收藏本站
《华中农业大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

柑橘黄龙病昆虫介体—柑橘木虱的研究及九里香感染黄龙病菌后的差减文库构建

王辉  
【摘要】:柑橘黄龙病,也称作青果病,是柑橘上最严重的病害之一。黄龙病防治至今还没有有效的根治方法。柑橘木虱(Diaphorina citri)是黄龙病唯一的传播媒介。九里香(Murrava paniculata)为芸香科植物九里香属植物,是柑橘木虱最喜食的植物之一,感染黄龙病后很少表现症状。九里香作为抗黄龙病材料已有研究,但关于九里香感染黄龙病菌后基因表达情况研究很少。 本研究采集田间具有典型黄龙病症状的样品,并对样品嫁接进行室内生物学鉴定、PCR扩增确定柑橘黄龙病阳性样品。在室外自然条件下研究柑橘木虱对福建茶和芸香科植物的选择性,观察柑橘木虱在福建茶和九里香上的生活周期,并在室内条件下研究柑橘木虱不同龄期若虫和成虫的饥渴耐受时间。采用不同浓度海芋乙醇提取物处理柑橘木虱若虫和成虫,采用夹毒叶片法分别测定提取物对柑橘木虱致死率,研究海芋提取物对柑橘木虱的生物活性。比较九里香感染黄龙病的不同途径,找出最佳感染途径后,收集感染黄龙病的九里香作为研究材料,应用SSH方法构建了九里香感染黄龙病早期的差减cDNA文库,分离获得在黄龙病病程相关的相关的cDNA片段,从中筛选出与抗性相关的基因片段。利用高效热不对称PCR技术扩增感染黄龙病菌的九里香的STH-21的cDNA全长,旨在克隆九里香上与黄龙病相关蛋白的STH-21蛋白的全长定量检测表达情况。本文主要研究结果如下: 柑橘木虱可在福建茶和九里香上生存繁殖,两者若虫历期和成虫历期差异较大,福建茶上若虫期(15.0-20d),成虫期(17-19d),对照九里香上分别是15.0~17.0d和20.0~23.0d,福建茶上生活周期和九里香上相近,福建茶上为39.0-44.0d,九里香为39.0-45.0d九里香上若虫发育为成虫成活率为16.9%。比九里香低。福建茶对柑橘木虱是一种可接受寄主而不是最适合的寄主.柑橘木虱对寄主选择性测定显示该虫在选择各寄主之间差异明显,最适寄主为黄皮和九里香,其次是柠檬,沙田柚、红江橙和椪柑差异不大,很少取食枳壳。耐饥渴能力测试结果表明,低龄若虫和高龄若虫在供水缺食物时平均存活时间分别为10.0~12.0h和39.0~40.0 h,成虫可存活69.0-75.0h;在缺水供食物的条件下,平均存活时间分别为8.0-8.8h和35.0-37.0h,成虫为48.0-50.0h,在缺水缺食物的情况下,平均存活为7.7-8.2 h和15.0-18.0左右,成虫为36.0-38.0h。水分能延长柑橘木虱存活时间,成虫的耐受能力强于若虫。海芋挥发性物质和不同浓度乙醇提取物毒杀效果表明:挥发性气体物质0.5h内对柑橘木虱有强效毒杀作用。各级浓度提取物乙醇溶液对柑橘木虱成虫和若虫均有不同程度的杀灭效果。10克/100mL对木虱才有很强的毒杀作用,3h时每组死亡的平均数量为9.3,7h后几乎全部死亡,校正死亡率分别为45.6%和98.4%。提取物浓度为5克/100mL时,3H和24h后每组的平均校正死亡率分别为23.5%和71.0%。随着浓度的降低到0.1克/100mL,平均校正死亡率分别为8.5%和11.5%基本失去了毒杀作用。 采用汁液摩擦、注射和挤压法,接种2个月后不能在九里香植株体内检测到黄龙病菌;黄龙病阳性接穗红江橙(Citrus sinensis Osbeck)嫁接九里香能使黄龙病菌成功侵染九里香,但接穗不能抽芽。草地菟丝子(Cuscuta campestris)和虫媒柑橘木虱(Diaphorina citri)都能成功从阳性植株体内将黄龙病菌传播至九里香。柑橘木虱传“毒”效率结果显示:木虱在红江橙阳性植株上取食1.5h-2h就能携带黄龙病菌,病原从柑橘木虱传到健康的九里香上最短需要12h,单头木虱带菌就能使九里香成功感染黄龙病菌。温度对病原的传播效率有较大影响,气温高于35℃或低于15℃时,介体昆虫活力差,传播病原的效率较低,0℃温度下木虱几乎不传播病原。40-C时昆虫死亡率高,活力差。 采用抑制差减杂交技术,构建了柑橘黄龙病菌侵染九里香后不同时段的混合样品SSH正向和反向文库。Nest-PCR结果表明,插入片段大小平均为400 bp大小从0.2 kb到lkb不等。通过反向Northern斑点杂交技术对两个差减文库中400个片段进行筛选(正向300个,反向100个),共获得了167个差异EST表达片段。其中黄龙病菌诱导寄主上调表达的基因115个,下调表达的基因52个。利用BLASTn和BLASTx对所得EST进行相似性分析,结果显示,目前在柑橘中报道的仅有10个,其它绝大部分来源于拟南芥、蓖麻属、和番茄等。