收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

表面展示STa类毒素的蜡样芽胞杆菌重组菌株的构建及其对小鼠的免疫原性的测定

王云霄  
【摘要】:产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)可引起仔猪腹泻,严重时甚至导致死亡,给养猪业带来严重的经济损失。热稳定性肠毒素STa(heat-stable enterotoxin)是ETEC的关键毒力因子,将STa去毒后制成亚单位疫苗,该疫苗具有良好效果。但亚单位疫苗需要通过注射免疫,并且需要低温保藏和运输,这不但使疫苗成本高也给使用带来不便。因此,研制出能口服免疫并且常温保藏和运输的疫苗是解决该问题的良好方略。蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)MIL158菌株具有益生菌的特性,可用作微生态制剂,动物口服安全,其芽胞体耐热,可常温保藏。S-层蛋白是可将外源蛋白展示到微生物细胞表面的良好载体。本研究利用S-层蛋白的表面展示功能和蜡样芽胞杆菌芽胞的热稳定性能,构建了表达ETEC STa类毒素的蜡样芽胞杆菌重组菌株,测定了重组菌株对小鼠的免疫原性,从而为研制安全且能常温运输和保藏的STa疫苗初步打下了基础。1.插入法重组菌株的构建及其对小鼠免疫原性的测定Overlap PCR合成STa类毒素基因msta(mutant sta),插入载体p BMB982-304中S-层蛋白基因ctc锚定序列slh(S-layer homology)后面的Xba I位点,在ctc前面插入细胞壁锚定所必需的csa AB操纵元,获得重组质粒p CSA-S(csa-ctc-msta)。电转化重组质粒入受体菌株MIL158,获得重组菌株MIL158/p CSA-S。Western blotting检测重组菌株表达了含STa的融合蛋白。用重组菌株免疫小鼠,用ELISA测定小鼠血清抗体OD450值,结果,重组菌株的检测值显著高于(P0.05)三个对照组(PBS组、MIL158无质粒组和MIL158/p BMB982-304空质粒组)。结果表明,重组菌株MIL158/p CSA-S免疫小鼠产生了STa抗体。2.替换法重组菌株的构建及其对小鼠免疫原性的测定为了考察不同的融合基因构建方式对小鼠免疫原性的影响,本研究又用替换法构建了重组菌株。Overlap PCR扩增mgfp-linker-msta、ctc-his-msta和ctc-msta-his基因,替换载体p BMB982-304中S-层蛋白ctc基因中部Xba I和Hinc II之间的序列,在ctc前插入细胞壁锚定所必需的操纵元csa AB,获得重组质粒p CSA-GS(csa-ctc-mgfp-linker-msta)、p CSA-HS(csa-ctc-his-msta)和p CSA-SH(csa-ctc-msta-his)。电转化重组质粒入MIL158,获得三个重组菌株MIL158/p CSA-GS、MIL158/p CSA-HS和MIL158/p CSA-SH。用重组菌株免疫小鼠,用ELISA测定小鼠血清抗体OD450值,结果,三个重组菌株的检测值均显著高于对照组(P0.05)。结果表明,三个重组菌株免疫小鼠均产生了STa抗体。与插入法构建方式相比,替换法重组菌株免疫后的OD450值显著高于插入法(P0.05)。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 唐珂心,牛钟相,孙存孝,庞昕;蜡样芽胞杆菌生长特性的研究[J];山东畜牧兽医;2000年01期
2 张琳琳;王琦;李荣禧;王勇军;梅汝鸿;;两株蜡样芽胞杆菌α-淀粉酶差异性分析及基因的克隆和表达[J];农业生物技术学报;2008年04期
3 陆克芳,万嘉群,李卫军;羊毛绒检疫过程中蜡样芽胞杆菌引起Ascoli氏反应阳性的报告[J];浙江畜牧兽医;1989年03期
4 王振国;刘和平;刘金华;蔡阳;肖成蕊;罗雁菲;徐宝梁;;应用PCR方法检测蜡样芽胞杆菌的研究[J];吉林农业大学学报;2006年06期
5 莫小丹;王勇军;王琦;梅汝鸿;;蜡样芽胞杆菌905铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆及原核表达[J];农业生物技术学报;2008年03期
6 阎新华,阎喜军,赵传芳,王长凤,宋心杰;蜡样芽胞杆菌BC983的鉴定及生态效应的研究[J];中国预防兽医学报;1999年03期
7 曹国文,姜永康,陈春林,周述兰,付利芝,翟少钦,戴荣国;植物源蜡样芽胞杆菌在动物体内的生物效应[J];中国兽医科技;2003年02期
8 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 曾小婵;;蜡样芽胞杆菌引起食物中毒的鉴定[A];湖北省微生物学会第十届理事会分析微生物专业委员会第四次学术会议论文汇编[C];2006年
2 李莹;裴晓燕;杨大进;李宁;;中国八省婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染状况研究[A];达能营养中心青年科学工作者论坛优秀论文集2014年第3期[C];2014年
3 傅武;姚敬业;马德桐;贾法芝;;一起剩饭蜡样芽胞杆菌食物中毒报告(摘要)[A];安徽省第二届第二次食品卫生与营养学术会议论文摘要汇编[C];1988年
4 张慎威;;32例蜡样芽胞杆菌食物中毒调查报告(摘要)[A];安徽省第二届第二次食品卫生与营养学术会议论文摘要汇编[C];1988年
5 刘国胜;卞绪美;徐祝立;;一起蜡样芽胞杆菌食物中毒的调查分析[A];山东预防医学会首届学术年会资料汇编[C];2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 王云霄;表面展示STa类毒素的蜡样芽胞杆菌重组菌株的构建及其对小鼠的免疫原性的测定[D];华中农业大学;2015年
2 王东明;蜡样芽胞杆菌6371的多效性及发酵条件的研究[D];南京师范大学;2004年
3 卢林静;外源抗原在蜡样芽胞杆菌细胞表面展示的可行性研究[D];华中农业大学;2009年
4 张政;食品中三种致病菌多重PCR检测体系的建立及初步应用[D];河北农业大学;2012年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978