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《华中农业大学》 2011年
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利用RNAi沉默橘小实蝇生殖相关基因的研究

张明艳  
【摘要】:橘小实蝇Bactrocera dorsalis (Hendel)是国内毁灭性果蔬害虫,其主要以幼虫潜食为害,影响多种水果的产量与品质。目前,对橘小实蝇的防治研究主要是生物防治和诱剂研究等传统的防治方法,分子生物学水平的防治研究领域还处于空白。RNAinterference (RNAi)是利用dsRNA诱导序列特异的转录后基因沉默,在多种昆虫中已经通过喂食法成功实现了靶标基因的沉默,但在双翅目昆虫中仍未建立成功的喂食法RNAi技术平台。 本研究选取生殖相关基因noa和rab11作为靶标基因,通过分别构建noa、rab11dsRNA表达载体和利用Real-time PCR等基因工程和分子生物学技术从靶标基因表达水平、产卵量和死亡率等方面探讨了喂食法在橘小实蝇中实现RNAi的可行性,为RNA干扰在害虫防治领域的普遍应用提供理论依据和新的思路。 成功克隆了橘小实蝇noa、rabl1两个产卵相关基因cDNA片段,分别为全长的51%和92%。通过BLAST进行核酸序列分析,结果表明这两个基因片段所在区域均与果蝇的同源性最高,分别为82%、85%。利用CLUSTAL X2.0分析其氨基酸片段序列,结果表明橘小实蝇noa、rabl1基因与果蝇在获得片段所在区域内的同源性分别为94%和98%。 通过分别构建表达noa、rabll dsRNA的载体,在大肠杆菌HT115中诱导表达其相应的dsRNA。Real-time PCR结果表明,与对照组相比,dsRNA饲喂法和菌液饲喂法均可以使靶标基因表达量下调,noa、rab11的最大下调量分别为71.3%和66.7%。此外与对照组相比,noa、rab11 RNAi均可以在一定程度上导致产卵量的下降,同时,通过dsRNA喂食法实现的rab11RNAi可以导致成虫20%的死亡率。在持续饲喂dsRNA和表达dsRNA的菌液的14天中,靶标基因均出现了过表达现象。与对照组相比,生测组rabl1在dsRNA饲喂法的第七天达到最大上调量14.77倍,生测组noa在菌液饲喂法的第二天达到最大上调量2.55倍。 本研究得到以下结论:通过dsRNA畏食法和菌液喂食法均可以在橘小实蝇中实现靶标基因的沉默。同时,持续喂食dsRNA或表达dsRNA的菌液均可以导致靶标基因的超表达。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S433

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱江,陈美,迮玉官;卵壳蛋白族的分子生物学研究[J];蚕业科学;2000年S1期
2 郝海红,卿柳庭,郭定宗;RNA干扰技术[J];动物医学进展;2005年07期
3 王继文;RNA干扰技术及应用的研究进展[J];国外医学(分子生物学分册);2003年03期
4 王军;张以芳;张晔;;RNAi技术的应用[J];中国畜牧兽医;2007年02期
5 向会耀;郝葆青;谭玉梅;秦天英;宋慧;;RNAi导致基因沉默的机制和应用进展[J];中国畜牧兽医;2007年03期
6 孔秋莲;叶军;岳玲;陈志军;包英姿;徐赟;郭卡;袁忠谊;戚文元;;快速检测水果中桔小实蝇卵的分子诊断方法研究[J];华北农学报;2010年01期
7 张格成,李继祥;柑桔小实蝇的发生特点及综合治理(一)[J];中国农村科技;1997年11期
8 梁帆,吴佳教,梁广勤;桔小实蝇飞行能力测定试验初报[J];江西农业大学学报;2001年02期
9 黄勇;申光茂;刘丽;熊赛;蒋红波;王进军;;桔小实蝇CYP4D46的克隆及其组织特异性表达研究[J];环境昆虫学报;2010年02期
10 施伟,叶辉;云南桔小实蝇五个地理种群的遗传分化研究[J];昆虫学报;2004年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 高强;橘小实蝇人工饲料的研究[D];华中农业大学;2005年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郜瑞;李灵君;石慧;赵霞霞;;RNA干扰及其在药物靶标识别和确证中的应用[J];安徽农学通报;2008年17期
2 付佑胜;赵桂东;潘建平;田世尧;王沫;;橘小实蝇引诱物质研究进展[J];安徽农业科学;2006年09期
3 袁梦;王波;宋采博;荣秀莲;尹颖;;气候因子和寄主植物对苏州桔小实蝇种群动态的影响[J];安徽农业科学;2008年22期
4 杨丽英;刘建宏;熊小真;;东方果实蝇防治技术研究概况[J];安徽农业科学;2008年36期
5 郑福山;强承魁;董红霞;沈媛;;二化螟的采集与室内饲养方法[J];安徽农业科学;2009年17期
