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《华中农业大学》 2013年
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α-葡萄糖苷酶对茶多糖抗氧化活性增强及结构变化影响研究

程一方  
【摘要】:运用α-葡萄糖苷酶的水解作用,降低糖链的长度和卷曲度,有助于增强多糖活性。在1L浓度为2g/L粗多糖溶液中,分别设置0.05g、0.08g、01g、0.5g 4个糖苷酶浓度水平和45℃、55℃2个温度水平,运用8个提取条件进行酶解多糖的提取,优化酶解实验,选出提高酶活性的酶解条件参数。对提取的8个水平的纯化ETPS进行基本的化学指标测定,包括质量,样品对清除02-·自由基清除率和中性糖含量,运用隶属函数对数据进行分析整理,得到最佳提取条件为a-葡萄糖苷酶用量为0.1g,温度为45℃,在此条件下,提取的纯化ETPS有最高的活性,且多糖得率较高。纯化的ETPS和TPS分别经过DEAE Cellulose DE-52阴离子纤维素柱层析分离纯化,分离出ETPS1、ETPS2、ETPS3、ETPS4,TPS1、TPS2、TPS3、TPS4,将相对应的组分称重并进行活性比较,发现相互间活性有显著差异。活性较高的成分主要集中在ETPS3和TPS3中,对这两个组分进行重点分析,用分子筛Sephadex G150再次进行分离纯化,各分离出ETPS3-1、ETPS3-2和TPS3-1、TPS3-2。实验表明,ETPS的各组分用黄嘌呤氧化酶法测定清除02-·自由基能力,ETPS1比TPS1、ETPS3比TPS3对02-·自由基的清除率均有显著提升。酶解后茶多糖经DE-52纤维素与Sephadex G-150柱层析分离纯化得到组分TPS3-1和ETPS3-1,通过红外光谱、气相色谱、高效液相色谱和紫外光谱等方法对它们的的一级结构分析比较发现:ETPS3-1和TPS3-1都具有糖缀合物的特性。ETPS3-1的数均分子量为17375,重均分子质量为25262,分散系数(Mw/Mn)为1.45,单糖组成及摩尔比:岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖=0.06:0.104:0.005:0.015:0.008:0.155。TPS3-1数均分子量为32950,重均分子量为68207,分散系数(Mw/Mn)为2.07,单糖组成及摩尔比:鼠李糖:阿拉伯糖:木糖:半乳糖:葡萄糖=0.013:0.105:0.048:0.407:0.08。红外光谱分析二者均含有呋喃环和吡喃环,1384.13cm-1的尖锐峰显示糖链上有甲基的存在,1153cm-1的峰显示出分离纯化后的多糖更精细的结构,为强的吸收峰脂肪醚类的连接方式,为醚类的伸缩振动,初步判断该化合物为糖类化合物。GPC图谱显示,ETPS的分散系数降低和分子量降低,说明酶法修饰改性后ETPS3-1的相对分子质量分布较为均一。由此可见,茶多糖经酶法修饰改性后,分子链的降解由不均一性变为相对均一性,显示多糖分子链的压缩现象减轻,分散性更好,生物活性明显提高。将活性较高的ETPS3-1和TPS3-1进行Caco-2细胞毒理实验,观察茶多糖对细胞是否有毒害作用,验证高活性多糖对细胞增殖的影响与细胞活性之间的关系,为高活性茶多糖的应用提供理论依据。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:TS272

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