在167个ESTs片段中,36%尚不能推断明确其功能,其余64%涉及抗病防御、转录、信号转导、能量、代谢、蛋白质合成等信号途径,提示黄龙病菌与寄主互作是一个多基因参与的过程。研究结果对认识黄龙病菌-寄主互作的分子机制和寻找抗病相关基因有理论与实践意义。 半定量PCR用来检测文库中miraculin-like protein, sthp2-21 ubiquitin-conjugating enzyme 8, chlorophyll A/B binding protein片段感染黄龙病菌前期表达情况,结果显示,miraculin-like protein, sthp2-21, ubiquitin-conjugating enzyme8属于上调表达基因,chlorophyll A/B binding protein属于下调表达基因,获得了九里香病程相关蛋白STH21基因的cDNA全长序列。该基因与葡萄属(fragaria)的同源性为68%,与马铃薯pSTH-21基因核酸序列的同源性为67%,与其它植物的同源性为50%~60%。半定量RT-PCR分析表明,黄龙病菌感染两周后该基因的表达量达到高峰。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S436.66

手机知网App
【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 钟云;Candidatus liberibacter asiaticus诱导的柑橘转录组学及蛋白组学研究[D];湖南农业大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴世盘;章潜才;;柑桔黄龙病叶的细胞病变观察[J];电子显微学报;1985年02期
2 陈駉;宋端琳;;利用柑桔茎尖显微嫁接技术培育无病苗试验初报[J];福建果树;1987年01期
3 张名福,黄秀琴;柑桔黄龙病田间症状识别系统观察[J];福建果树;1998年03期
4 林尤剑;高日霞;;应用FBA染色法观察柑桔黄龙病病株中的病原难培养细菌[J];福建农学院学报;1990年01期
5 柯穗,李开本,柯冲,蔡希灼;通过菟丝子成功地将黄龙病病原从柑桔传到长春花[J];福建省农科院学报;1986年01期
6 柯穗,李开本,柯冲,蔡希灼;柑桔黄龙病病原从长春花回接柑桔的试验简报[J];福建省农科院学报;1988年01期
7 许长藩,夏雨华,李开本,柯冲;柑桔木虱传播黄龙病的规律及病原在虫体内分布的研究[J];福建省农科院学报;1988年02期
8 刘利华,姚锦爱,种藏文,谢荔岩;柑桔黄龙病亚洲种病原的PCR-SSCP分析[J];福建农业学报;2005年02期
9 吴定尧;柑桔木虱的习性与黄龙病发生的关系[J];中国柑桔;1980年02期
10 戴月明,陈乃荣,陈循渊,廖长青,蔡明段,沈菊英,陈作义;柑桔黄龙病传病昆虫木虱的研究[J];中国柑桔;1982年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王朝霞;江昌俊;蔡海云;;茶树β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA片段的克隆与序列分析[J];安徽教育学院学报;2006年03期
2 刘鹏,刘庆忠,王勇,李新华;喜温作物的低温损伤及其抗冷性的研究进展[J];山东农业科学;2004年02期
3 牛永强;高鹏;路来明;杨华;;草坪草的低温胁迫及抗寒性的研究进展[J];山东农业科学;2012年03期
4 王媛;杨红玉;;植物的抗病性及其分子机制[J];安徽农学通报;2006年09期
5 杨微;高阳;王煜;周宏璐;;抗菌肽及其在农业上应用的研究进展[J];安徽农学通报;2008年15期
6 季伯衡;持续植保与植保系统工程[J];安徽农学通报;1999年01期
7 黄传杰;植物基因工程技术在病虫害防治中的应用与展望[J];安徽农业科学;2001年03期
8 李晓兵,吴爽;稻瘟病抗性的生理生化机制[J];安徽农业科学;2002年04期
9 傅晓艺,刘桂茹,杨学举;植物病害中的信号传导[J];安徽农业科学;2005年05期
10 林丽;张春宇;李楠;范海延;;植物抗病诱导剂的研究进展[J];安徽农业科学;2006年22期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙明娜;张勇;马严明;王梅;高同春;;OS-诱抗剂诱导植物抗病性作用的探讨[A];食品安全的理论与实践——安徽食品安全博士科技论坛论文集[C];2005年
