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《华中农业大学》 2015年
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鸭疫里氏杆菌06537/06542基因缺失株的构建及其生物学特性研究

卢媞  
【摘要】:鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染是当前危害全球养鸭业的重要传染病之一。目前发现RA至少有21种血清型。但即使是在同一种血清型中,不同来源菌株之间的毒力也存在较大差异。一旦鸭疫里氏杆菌感染鸭群,它可以造成该病的广泛流行且彻底根除十分困难,而且存在反复感染发作的可能性,所以我们急需要一种安全有效的疫苗以预防该病。而目前有关鸭疫里氏杆菌感染的分子致病机理及免疫机制的研究报道较少。运用分子生物学的方法深入研究鸭疫里氏杆菌感染的分子致病机理及免疫机制来预防该病的发生是当前研究的热点。本研究以鸭疫里氏杆菌血清1型云梦株(RA-YM)为亲本株,选取了其中一对双组份调控系统06537/06542为研究对象,通过构建重组自杀性质粒,采用接合转移方法构建了RA-YM株的06537/06542基因缺失株,对该基因缺失株的生物学特性进行了研究,并比较了其与RA-YM亲本株对雏鸭的致病性。取得的主要研究结果如下:1构建了RA-YM 06537/06542基因缺失株根据RA-YM株06537/06542基因的序列,通过重组自杀性质粒p RE112-LSR,利用接合转移同源重组成功构建了RA-YM 06537/06542基因缺失株。2体外比较研究RA-YM 06537/06542基因缺失株的生物学特性生化鉴定结果显示,RA-YM 06537/06542基因缺失株的生化特性与亲本株基本一致,但缺失株不产生H2S,不液化明胶;通过生长曲线的测定,发现RA-YM06537/06542基因缺失株的生长速度比亲本株慢;RA-YM 06537/06542基因缺失株耐酸耐碱能力较亲本株显著下降;药敏试验结果表明,缺失株对阿莫西林、氯霉素、氨苄青霉素和磺胺异恶唑耐药性较亲本株显著升高,但对四环素耐药性有所下降;RA-YM 06537/06542基因缺失株对胆盐和高渗的耐受力较亲本株均显著下降;SDS-PAGE结果显示RA-YM 06537/06542基因缺失株全菌蛋白的表达谱与亲本株相比呈现出明显的差异;透射电镜结果显示,RA-YM 06537/06542基因缺失株形态结构未发生改变。3 RA-YM 06537/06542基因缺失株对雏鸭致病性的影响通过对12日龄雏鸭接毒,结果发现RA-YM 06537/06542基因缺失株的LD50大于1.0×1010CFU,而亲本株的LD50为4.0×107 CFU,RA-YM 06537/06542基因缺失株的毒力显著下降;通过测定缺失株和亲本株感染雏鸭心、肝、脾、脑等组织的载菌量和血液载菌量,发现缺失株在感染雏鸭的肝脏、大脑和血液的载菌量较亲本株均显著下降。通过对缺失株和亲本株感染雏鸭的心、肝、脾和脑等的病理组织学观察,发现缺失株对心、脑、脾的侵害能力相对于亲本株显著下降,但对肝细胞仍呈现一定的侵害能力。上述结果表明RA-YM 06537/06542基因缺失株对雏鸭的致病性明显降低。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S852.61

【参考文献】
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