吸综合征病毒中和抗体的研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 孔宁;高继明;马玉萍;赵钦;王承宝;肖一红;周恩民;;高致病性PRRSV感染处于不同细胞周期Marc-145细胞的比较分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
5 蒋再学;陈征兵;林文;余邵华;竺薇;张晓明;罗满林;;仔猪伪狂犬PCR鉴定及病毒分离[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
6 陈宗艳;朱英奇;李传峰;李露;付玉志;王超;刘光清;;新发鸭源呼肠孤病毒(TH11株)的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
7 王珊;刘冰;李德朋;孙远;马勇;田秀丽;宋宇;王承宇;张乃生;;马蹄香治疗犬细小病毒性肠炎的疗效观察[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
8 程晶;荫硕焱;盖新娜;郭鑫;杨汉春;;2006—2008年我国部分地区规模化猪场PRV血清流行病学调查[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
9 赵东升;盖新娜;孙栋;郭鑫;杨汉春;;猪脑心肌炎灭活疫苗的制备及小鼠免疫研究[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
10 方忠意;崔保安;;动物基因工程疫苗研究进展[A];新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会论文集[C];2010年
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1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 赵鹏;猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体选择压下的变异[D];山东农业大学;2010年
3 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
4 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
5 姜中毅;猪传染性肝炎病毒的基因克隆及分子特征研究[D];甘肃农业大学;2009年
6 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
7 黄馨;端粒缩短影响原发性高血压及其并发症的发生[D];北京协和医学院;2010年
8 张琪;KLT对中脑神经系统疾病的影响及KLT、NDV、SW联合抗肿瘤作用机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
9 熊义;IRES调控α-干扰素的抗FMDV研究[D];武汉大学;2009年
10 孙亚妮;免疫组织化学技术在鸡三种病毒性肿瘤病鉴别诊断中的应用[D];山东农业大学;2011年
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1 宋飞;猪圆环病毒2型(WH株)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒混合感染致病性的研究[D];华中农业大学;2010年
2 许媛媛;鸭瘟的动态病理学研究和鸭CD4的克隆[D];华中农业大学;2010年
3 李爽;鸭源禽呼肠孤病毒感染雏鸭的免疫病理学研究[D];华中农业大学;2010年
4 段龙川;产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2010年
5 李燕;猪干扰素刺激基因ISG20的克隆、真核表达及其对PRRSV增殖的影响[D];华中农业大学;2010年
6 肖犟;PRRSV对断奶仔猪生产性能和免疫力相关指标的影响[D];华中农业大学;2010年
7 王艳伟;PRRSV感染激活RANTES产生的信号通路研究[D];华中农业大学;2010年
8 胡智斌;湖北省高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)试用报告[D];华中农业大学;2010年
9 许莹;H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究[D];南京医科大学;2010年
10 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 肖瑶,范秀娟,赵全壁,潘品良,戴传斌,陈刚,王贵杰,邵一鸣;中国HIV-1B亚型P55和嵌合的P55-V3病毒样颗粒候选疫苗免疫效果的研究[J];病毒学报;2000年04期
2 方六荣,肖少波,江云波,牛传双,张辉,陈焕春;表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5的重组伪狂犬病毒TK~-/gG~-/GP5~+的构建及其生物学特性初步探讨[J];病毒学报;2004年03期