2 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
3 李孝良;李健姣;吕宝磊;陈效民;王晓洋;詹国飞;;肥料与石膏配施对滨海盐土玉米生理活性的影响[A];土肥水资源高效利用与农业面源污染防控技术研讨会论文集[C];2011年
4 张林锋;曾鑫年;赵金鹏;杨柳;;亚洲柑橘木虱成虫密度与扩散的关系研究[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
5 杨余兵;黄明度;;柑桔木虱种群生命系统模型的研究[A];柑桔害虫综合治理论文集[C];1989年
6 杨余兵;;光、温湿度对柑桔木虱发育、繁殖与存活的影响[A];柑桔害虫综合治理论文集[C];1989年
7 黄自然;张卫民;黄亚东;;蚕抗菌肽研究开发三十年的回顾与展望[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
8 王海光;李自超;;植物干旱胁迫应答基因及其产物研究进展[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
9 郭文武;邓秀新;;体细胞杂交与柑橘遗传改良[A];中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文集[C];2000年
10 刘继红;邓秀新;;原生质体融合与柑橘遗传改良[A];植物组织培养与脱毒快繁技术——全国植物组培、脱毒快繁及工厂化生产技术学术研讨会论文集[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘雨晴;黄荆杀虫活性成分的分离与鉴定及其对棉蚜和菜青虫的生物效应[D];山东农业大学;2010年
2 张新瑞;红蓼提取物的杀虫作用和作用机理研究[D];甘肃农业大学;2009年
3 李瑞利;两种典型盐生植物耐盐机理及应用耐盐植物改良盐渍土研究[D];南开大学;2010年
4 杨艳丽;外源茉莉酸影响马铃薯对晚疫病抗性的初步研究[D];湖南农业大学;2010年
5 陆燕元;干旱胁迫及复水过程中转Cu/Zn SOD和APX基因甘薯生理生化响应机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
6 曾兴权;小麦抗条锈病种质的鉴定及其抗性相关基因的差异表达和克隆[D];西北农林科技大学;2010年
7 魏晓雪;外源NO对UV-B胁迫下红松幼苗生理特性的影响[D];东北林业大学;2011年
8 付伟;罗汉果二倍体及四倍体遗传变异研究[D];北京协和医学院;2011年
9 艾育芳;早晚熟油菜成花机理的初步研究[D];福建农林大学;2011年
10 袁飞荣;转rol ABC基因枳橙砧木的评价[D];湖南农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 乔芬;柑橘衰退病和碎叶病新型脱毒方法的研究[D];华中农业大学;2010年
2 刘凡;柑橘黄龙病菌滚环扩增及病毒类似病原多重RT-PCR检测技术研究[D];华中农业大学;2010年
3 袁曦;大头金蝇不同地理种群差异比较研究[D];华中农业大学;2010年
4 田伶俐;马铃薯体细胞杂种胞质遗传组成及其与青枯病抗性的关系[D];华中农业大学;2010年
5 卢小三;两个杨树无性系再生体系的建立及抗虫基因Cry1C+9C转化的初步研究[D];华中农业大学;2010年
6 朱冬梅;盐碱胁迫下星星草(Puccinellia tenuiflora)根部转录应答的初步分析[D];哈尔滨师范大学;2010年
7 李一星;番茄抗病毒相关基因的克隆与比较分析[D];浙江理工大学;2010年
8 窦宏伟;SO_2对桑树部分生理生化特性和家蚕谷胱甘肽代谢相关酶的影响[D];山东农业大学;2010年
9 汪俊君;小麦大粒突变体的遗传分析和相关基因片段的克隆[D];山东农业大学;2009年
10 贾腾蛟;水椰八角铁甲(Octodonta nipae)的过冷却点研究及适生性分析[D];福建农林大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘伟;邵菁;庞宏;张锡然;曹祥荣;;大规模筛选表达序列标签(ESTs)方法的改进[J];安徽农业科学;2007年24期
2 郭延平;曾光辉;胡美君;;果树光合作用的光抑制与防御机理研究进展[J];福建果树;2006年03期
3 余萍,刘艳如,郑怡;二种蕨类植物凝集素的细胞凝集和抑菌活性比较[J];福建师范大学学报(自然科学版);2004年02期