6 刘建宏;熊小真;杨丽英;熊忠平;潘涌智;;基于GARP生态位模型的江西桔小实蝇适生区分析[J];安徽农业科学;2010年34期
7 罗冰;袁盛勇;田学军;孔琼;朱文禄;陆进;;球孢白僵菌MZ041016菌株对甜菜夜蛾幼虫的毒力测定[J];安徽农业科学;2010年36期
8 袁波;莫怡琴;;贵州铜仁地区柑橘凤蝶的人工饲养方法·特征特性及应用[J];安徽农业科学;2011年02期
9 熊小真;刘建宏;杨丽英;黎小军;;桔小实蝇及其复合种研究进展[J];安徽农业科学;2011年07期
10 李建芳;刘占林;;微卫星数据“01”化的研究[J];安徽农业科学;2011年17期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈凯歌;邱雪兰;赵静;曾鑫年;;非寄主植物提取物对橘小实蝇成虫的产卵驱避作用[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
2 林珠凤;肖彤斌;芮凯;谢圣华;吉训聪;秦双;陈绵才;;土壤处理对橘小实蝇的防治效果[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
3 周密;王迎波;肖铁光;周社文;;橘小实蝇生物学及防治研究[A];依靠科技进步和创新加快发展现代农业学术研讨会优秀论文集[C];2009年
4 付达英;胡劭骥;叶辉;;云南稻飞虱的研究现状探讨[A];云南省昆虫学会2009年年会论文集[C];2009年
5 范秀芝;徐章逸;边银丙;;RNA干扰技术及其在真菌研究中的应用前景[A];中国菌物学会第四届会员代表大会暨全国第七届菌物学学术讨论会论文集[C];2008年
6 赵菊鹏;梁帆;梁广勤;胡学难;;橘小实蝇的生物学特性及防治[A];科技创新与绿色植保——中国植物保护学会2006学术年会论文集[C];2006年
7 张彬;刘映红;赵兰兰;周旭;;桔小实蝇研究进展[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
8 徐昭焕;陈巨莲;程登发;徐洪富;刘勇;孙京瑞;范佳;;害虫生物型研究进展[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
9 刘忠善;王绍君;苏云飞;王庆红;丁元明;郭倩;;云南怒江州实蝇主要种类及种群动态监测[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
10 左洪亮;李海怡;高璐;钟国华;;RNAi作用机制及其在害虫防治领域的应用前景[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张升祥;家蚕气味结合蛋白基因的研究[D];山东农业大学;2009年
2 郑小坚;家蚕类胰岛素基因BBX-B8的功能研究[D];苏州大学;2010年
3 徐昭焕;中国麦长管蚜的种群分化[D];山东农业大学;2011年
4 王洪秀;橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)成虫肠道细菌分子多态性分析及其功能研究[D];华中农业大学;2011年
5 侯雅芹;林业生物灾害应急管理理论与实践[D];北京林业大学;2012年
6 陶静;沙棘木蠹蛾种群遗传结构与灾害发生机制的分子生态学研究[D];北京林业大学;2012年
7 陈巨莲;小麦抗蚜生化机理和G蛋白在离体昆虫细胞系中表达、纯化及活性测定[D];中国农业科学院;2001年
8 黄志伟;印楝素对亚洲玉米螟和斜纹夜蛾的生长调节机制研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
9 郝赤;铜绿微囊藻毒素对棉铃虫和菜青虫的杀虫活性及机制的研究[D];山西农业大学;2005年
10 罗宏伟;小黑瓢虫人工繁殖技术的研究[D];福建农林大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 金占宝;赤拟谷盗不同地理种群差异性比较研究[D];华中农业大学;2010年
2 张总泽;向日葵螟生物学特性、发生为害规律及监控技术研究[D];华中农业大学;2010年
3 毛增辉;菜粉蝶线粒体基因组全序列及其不同地理居群的nrDNA ITS1序列的比较分析[D];安徽师范大学;2010年
4 申圭良;浏阳霉素毒性及防螨效果研究[D];湖南农业大学;2010年
5 费旭东;中国丽蝇科分类学研究及在法医昆虫学中应用的探讨[D];沈阳师范大学;2011年
6 张起玉;泰山蝶类物种多样性及区系分析[D];山东农业大学;2011年
7 季静;毒死蜱微囊悬浮剂防治花生田蛴螬应用技术及对环境生物毒性评价[D];山东农业大学;2011年
8 赵秀芝;龟纹瓢虫种质资源筛选及其评价研究[D];山东农业大学;2011年
