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《华中农业大学》 2001年
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灵芝中肽类化合物及生物活性研究

孙颉  
【摘要】: 目前国内外关于灵芝多糖及其药理作用的研究已十分深入,然而对灵芝中活性肽的研究却鲜有涉及。本文采用被测物对羟基自由基的抑制率为跟踪检测指标,通过超滤、配位色谱、凝胶渗透色谱、RP-HPLC 和毛细管电泳等现代分离、分析技术,着重对发酵灵芝粉中的抗氧化活性肽进行了分离、分析,并对其生物活性尤其是抗氧化活性进行了较系统、深入的研究。结果如下: 1.发酵灵芝粉经脱脂预处理可显著提高浸提液抑制羟基自由基的活性及蛋白质和肽类的浸提率,总糖含量也略有提高。正交试验结果表明:在 pH5.5、温度4℃、液料比 15∶3(V/W)条件下得到的水浸提物 GLW 对羟基自由基的抑制率最高,其肽类物质的含量也最高。GLW 经分子量10,000Da 的超滤膜过滤得到的膜透过物 GLL 约占浸提物 GLW 的70.67%。GLL 通过配位色谱或两步葡聚糖凝胶柱层析方法分离得到两种灵芝肽 GLP-Ⅰ 和 GLP-Ⅱ。GLP-Ⅰ的含量为91.53%,远高于GLP-Ⅱ(48.55%)。肽GLP-Ⅰ进一步经 RP-HPLC 法梯度洗脱分离得到8个峰;若用毛细管电泳分离则可获得 13 个色谱峰。氨基酸分析表明,GLP-Ⅰ的酸性氨基酸含量为29.83%,具有健脑作用的谷氨酸占16.18%;碱性氨基酸为6.82%;必需氨基酸含量大于36.67%,且支链氨基酸与芳香氨基酸摩尔比 F 值为3.2。凝胶渗透色谱法分析表明,肽GLP-Ⅰ的重均分子量为 2362Da。 2.试验表明,灵芝肽GLP-Ⅰ在脂质和非脂质体系、酶和非酶体系、及动物体外抗脂质过氧化试验中均显示出较强的抗氧化作用: ①灵芝肽 GLP-Ⅰ在脂质体系中表现出良好的抗氧化活性。在豆油体系中对脂质过氧化的抑制效果要优于猪油体系。由此说明 GLP-Ⅰ对不饱和脂肪酸的自动氧化有较强的抑制作用。在酶体系中,灵芝肽GLP-Ⅰ对大豆脂肪氧化酶显示出很强的抑制作用,其IC_(50)为1.69× 灵芝中肽类化合物及生物活牲研究 10”Zmg/ml,当灵芝肽浓度达 0.sing/ffil时,酶活力几乎完全丧失。 ②在几种不同的自山基产生体系中,GLL、GLP-I与GLP-11均表现出 很强的抑制自山基产生的能力。在脱氧核糖.铁体系中,GLP-I能显 著抑制羟基自山基的生成,ICS。为 2.5 X 10”Zmg/ml。各组分对超氧阴 离子自山基也表现出一定的抑制能力。 ③灵芝肽GLP具有防止肝组织匀浆过氧化及膜脂质过氧化的作用 (剂量为 3.smg/ml时抑制率达 66%,同对照组相比,p<0刀1人并能 显著抑制因加入亚铁离子,过氧化氢等自山基催化剂引发的脂质过 氧化作用。 ④灵芝肽GLP可以通过抑制脂质过氧化反应来有效保护线粒体膜, 当剂量为 0.ling/ml时,GLP对线粒体肿胀度的抑制率为 79.l%, 当剂量为 smg/ml时,抑制率高达 gi.8%。试验还表明,GLPJ可以 有效地抑制肝线粒体MDA的生成,呈明显剂量-效应关系。 ⑤灵芝肽GLP-I可显著抑制红细胞自氧化溶血的发生,当肽GLP-I 剂量为 2.5 X 10”’mg/ml时,抑制率达 90%以上。 3.灵芝肽GLPl对实验性糖尿病具有较好地治疗作用,且药效具有一定 的持续性。 4.采用灵芝水浸提液中 GLL部分连续灌胃小鼠,其 800mg/kg剂量组小 鼠的肌糖原与肝糖原贮备量与对照相比有显著提高(p<0刀1人且灌胃 GLL还可降低正常小鼠的体脂指数。灵芝浸提液经超滤得到的透过及截 留两部分(GLL及 GLH)都具有较强的增强小鼠非特异性免疫功能活 性。在相同剂量下,**L对小鼠免疫器官的增重效果明显高于**H组。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R284.1

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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10 胡荣;白芷中欧前胡素提取分离及主要药效学研究[D];成都中医药大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 丁丹华;冷榨油茶籽制备油茶籽粕蛋白及多肽的研究[D];华中农业大学;2010年
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6 王茜;空气电离生成气对黄瓜储藏品质影响的研究[D];华中农业大学;2010年
7 王延昭;利用免疫磁珠技术富集肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌[D];华中农业大学;2010年
8 王强;1—MCP保持猕猴桃品质和果实硬度的机理研究[D];安徽农业大学;2010年
9 海艳;黄酮化合物的化学发光分析研究[D];郑州大学;2010年
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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1 娄红祥;左春旭;李铣;;大蒜化学成分的研究进展[J];国外医药.植物药分册;1991年02期
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