3 郭致君,王文泉,关智慧,金卫红;猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的研制[J];当代畜牧;2002年03期
4 仇华吉,周彦君,童光志;猪生殖-呼吸综合征病毒蛋白的结构与功能[J];动物医学进展;2000年02期
5 窦永喜,王云;猪繁殖和呼吸系统综合征病毒的分子生物学研究进展[J];动物医学进展;2001年04期
6 胡少敏,王海,吴忠道;杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体及其在医学中的应用[J];国外医学(寄生虫病分册);2004年05期
7 朱诗应;小鼠口服HEV病毒样颗粒后产生全身及粘膜免疫应答[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2002年02期
8 王忠田,郭鑫,杨汉春,查振林,陈艳红;六株猪圆环病毒2型国内分离株的全基因组序列测定与分析[J];农业生物技术学报;2005年01期
9 许辰煜,程通,卢五迅,陈敏,吴婷,王颖彬,张军,夏宁邵;杆状病毒对不同哺乳动物细胞基因转移及表达效率的研究[J];生物工程学报;2004年01期
10 汤德元;汪忠荣;李诗举;李春燕;;猪繁殖与呼吸综合征病毒基因及其疫苗的研究[J];世界农业;2006年07期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 宋勤叶;表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白重组质粒的构建及免疫效应[D];中国农业大学;2005年
2 梁昌镛;杆状病毒与哺乳动物细胞相互作用的研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2005年
3 宋建华;杆状病毒介导的基因表达及p35抗生物和非生物胁迫的研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2006年
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1 范晓军;曹建斌;许成钢;付月君;张志云;梁爱华;;重组杆状病毒(AcMNPV-BmKIT-Chi)的杀虫活性和安全性初步研究[J];华北农学报;2007年05期
2 骆学农,才学鹏,庄文忠;猪囊虫酸性核糖体磷蛋白基因P2重组杆状病毒的构建及鉴定[J];中国兽医科技;2003年04期
3 李贺;孟庆文;冉多良;于康震;陈化兰;李永强;吴东来;;禽流感病毒A/PFV/Restock/34(H7N1)HA基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达[J];中国预防兽医学报;2006年03期
4 王晓玲;魏美才;夏春兰;;昆虫杆状病毒的研究与应用[J];河南农业科学;2006年06期
5 王海燕;郭振光;盛瑜;陈义平;吴艳涛;高崧;刘秀梵;;表达PCV2 Cap蛋白重组杆状病毒对小鼠的保护力试验[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2008年02期
6 李坚;王敦;;生物防治杆状病毒基因工程研究进展[J];生物技术通讯;2009年04期
7 张翔峰;何逸民;曹宗喜;孔留五;张得玉;秦宏阳;张桂红;;猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5重组杆状病毒疫苗的研究[J];中国畜牧兽医;2010年09期
8 李颖;孙兴鲁;浦冠勤;;昆虫杆状病毒杀虫剂的研究进展[J];中国蚕业;2010年04期
9 吕蓓;;重组杆状病毒试验[J];生物技术通报;1997年01期
10 邓国华,马文军,于康震;禽流感病毒核蛋白基因在重组杆状病毒中的表达[J];中国预防兽医学报;1999年02期
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1 黄锋涛;崔晓娴;曹胜波;熊传喜;王敏;王卫民;吴兵;刘学芹;;重组杆状病毒高效转导鱼类细胞[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
2 刘祖强;朱应;齐义鹏;;携带外源基因的重组杆状病毒对昆虫幼虫中肠侵染的初步观察[A];全国生物防治暨第八届杀虫微生物学术研讨会论文摘要集[C];2000年
3 朱碧波;徐敏;叶静;蒋蓉;杨晓红;傅振芳;陈焕春;曹胜波;;表达西尼罗河病毒prM/E蛋白的重组杆状病毒的构建及其免疫原性分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 曹建斌;范晓军;梁爱华;;重组杆状病毒(AcMNPV-BmKIT-Chi)的杀虫活性和安全性研究[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
5 曹建斌;范晓军;梁爱华;;重组杆状病毒(AcMNPV-BmKIT-Chi)的杀虫活性和安全性研究[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
