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《华中农业大学》 2018年
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蕲艾内生菌HCH285的卷线孢菌素活性及安全性研究

杨倩  
【摘要】:本课题从蕲春蕲艾(Artemisia argyi)根茎部分离纯化得到一株内生真菌命名为HCH285,之后进行菌种鉴定、bostrycin方法学构建,同时对该HCH285内生菌代谢产物和bostrycin进行安全性和活性分析,主要结果如下:1.HCH285菌种鉴定。利用微生物学与分子生物学两种方法对HCH285内生真菌进行鉴定。微生物形态学观察发现菌落呈圆形,生长初期为白色绒状毛且生长蓬松,后期逐渐成红色且菌落背面的红色产物也清晰可见。HCH285菌丝体为无色有隔菌丝。它产单个、球形或椭圆形、黑色光滑的分生孢子。此外通过分子生物学技术对其ITS序列测定确定该菌株属于黑孢霉属球黑孢霉菌(Nigrospora oryzae)。2.HCH285内生菌产bostrycin分离制备方法建立。利用多种化学试剂对HCH285内生菌代谢产物提取,确定乙酸乙酯为最佳萃取试剂,以半制备液相进行化合物分离,优化卷线孢菌素bostrycin的HPLC制备方法,使用高效分析型液相检测分离纯度,其分离制备方法为:柱温:30℃,进样体积:700μL,流速:3 mL/min,流动相比例:甲醇:0.3%甲酸=50:50(v/v),检测时间:30 min,紫外检测:302 nm;采用400MH_Z核磁共振波谱仪进行结构鉴定确定为卷线孢菌素bostrycin。3.Bostrycin活性分析。Bostrycin抗氧化活性分析证明,对三种自由基抗性顺序由大到小为O_2~–DPPH~–OH~–。它的抗菌活性表明有较好的抗菌作用,对革兰氏阳性菌比革兰氏阴性菌较好。CCK-8法体外抗癌活性研究表明对U251,B10F16癌细胞的半致死浓度分别为4.30μM和6.05μM。4.Bostrycin及HCH285菌代谢色素的安全性分析。引入秀丽隐杆线虫(C. elegans)为生测材料,以食品级红曲红色素为对照,研究对C.elegans各生理指标的影响。试验表明HCH285菌产色素对C.elegans的急性与慢性毒性、摄食与运动能力、生长发育状态、卵块孵化率,均没有明显抑制作用且与食品级红曲红色素作用效果一致,综合各指标显示500μg/mL内为安全剂量。以相同方法和指标,分析bostrycin对C.elegans作用,确定剂量在10μg/mL内无毒副作用。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S567.239;Q93

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1 杨倩;蕲艾内生菌HCH285的卷线孢菌素活性及安全性研究[D];华中农业大学;2018年
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