收藏本站
《华中农业大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

犬瘟热病毒的分离、鉴定及单克隆抗体的研制

刘波波  
【摘要】:犬瘟热(Canine distemper, CD)是犬或者其他易感动物感染犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)所引发的一种高度传染性和致病性疾病。目前,在我国由CDV引起的犬瘟热广泛流行,是危害养犬业最为严重的传染病之一。本研究根据CDV的细胞培养特性,采用异种病毒特异性血清阻断法,选用Vero细胞从犬二联弱毒活苗样品中分离获得一株犬瘟热(CDV)弱毒株。病毒在Vero细胞上传代培养后,能够引起细胞出现园缩、聚集、拉网、坏死等特征性的病变过程。病变细胞经RT-PCR鉴定CDV,结果显示阳性。病毒理化试验表明,56℃30min CDV可被灭活,pH7.0~8.0对病毒活性没有影响,pH4.0以下和pH10.0以上病毒活力大大降低。CDV有囊膜,氯仿处理可让其失去活性,病毒核酸型试验表明,CDV为RNA病毒,凝集试验显示,CDV不与鸡、猪、绵羊及兔红细胞发生凝集反应。经测定,该CDV弱毒株的毒价为10-6.25/mL TCID50。 以CDV Onderstepoort毒株的细胞培养液经PEG沉淀法纯化浓缩后作为免疫原,免疫6-8周龄的BALB/c雌性小鼠。经过3次皮下注射免疫后,再进行尾静脉加强免疫,3d后处死小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0做融合。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选能够分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株。经过反复的亚克隆筛选,最后得到5杂交瘤细胞株,均能够稳定地分泌抗CDV的单克隆抗体。分别命名为:1G5、2D7、3B6、4C7和4G5。5株单抗对CDV均有较高的特异性,和犬腺病毒Ⅱ型、犬细小病毒之间没有交叉反应。间接免疫荧光试验结果显示,5株单抗和感染了CDV的Vero细胞均能发生反应。5株杂交瘤细胞的腹水效价分别为1G5100x210、2D7100×29、3B6100×27、4C7100×28、4G5100×210,细胞培养上清效价为28-29。5株单克隆抗体重链均属于IgG 1,轻链均属于K链。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S858.292

免费申请
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡勇;吴胜昔;蔡家利;胡仁建;;抗犬瘟热病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[J];安徽农业科学;2008年12期
2 苏建青;岳妙姝;王化磊;薛琳;夏咸柱;;犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定[J];吉林农业大学学报;2009年01期
3 郝淑美;岳妙姝;苏建青;杨松涛;夏咸柱;李牧;;犬瘟热病毒荧光抗体的制备及其鉴定[J];中国兽医学报;2008年09期
4 苏建青;褚秀玲;杨松涛;夏咸柱;岳妙姝;;抗犬瘟热病毒荧光标记单抗的制备和初步鉴定[J];安徽农业科学;2009年08期
5 焦金波;黄娟;秦晓冰;陈丽;温海燕;单虎;;犬瘟热病毒F蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J];安徽农业科学;2008年25期
6 刘雯;马丽敏;李琳;何晔;李叶;任秀梅;靳朝;夏志平;;犬瘟热病毒间接免疫酶组化检测方法的建立[J];中国预防兽医学报;2011年02期
7 徐宏观;林瑞平;;犬瘟热的诊断、治疗的技术及病例分析[J];中国畜禽种业;2009年04期
8 李宗才;;犬瘟热的诊断与治疗[J];中国畜牧兽医;2010年03期
9 郭琦;吴燕;张瑛;林承业;;如何提高犬瘟热的治愈率[J];新疆畜牧业;2005年06期
10 赵恒亮;;犬瘟热发病新特征及分期适治[J];上海畜牧兽医通讯;2006年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 焦金波;黄娟;秦晓冰;陈丽;温海燕;单虎;;犬瘟热病毒F蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年
2 付少才;陈万荣;刘树玲;;抗犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及初步应用[A];第十一次全国养犬学术研讨会论文集[C];2005年
3 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年
4 李安民;;单克隆抗体标载的~(131)I治疗恶性脑胶质瘤Ⅱ期临床试验的三种给药途径的研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年
5 于翠;施曼铃;王桂珍;吴建祥;周雪平;;几种重要植物病毒单克隆抗体的制备和快速检测方法的建立[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年
6 刘振勇;邓国华;李呈军;张立春;田国彬;何后军;于康震;陈化兰;;抗禽流感H9N2亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备与分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
7 李振宇;赵益明;董宁征;沈飞;阮长耿;;抗FⅧ-C2区单克隆抗体的制备及鉴定[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
8 张改连;黄烽;;抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体rituximab治疗类风湿关节炎的临床研究[A];第十二届全国风湿病学学术会议论文集[C];2007年
9 郝波;张国新;林艳;杨杨;王宏娣;;抗HCCR单克隆抗体的制备及其在肝癌检测中的初步应用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
10 陶薇;杨连华;何卓晶;洪艳;陈勇;;抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 贾超时李德成;单克隆抗体产业研发项目将落户大庆[N];大庆日报;2008年
2 小许;市领导会见美国生物医药巨头[N];无锡日报;2010年
3 姜海;英科学家发现单克隆抗体[N];科技日报;2007年
4 本报特约撰稿人 李朝;单抗:生物医药发展的主旋律[N];医药经济报;2006年
5 记者 项铮;赛诺菲巴斯德研制抗狂犬病单克隆抗体[N];科技日报;2008年
6 记者 杨俊坚;单抗药物:站在同一起跑线[N];医药经济报;2011年
7 张蕾;治疗用单克隆抗体[N];光明日报;2002年
8 李晓;“苏州系列”单克隆抗体走向世界[N];苏州日报;2008年
9 张骁束;梅英;单克隆抗体的研究进展[N];中国医药报;2003年
10 邹平;单克隆抗体研究取得突破[N];医药经济报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 苏建青;犬瘟热免疫层析试纸及荧光定量PCR诊断方法的建立与评价[D];吉林大学;2008年
2 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年
3 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年
4 高勇;新型单克隆抗体荧光探针染料的合成及免疫荧光组织化学应用[D];西北大学;2006年
5 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年
6 秦迎松;人促血液血管细胞生成素(Haemangiopoietin, HAPO)单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年
7 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年
8 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
9 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年
10 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 蔺俐仲;犬瘟热病毒单克隆抗体的制备[D];吉林大学;2007年
2 岳妙姝;犬瘟热病毒荧光抗体的建立及初步应用[D];长春理工大学;2008年
3 时红星;犬瘟热病毒的分离及单克隆抗体的研制[D];扬州大学;2008年
4 孙玮;犬瘟热病毒单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用[D];吉林大学;2011年
5 曹亮;抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备及应用研究[D];新疆农业大学;2005年
6 薛琳;狂犬病毒荧光抗体的制备及初步应用[D];吉林大学;2007年
7 黄子逸;LIGHT基因转染细胞株和单克隆抗体的研制及其对T细胞的共刺激效应[D];苏州大学;2010年
8 李铁民;抗P-选择素单克隆抗体对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的作用实验研究[D];中国医科大学;2003年
9 李晓龙;肝癌相关抗原SMP30 mRNA在癌细胞中的表达及其单克隆抗体的制备[D];广西医科大学;2010年
10 郑杰;分泌抗猪流感病毒(河南株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备、鉴定和初步应用[D];河南农业大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026