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《华中农业大学》 2010年
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动物可食组织中安眠酮残留的ELISA检测方法研究

崔翔  
【摘要】: 安眠酮(methaqualone,MTQ)为喹唑酮类衍生物,属于非巴比妥类中枢神经镇定药。在临床上常做为镇静、催眠药物,也用于麻醉前给药。长期服用此药会产生依赖性或成瘾性,因此安眠酮成为世界各国的管制类精神药物。但是由于安眠酮生产工艺比较简单,不法分子转入地下大量生产安眠酮,大肆用于畜禽养殖。因此,必须控制安眠酮在动物性食品中的残留,保障消费者健康与安全。 本文完成了安眠酮完全抗原的制备及鉴定,建立了用于快速检测动物可食组织中安眠酮的间接竞争ELISA法,并且优化了安眠酮在动物可食组织中的提取、纯化方法。 本试验用采用活泼酯法将延伸出羧基的半抗原安眠酮与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清白蛋白(OVA)偶联制备人工完全抗原。采用紫外扫描光谱和SDS-PAGE电泳、红外扫描光谱以及间接ELISA试验均表明偶联成功。用间接非竞争ELISA法优化ELISA工作条件,建立了间接竞争ELISA检测MTQ在动物可食组织中残留检测的方法。方阵滴定法确定了MTQ包被抗原的浓度为1.25ug/mL,多抗MTQ阳性血清的工作浓度为1:64000,酶标二抗(兔抗羊IgG-HRP)工作浓度为1:5000。 以系列稀释的MTQ标准溶液作为添加样品,绘制标准曲线,得到的线性回归直线方程为y=-0.2373x+0.5639,相关系数,r2=0.993,标准曲线在0.15~37.97 ng/ml之间呈较好线性关系,最低检测限0.18ng/ml。在组织提取部分,动物组织中安眠酮添加的平均回收率为86.29%,说明该方法动物组织中安眠酮能够较好地被回收。计算不同浓度的MTQ与抗血清进行竞争反应时的抑制率,对同一批次的检测结果进行分析,得到的标准竞争抑制曲线的批内平均变异系数为在2.21%-12.05%范围内,对不同批次的检测结果进行分析,得到的标准竞争抑制曲线的批间平均变异系数在5.24%~10.93%范围内,也表明本研究方法重复性较好。在可测定浓度范围内,安眠酮(MTQ)抗血清与地西泮可能会因同时使用而导致共同残留,该试验与其交叉反应率小于0.01%,这表明所建立的方法有较高特异性和选择性,适合安眠酮残留样本快速检测。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S859.84

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【参考文献】
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>崔翔 >钱晓东
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