6 吴金美;Hong T.;S.B.Braunagel;M.D.Summers;;利用URF-13基因构建的重组杆状病毒rAcNPV-23URF13对甘蓝银纹夜蛾Trichoplusiani的杀虫效果研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(上册)[C];1999年
7 独军政;刘胜旺;陈怀涛;孔宪刚;;鸡白细胞介素15基因在昆虫细胞中的高效表达[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分第12次暨中国动物病理生理学专业委员会第11次学术讨论会论文集[C];2003年
8 张绍杰;倪健强;孟松树;王柳;仇华吉;王云峰;童光志;;鸡传染性喉气管炎病毒王岗株糖蛋白gB基因在重组杆状病毒中的表达[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
9 赵春文;肖定华;王嘉玺;;利用重组杆状病毒在昆虫细胞SF-9中表达人白介素-6[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
10 刘涛;张耀洲;;人乳铁蛋白cDNA的克隆及在家蚕细胞中的表达[A];首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 布里;继续加大高致病性猪蓝耳病防控力度[N];中国畜牧兽医报;2007年
2 黄雄壮;桐城市全力防控高致病性猪蓝耳病[N];中国畜牧兽医报;2007年
3 记者 荣锋;我省紧急防控高致病性猪蓝耳病[N];发展导报;2007年
4 ;猪“高热病”疫情主要由高致病性猪蓝耳病引起[N];河北科技报;2007年
5 ;农业部兽医局局长贾幼陵介绍我国高致病性猪蓝耳病防控情况[N];江苏农业科技报;2007年
6 桂亮 罗五;散养户生猪免疫疫苗免费[N];江苏农业科技报;2007年
7 宁启文;中国高致病性猪蓝耳病防控一贯公开透明[N];农民日报;2007年
8 本报记者 蔺丽莉;全国高致病性猪蓝耳病疫情已得到初步遏制[N];中国信息报;2007年
9 王淳;猪蓝耳病灭活疫苗试验成功[N];瓜果蔬菜报.农业信息周刊;2007年
10 王秀荣;高致病性猪蓝耳病疫苗应免费提供给散养户[N];河北日报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘涛;家蚕生物反应器表达人乳铁蛋白及其功能研究[D];浙江大学;2005年
2 潘永飞;重组杆状病毒作为一种新型的基因治疗载体的研究[D];华中农业大学;2009年
3 姜一峰;高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒强弱毒毒力差异的分子基础研究[D];中国农业科学院;2012年
4 仇华吉;猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-la株基因组解析及其囊膜蛋白结构与功能分析[D];东北农业大学;2001年
5 张明策;人乳头瘤病毒11型L1基因的克隆、表达与表达产物的免疫学分析[D];中国协和医科大学;2001年
6 王淼;人乳头瘤病毒6型衣壳蛋白L1和L2基因的克隆、表达及病毒样颗粒的装配与免疫学分析[D];中国协和医科大学;2002年
7 张绍杰;表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];中国农业科学院;2000年
8 金红;牛流行热病毒外膜糖蛋白G基因在重组病毒中的表达研究[D];东北农业大学;2000年
9 王晶晶;戊型肝炎病毒ORF3蛋白的功能研究[D];华中科技大学;2012年
10 张洪涛;艾滋病毒颗粒样疫苗的研究[D];中国协和医科大学;2000年
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1 徐珊珊;重组杆状病毒介导的高致病性猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2010年
2 宋丽;杆状病毒表达系统介导的猪圆环病毒2型基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2011年
3 黄春旭;鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白在杆状病毒表面的展示及其免疫原性研究[D];西北农林科技大学;2010年
4 孙兴鲁;斜纹夜蛾重组杆状病毒的构建及生物学活性测定[D];苏州大学;2011年
5 苏晓月;重组杆状病毒介导甲型H1N1流感基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2011年
6 黄锋涛;重组杆状病毒表达SVCV G蛋白及其转导鱼类细胞的研究[D];华中农业大学;2011年
7 倪佳;表达水貂肠炎病毒VP2蛋白的重组杆状病毒的构建及其免疫原性分析[D];中国农业科学院;2011年
8 杨晓红;非洲猪瘟病毒P72基因单克隆抗体的制备及其重组杆状病毒的构建[D];华中农业大学;2012年
9 徐敏;西尼罗河病毒重组杆状病毒和重组慢病毒的构建[D];华中农业大学;2010年
10 刘丽华;柞蚕核型多角体病毒分子生物学及杆状病毒感染特性[D];苏州大学;2004年
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