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《华中农业大学》 2018年
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姜黄素和大黄素对福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良的治疗作用及分子机制研究

MUJAHID IQBAL  
【摘要】:肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)是发生在快速生长禽类中的一种病因不明的疾病。TD的典型病变可见于胫骨近骺端,其主要特征是无血管化和无钙化。患TD的家禽表现为身体状况差,胫骨骨骼变形,行走困难。这种疾病在全世界不仅造成巨大的经济损失,而且也带来了严重的动物福利问题。中草药一直被用于治疗各种疾病,相比化学合成药物,它具有副作用较小、生产成本低廉等特性,适合长期的服用。1.姜黄素修复福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良中的生长板发育异常姜黄素是一种鲜黄色的香料,黄素是从姜科、天南星科中的一些植物的根茎中提取的一种姜黄多酚,被称为姜黄。姜黄素被认为可通过抑制破骨细胞的生成来抑制骨吸收。它是调控和参与骨重塑的重要分子靶点。然而,目前尚无采用姜黄素治疗肉鸡TD的研究报道。本试验旨在研究姜黄素对TD损伤、禽类的生长性能、胫骨参数及对血管内皮生长因子(VEGF)和Dlx5基因表达的影响;同时分析了不同处理条件下肉鸡肝脏中的相关酶类(ALT、ALP、AST)和抗氧化(SOD、MDA、GSH-Px)水平。本试验将400只AA肉鸡平均分为4组:对照组、TD组、TDR(自然恢复组)和CUR(姜黄素给药组)。对照组从第1天至第18天喂食标准日粮。TD组从第1天至第3天喂食标准饲料,并且从第4天至第18天喂食含福美双(50 mg/kg)的日粮。TDR组从第1天至第3天饲喂标准日粮,第4天至第7天饲喂含有福美双(50mg/kg)的日粮以诱发该疾病,然后从第8天至第18天继续饲喂标准日粮以观察肉鸡TD的恢复能力。CUR组从第1天至第3天饲喂标准日粮,第4天至第7天喂含福美双的日粮,从第8天至第18天喂食标准日粮的同时应用姜黄素(200 mg/kg)。分别于第7、10、14和18天从各组随机挑选肉鸡,屠宰,评估相关指标。通过RT-qPCR、免疫组织化学和蛋白质印迹试验发现:患TD的肉鸡GP中VEGF的表达量显著上调,而Dlx5的表大量显著下调(P0.05)。给予姜黄素后,VEGF的表达量显著下调,而Dlx5的表大量显著上调。胫骨的HE病理切片显示患TD的肉鸡软骨细胞分布紊乱、细胞核溶解;姜黄素处理后,细胞恢复了正常的形态结构。生化结果显示:患TD的肉鸡生化指标ALT、AST和MDA升高,ALP、SOD和GSH-Px降低。姜黄素治疗组后,相关生化、抗氧化指标和胫骨参数接近于对照组。同时,TDR组中的肉鸡身体状况优于TD组,除极少数参数外,其他结果差异不大。2.大黄素对福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良中ALP、PPARγ和I型胶原基因表达的影响大黄素是一种蒽醌衍生物,广泛存在于各种天然药材中。数千年来它被用于治疗包括骨疾病在内的各种疾病。本试验将系统的研究大黄素对TD的治疗效果(本试验设计、检测参数和技术见试验1)。通过RT-qPCR、免疫组织化学和蛋白质印迹试验发现:TD组肉鸡中的ALP表达显著下调(P0.05),血清中ALP水平也下降。给予大黄素可显著上调GP中ALP水平,增加血清中ALP的含量。TD组PPARγ基因的表达上调,PPARγ的活化增加了骨吸收,然而大黄素治疗后发现其表达被显著下调。同时,研究发现对照组和TD组中I型胶原蛋白表达水平非常接近,大黄素治疗后可以上调I型胶原蛋白的表达量。大黄素治疗组中肉鸡的死亡率、GP的宽度、重量、长度等胫骨参数均接近于对照组。大黄素能够通过提高饲料转化率(FCR)和恢复GP形态功能而达到治疗肉鸡TD的效果,而且不会引起因摄入治疗药物而带来的肉鸡药物残留威胁。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S858.31

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