9 张逸凡;甜菜夜蛾嗅觉受体Sexi\Orco基因表达谱与RNA干扰研究[D];山东农业大学;2011年
10 凌飞;三种果树食心虫发生为害和梨小食心虫耐寒性研究[D];山东农业大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 闫路娜,张德兴;种群微卫星DNA分析中样本量对各种遗传多样性度量指标的影响[J];动物学报;2004年02期
2 刘小勇,田素忠,秦国夫,沈瑞祥;提取植物和微生物DNA的SDS-CTAB改进法[J];北京林业大学学报;1997年03期
3 崔为正,张国基,王洪利,王彦文,王伟东,周文东,张文东,尉瑞,魏延超;桑蚕人工饲料加工调制工艺对饲料质量的影响[J];蚕桑通报;1998年01期
4 徐俊良,缪云根,黄健辉,潘孙曙;人工饲料育不同激素添食对饲料效率的影响[J];蚕桑通报;1998年03期
5 崔为正,李卫国,胡增娟,徐俊良;桑蚕摘除部分感觉器对人工饲料摄食性的影响[J];蚕桑通报;1999年03期
6 徐俊良,缪云根,袁碧华,葛秀兰,吴小锋,浜野国胜,伊藤智夫;不同蚕品种对桑叶粉含量不同的人工饲料摄食性[J];蚕业科学;1993年01期
7 崔为正,王彦文,李卫国,徐俊良;大豆粉中家蚕忌避因子的阻食机理及理化性质研究[J];蚕业科学;1999年02期
8 李成,张滨丽,李杰;RNAi技术的研究进展和发展前景[J];东北农业大学学报;2005年03期
9 成新跃,周红章,张广学;分子生物学技术在昆虫系统学研究中的应用[J];动物分类学报;2000年02期
10 张亚平,施立明;动物线粒体DNA多态性的研究概况[J];动物学研究;1992年03期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 龚鹏;棉蚜Aphis gossypii Glover种群分化的分子遗传标记研究及性蚜的诱导[D];南京农业大学;2000年
2 余道坚;检疫性实蝇分子生物学快速鉴定技术的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
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1 唐少冰;周冬根;;RNA干扰技术及其在植物研究中的应用[J];生物技术通报;2007年05期
2 陈菁菁;晏立波;官春云;;RNA干扰及其应用研究[J];作物研究;2008年S1期
3 乔枫;樊颖伦;杨清;赵开军;;RNAi分子机制及在植物功能基因组研究中的应用[J];生物技术通报;2006年04期
4 魏玉杰;何庆祥;张梅秀;常瑛;;RNAi技术及其应用综述[J];甘肃农业科技;2008年11期
5 尹国;张朝军;李付广;;RNA干涉技术在棉花中的应用与展望[J];中国农业科技导报;2010年01期
6 王丽焕;邓永昌;童琪;宾莉;向锦;;RNAi及其在家畜繁殖中的应用[J];草业与畜牧;2010年03期
7 仲明;张宏福;董枫岚;孙绍光;王润平;杨琳;;RNAi技术及其在畜牧业中的应用前景[J];中国畜牧兽医;2006年08期
8 王志坤;李文滨;刘珊珊;;RNA干扰技术及在植物抗病研究中的应用[J];大豆科学;2008年03期
9 周波;孙梅;阎淑滑;李玉花;;隐花色素CRY2基因片段克隆及RNAi植物表达载体的构建[J];分子植物育种;2008年06期
10 樊娜娜;郭晓;刘生祥;杨煜;张柏顺;范仲学;李广存;;马铃薯抗青枯病相关基因的研究进展[J];山东农业科学;2009年12期
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1 左洪亮;李海怡;高璐;钟国华;;RNAi作用机制及其在害虫防治领域的应用前景[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
2 刘桂林;王志宇;张珊珊;;RNAi技术及其在抗禽流感病毒感染中的应用[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
3 苏玉虹;张俊峰;;在哺乳动物细胞内诱导持续性的RNAi研究策略[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会第五次全国会员代表大会暨养猪业创新发展论坛论文集[C];2010年
4 宋少康;董雅娟;牛召珊;朱孟芝;柏学进;;RNAi技术及其研究应用进展[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
5 孙朕;樊宝良;;有效避免干扰素反应的RNA聚合酶Ⅱ启动子驱动表达长dsRNA的RNAi载体的设计、构建及初步验证[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
