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《华中农业大学》 2015年
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拟南芥和油菜花药特异表达启动子的克隆与功能分析

张鑫平  
【摘要】:本文通过分析已发表的相关拟南芥转录组文章,挑选了8个拟南芥花药特异表达基因,结合https://www.arabidopsis.org/上公布的基因组序列设计引物克隆其启动子区,并构建启动子驱动报告基因表达载体,转化拟南芥。根据拟南芥启动子GUS染色结果,选择PSG6pro和PSG8pro做为花粉特异表达启动子,通过同源序列比对获得了其对应的油菜启动子,构建了3个油菜启动子驱动报告基因的表达载体,转化拟南芥,并对克隆的油菜启动子进行5,端缺失分析,取得的主要结果如下:1.挑选了PSG1、PSG2、PSG3、PSG4、PSG5、PSG6、PSG7、PSG8基因做为花药特异表达的候选基因,RT-PCR验证各个基因在拟南芥各器官的表达情况,发现PSG7在各个组织中均有表达,其余7个基因均只在花蕾,开放的花或角果中有表达。2.克隆挑选的8个基因的启动子区,分别其构建启动子驱动报告基因的表达载体,转化拟南芥,对拟南芥阳性苗的根、茎、叶、角果、花序进行GUS染色,验证启动子的表达情况。结果表明8个启动子均只在花中特异表达,其中PSG6pro,PSG8pro表达时期较晚,特异性较高。3.将PSG6,PSG8基因的CDS序列与油菜基因组数据库进行比对,分别克隆PSG6在油菜中的一个同源基因和PSG8在油菜中的两个同源基因的启动子区,构建启动子表达载体,转化拟南芥,进行GUS染色,染色结果表明这三个启动子均为花药特异表达启动子。4.对3个油菜基因启动子进行5,端缺失分析,共构建了7个缺失载体,转化拟南芥,对阳性苗各组织进行GUS染色,结果表明其中2个启动子500bp的长度就能维持花药特异表达的情况,另一个1000bp能维持花药特异表达。5.统计8个拟南芥基因启动子和3个油菜基因启动子序列的花粉特异表达元件,结果表明11个基因的启动子区均含有LAT52元件和G10元件。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:Q943.2

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