4 甘海峰;秦玉明;梅正敏;邱柱石;陈腾土;邓光宙;莫健生;;防控柑桔黄龙病的实践与经验[J];中国南方果树;2007年06期
5 刘凌霄,沈法富,卢合全,韩庆点,刘云国;蔗糖代谢中蔗糖磷酸合成酶(SPS)的研究进展[J];分子植物育种;2005年02期
6 黄鑫;戴思兰;孟丽;郑国生;;抑制性差减杂交(SSH)技术在分离植物差异表达基因中的应用[J];分子植物育种;2006年05期
7 王爱民;邓晓玲;;柑桔黄龙病诊断技术研究进展[J];广东农业科学;2008年06期
8 肖远辉;丁芳;曾继吾;易干军;张秋明;;柑橘黄龙病和衰退病的同步PCR和RT-PCR检测[J];果树学报;2006年04期
9 王辉;丁芳;钟云;姜波;易干军;王国平;;柑橘黄龙病菌侵染九里香不同方法研究[J];果树学报;2011年02期
10 禤维言;郑学勤;;无核荔枝果实形成差异表达基因cDNA的克隆[J];广西植物;2006年06期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 王彩霞;柑橘衰退病毒的血清学特性分析及其诱导寄主差异表达基因的筛选[D];华中农业大学;2007年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 吴越;周常勇;;柑橘黄龙病防控研究进展[J];中国果树;2013年04期
2 程春振;曾继吾;钟云;闫化学;姜波;钟广炎;;柑橘黄龙病研究进展[J];园艺学报;2013年09期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈全助;福建桉树焦枯病菌鉴定及其诱导下桉树转录组和蛋白组学研究[D];福建农林大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张志忠;吴菁华;吕柳新;林义章;;植物几丁质酶及其应用研究进展[J];福建农业大学学报;2005年04期
2 柯冲;柑桔黄龙病的病原研究与防治建议[J];福建农业科技;1979年01期
3 柯冲 ,陈辉 ,林先沾;木虱传播柑桔黄龙病类立克次体研究[J];福建农业科技;1980年04期
4 许长藩,夏雨华,李开本,柯冲;柑桔木虱传播黄龙病的规律及病原在虫体内分布的研究[J];福建省农科院学报;1988年02期
5 柯冲;对福建省柑桔健康栽培示范园的初步评估[J];福建农业学报;2001年01期
6 田亚南,柯穗,柯冲;柑桔黄龙病诊断法的研究进展[J];福建农业学报;1998年01期
7 林孔湘;;柑桔黄龙病问题的讨论[J];柑桔科技通讯;1977年Z2期
8 柯冲;柑桔黄龙病的病原研究与防治建议[J];中国柑桔;1979年03期
9 赵学源,邱柱石,苏维芳,蒋元晖;柑桔黄龙病对青霉素和四环素的反应[J];中国柑桔;1981年04期
10 戴月明,陈乃荣,陈循渊,廖长青,蔡明段,沈菊英,陈作义;柑桔黄龙病传病昆虫木虱的研究[J];中国柑桔;1982年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 范怀忠,林孔勋,罗志达,苏兆华,周启明,柯冲,陈之潭;也谈广西柳州的柑桔生产问题——与侯学煜先生商榷[J];农业现代化研究;1986年05期
2 邱柱石;试论桂北地区柑桔黄龙病的防治策略[J];广西植保;1993年03期
3 文庆儒;浅谈如何在黄龙病区发展柑桔生产[J];广西园艺;1994年03期
4 韦树德,刘宗庆;柑桔控病健身高产栽培技术[J];广西农学报;1999年02期
5 邱柱石;再谈谈柑橘黄龙病树的田间诊断——兼答读者问[J];广西园艺;2003年03期
6 叶志勇,余继华,林长怀;黄岩柑橘黄龙病的发生现状与防控对策[J];浙江柑桔;2004年04期
7 李璇忠;;受黄龙病折磨20年 潮汕蕉柑郁郁寡欢[J];农药市场信息;2011年01期
8 许长藩;闽北柑桔木虱及黄龙病发生情况调查[J];福建农业科技;1985年06期
9 庞家法;桂林市柑桔黄龙病的现状及防治对策[J];广西园艺;1996年01期
10 周启明;柑桔黄龙病的综合防治[J];广西园艺;1996年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郭恒;蒲雪莲;蔡玲玲;吴显明;邓晓玲;;用来自16S-23S rRNA间区序列设计引物检测柑橘黄龙病亚洲种[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
2 张培;刘蕤;蔡玲玲;蒲雪莲;郭恒;邓晓玲;;实时荧光PCR定量分析柑橘红鼻子果与黄龙病相关性的研究[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
