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《华中农业大学》 2015年
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猪肝脏特异性TTR基因启动子驱动扣囊复膜孢酵母菌BGL1基因在转基因鼠中的表达验证

李玉姣  
【摘要】:本论文在活体水平验证猪肝脏组织特异性TTR基因启动子的活性及组织特异性。本研究构建由猪肝脏特异性TTR基因启动子驱动BGL1基因表达的转基因小鼠,通过RT-PCR、Western Blot等技术研究TTR基因启动子能够驱动外源基因BGL1表达及β-葡萄糖苷酶的活性。主要研究成果如下:1.通过原核显微注射技术共得到4只转基因首建鼠,其中3只雄性鼠(A、B、C),1只雌性鼠(D)。对获得的4只首建鼠分别建系进行研究,最终B首建鼠建系成功,共获得5代能稳定遗传外源基因的转基因仔鼠,F5代阳性率达到90%以上;从F0-F3代外源基因拷贝数在逐渐增加,F3代拷贝数达112.56。2.RT-PCR检测TTR基因启动子能够驱动BGL1基因表达,并且经Western Blot证实能够在转基因阳性鼠的肝脏组织中表达相应的蛋白质,而其余组织(心脏、脾脏、肺、肾脏、肠、肌肉、脂肪)均没有表达。3.利用β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase,β-GC)活性测定试剂盒分别测定转基因鼠与野生型鼠肝脏组织中的β-葡萄糖苷酶活性,结果表明:转基因小鼠肝脏中的β-葡萄糖苷酶活力显著高于野生型小鼠。4.分别测定转基因鼠与野生型鼠肝脏重量指数(liver weight index,LWI),对肝脏组织切片进行HE染色分析和EVG染色分析、生长曲线分析,结果表明:外源基因的表达并未引起转基因小鼠肝脏组织的病变,没有对转基因小鼠个体造成不良影响。5.成功制备抗扣囊复膜孢酵母菌β-葡萄糖苷酶的多克隆抗体,经ELISA和Western Blot检测表明该抗体的效价较高并且特异性较好。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:Q78

【参考文献】
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