6 吕小青;杨慧;李秋艳;李宁;;利用RNAi生产抗猪繁殖与呼吸综合征病毒转基因猪的研究[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
7 于丹;金春顺;杨景朴;刘岩;文连姬;赵胤;;新型RNAi载体的构建及其对喉癌干细胞增殖抑制及诱导凋亡的研究[A];吉林省医学会第九次耳鼻咽喉—头颈外科学术会议论文汇编[C];2011年
8 王琼;彭振辉;王万卷;耿松梅;牛新武;王梅;刘平;;RNAi对人类皮肤成纤维细胞COL1A1及COL3A1表达的影响[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年
9 王静;龚萍;马骁;龚炎长;彭秀丽;俸艳萍;李世军;;逆转录病毒介导的鸡Foxl2基因RNAi载体的构建[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
10 郭帅;许丹;;草鱼呼肠孤病毒(GCRV)体外抑制RNA干扰途径(RNAi)[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 医学博士 科学松鼠会成员 致桦;美丽的干扰[N];中国经营报;2010年
2 编译 李勇;RNAi药物研究或再升温[N];中国医药报;2011年
3 记者 温海龙;十四国专家来榕“取经”[N];福州日报;2009年
4 省植保所 贺淑岚;掌握发生规律 防治橘小实蝇[N];湖南科技报;2007年
5 吕兴晨;创新催生产业 科技改变民生[N];人民政协报;2011年
6 贝绍国崔俊霞;宁波空港截获橘小实蝇[N];中国国门时报;2008年
7 蒋立明;建立研发基地 开发高新技术[N];绍兴日报;2009年
8 王丹 陈骏锋;苏州局科研项目获苏州市科技局立项[N];中国国门时报;2006年
9 谷文;百奥迈科与Benitec开发新型小核酸干扰抗乙肝药物[N];中国医药报;2009年
10 省农业厅植保植检站提供;今年柑桔大实蝇控防目标确定[N];湖南科技报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李振华;LIMK1表达对人成骨肉瘤细胞生物学活性影响的体外研究[D];吉林大学;2008年
2 田保明;基于RNAi技术的BnFAE1基因沉默及对甘蓝型油菜芥酸合成的影响[D];华中农业大学;2010年
3 张明芳;RNAi沉默Notch1、Notch2对人胶质瘤U251细胞增殖的影响及其机制[D];福建医科大学;2010年
4 杨德君;应用RNAi技术对大肠癌ECGF1基因生物功能的研究[D];吉林大学;2006年
5 马旭;RNAi抑制S100A4基因表达及其对骨肉瘤细胞侵袭、转移能力的影响[D];中国医科大学;2009年
6 王凯;腺病毒载体介导靶向bFGF的RNAi对体外培养前列腺间质细胞bFGF表达及其增殖和凋亡的影响[D];中国医科大学;2009年
7 付善民;用RNAi技术逆转人涎腺腺样囊性癌和粘液表皮样癌细胞耐药性的初步研究[D];第四军医大学;2010年
8 武向梅;RNAi沉默Bmi-1基因表达对MCF-7细胞生物学特性及阿霉素敏感性影响的研究[D];重庆医科大学;2010年
9 杨少宗;杨树茎木质素的RNAi调控及糖化特性分析[D];中国林业科学研究院;2010年
10 罗彦忠;拟南芥RNAi文库的构建及其突变体库的初步创制[D];中国农业科学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 和琼姬;转AtDCL2、AtDCL4和AtRDR6基因水稻研究[D];浙江师范大学;2010年
2 刘霞;腺病毒载体介导的RNAi抑制肺间质纤维化大鼠TGF-β1基因表达的研究[D];郑州大学;2010年
3 张国峰;慢病毒载体介导的RNAi抑制牛整联蛋白亚基αv基因表达的研究[D];中国农业科学院;2011年
4 马冬芹;油葵PEPC基因保守序列的克隆及RNAi载体的构建[D];河北科技大学;2011年
5 赵留芳;RNAi介导survivin抑制鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤的实验研究[D];昆明医学院;2011年
6 王旭;利用慢病毒介导的RNAi技术沉默细胞中MKK6的研究[D];东北林业大学;2010年
7 李开东;利用双T-DNA载体系统和RNAi培育抗水稻条纹病毒转基因水稻[D];山东农业大学;2011年
8 张艳;NgR特异性RNAi对EAE大鼠脑内NgR表达、小胶质细胞及髓鞘修复的影响[D];重庆医科大学;2010年
9 刘丹丹;STAT6基因RNAi表达载体的构建及其沉默效应观察[D];重庆医科大学;2010年
10 黄浦;Caveolin-1对3T3-L1细胞生长的影响及其在胰岛素信号通路中的作用[D];南华大学;2011年
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