3 李菁;邓晓玲;周佳暖;单振菊;;黄龙病PCR检测试剂盒的应用[A];2005年中南、西南植物病理学会和中国菌物学会联合学术年会论文集[C];2005年
4 邓晓玲;冯震;周根;徐建华;;芸香科植物黄龙病菌的分子鉴定及其16S rDNA基因片段的克隆与分析[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
5 张利平;王中康;夏玉先;殷幼平;;柑橘黄龙病菌PCR检测快速制样技术比较研究[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
6 丁芳;易干军;王国平;;应用PCR及Nested-PCR技术检测柑橘黄龙病病原研究[A];第三届湖北湖南植保农药学术研讨会论文集[C];2004年
7 邓晓玲;单振菊;冯震;周根;徐建华;;佛手黄龙病病原DNA片段的克隆与序列分析[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
8 周根;冯震;徐建华;邓晓玲;;利用Nested-PCR技术对橙果内柑橘黄龙病病原分布的研究[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
9 徐建华;蔡玲玲;郭恒;蒲雪莲;邓晓玲;;应用实时荧光PCR定量检测柑橘黄龙病菌的研究[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
10 蒲雪莲;郭恒;蔡玲玲;邓晓玲;;柑橘黄龙病和phytoplasma的相关性调查[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 韩晓玲 通讯员 范敬群;对付柑橘黄龙病良策[N];湖北日报;2008年
2 见习记者 李佳记者 胡孙华 通讯员 范敬群;柑橘“黄龙病”中国人命名[N];长江日报;2008年
3 记者  盛力;用三年时间打好柑橘黄龙病防控战[N];丽水日报;2006年
4 通讯员 刘先春 周健 黄宗仁;恭城打响歼灭柑橘黄龙病战役[N];桂林日报;2006年
5 广西兴安县科技局 康忠武;种树不容易,砍树也难![N];科技日报;2007年
6 永州市林科所 柏劲松;预防柑橘黄龙病[N];湖南科技报;2006年
7 本报记者 傅仁斌 通讯员 廖翠娥;柑橘黄龙病监测控防技术有突破[N];湖南科技报;2006年
8 德遴 赏萍 友盛;“伤心柚”变成“增收果”[N];三明日报;2009年
9 通讯员 江传德 黎振勇;荔浦柑桔黄龙病综合治理上下联动齐抓共管[N];桂林日报;2007年
10 本报记者 吴美章;六道功,让柑橘远离病害[N];福建日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 樊晶;柑橘宿主对黄龙病病原菌侵染的应答机制[D];重庆大学;2010年
2 王辉;柑橘黄龙病昆虫介体—柑橘木虱的研究及九里香感染黄龙病菌后的差减文库构建[D];华中农业大学;2011年
3 钟云;Candidatus liberibacter asiaticus诱导的柑橘转录组学及蛋白组学研究[D];湖南农业大学;2012年
4 廖振坤;湖南柑橘种质资源评价及主要病害分子鉴定[D];湖南农业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘婷婷;耐黄龙病寄主植物RGA的分离鉴定及侵染相关序列的表达分析[D];重庆大学;2011年
2 胡修峰;黄龙病菌侵染过程中柑橘防御相关基因的克隆及表达分析[D];重庆大学;2011年
3 刘柏玲;柑橘黄龙病的茎尖微芽嫁接脱毒及其PCR检测的研究[D];华中农业大学;2004年
4 周海霞;不同脱毒方法对红江橙种性变异及脱黄龙病毒效果的影响[D];广东海洋大学;2010年
5 姚锦爱;柑橘黄龙病病原多态性及抗血清的制备与应用[D];福建农林大学;2009年
6 娄兵海;中国八省柑桔黄龙病病原菌种类和种内分化的初步研究[D];西南大学;2008年
7 王爱华;HLB感染柑桔韧皮部内生细菌区系的研究[D];重庆大学;2010年
8 胡浩;应用荧光定量PCR技术研究亚洲韧皮部杆菌在寄主体内的动态变化及分布[D];重庆大学;2007年
9 李颜方;罹病柑橘植株兼性厌氧型伴生菌鉴定及优势菌种分析[D];重庆大学;2011年
10 徐象华;无籽瓯柑的选育、脱毒及配套栽培技术[D];华中农业大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026