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《华中农业大学》 2003年
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几种病程相关蛋白基因转化番茄的研究

欧阳波  
【摘要】: 真菌病害严重影响农作物产量和农产品品质,有的病原真菌分泌毒素污染粮食直接损害人体健康。栽培措施和化学农药防治真菌病害的能力有限,化学农药还造成严重的环境污染,抗病育种成为解决农作物病害问题的必然选择。传统育种由于周期长和物种间的生殖隔离等问题而面临挑战。转基因技术成为克服其缺点的一个重要选择,基因工程技术为选育抗病新品种,解决农作物病害问题开辟了新道路。 番茄是广受欢迎的一种水果型蔬菜,同时也是植物基因工程研究的一种模式作物。番茄生产受到数十种病原真菌的危害,抗真菌病害研究成为番茄抗病育种的重要方面,协同表达植物防卫基因是一个被看好的选育抗真菌新品种的研究策略。 本研究利用农杆菌介导的转基因方法,针对三种病程相关蛋白基因—菜豆几丁质酶基因(Chi)、烟草β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu)和烟草PR5类基因AP24,在番茄品种A53和中蔬5号上进行了抗真菌转基因研究,获得的主要结果如下: 1.研究了玉米素和IAA对番茄子叶再生的影响。结果表明高浓度玉米素诱导畸形再生芽发生,抑制再生芽生根。在玉米素0.2 mg/L和IAA 1.0 mg/L时,A53正常芽的再生频率最高,达到39.7%。 2.改进了番茄的转化方法。采用两阶段选择培养,前期使用高浓度玉米素(2.0mg/L)促进细胞分化,后期降低玉米素浓度至0.2mg/L,同时增加高水平的IAA(1.0mg/L)。这一方法提高了外植体转化效率,同时缩短了转化植株的生根周期。 3.获得109棵转化植株,其中由A53获得67株,包括转化AP24/Chi的44株和转化Chi/Glu的23株;由中蔬5号获得42棵转化植株,包括转化AP24/Chi的34株和转化Chi/Glu的8株。在导入Chi/Glu的23棵A53植株中,由下胚轴再生而来的有6株。并初步调查了转基因番茄植株的倍性变异情况,结果表明转基因植株加倍率约为8%。 4.PCR检测表明转基因植株阳率为93%;Southern blot结果表明,外源基因已整合到番茄基因组中,其拷贝数1-8个不等。 5.部分转基因植株的Northern blot和抗病性鉴定表明,多数转基因植株外源基因得到了表达,有些植株表现出抗性的明显提高;同时,也有少数的植株表现出外源基因沉默现象。 6.采用TAIL-PCR技术研究了转基因植株中T-DNA右边界的侧翼序列,测序结果进一步确定了外源基因的整合,同时发现T-DNA在整合中出现超界转移和缺失插入等特殊现象。 改进和发展了W己ide等的卡那霉素喷施筛选阳性转基因番茄植株的方法,使其能 够在温室或田间大规模用于阳性植株的早期鉴定、转基因株系的分离研究和纯合株 系的获得。 构建了外源基因AP24的大肠杆菌表达载体,为下一步从蛋白质水平检测转基因植 株的表达情况奠定基础。 利用简并引物,从番茄基因组中扩增到AP24同源基因p;p23的完整CDS,可用 于抗病转基因研究。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S641.2

【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前2条
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【参考文献】
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【共引文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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4 赵永聚;精子因素对精子载体法制备转基因山羊影响的研究[D];第三军医大学;2005年
5 李宁;利用转基因策略创造高淀粉、高直链淀粉玉米新种质[D];山东大学;2011年
6 王祎;油菜超量表达柠檬酸合成酶和植酸酶基因提高抗土壤磷铝胁迫的研究[D];华中农业大学;2012年
7 赵丽荣;超声联合超声造影剂促进VEGF基因转染的体内、外研究[D];吉林大学;2006年
8 刘延波;人类心房利钠肽基因导入对自发性高血压大鼠血压及其靶器官损害影响的实验研究[D];吉林大学;2007年
9 马伯军;水稻OsCIPK基因家族的克隆与转OsCBL8基因水稻的抗逆性分析[D];南京农业大学;2008年
10 刘东辉;长春花萜类吲哚生物碱合成途径重要基因及转录因子功能研究[D];上海交通大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李巍;转基因金针菇和番茄中碱性成纤维细胞生长因子的表达[D];吉林农业大学;2011年
2 苏家琦;农杆菌介导的水稻高效转化系统的建立和水稻转EPSP基因的初步研究[D];四川农业大学;2005年
3 江莺;转基因红花中角质细胞生长因子(KGF-1)的表达[D];吉林农业大学;2011年
4 贾淑玲;转人溶菌酶基因核移植克隆胚的发育研究[D];西北农林科技大学;2008年
5 陈梅;以玉米幼胚为受体转化海藻糖合成酶基因[D];四川农业大学;2008年
6 付浩;油菜防御反应基因诱导表达和候选抗菌核病基因的转化研究[D];华中农业大学;2007年
7 王辉;利用毒蛋白基因提高棉花转化效率的研究[D];石河子大学;2009年
8 付炜哲;农杆菌介导的大豆胚尖转基因体系的建立及优化[D];浙江大学;2013年
9 高营营;抗性相关基因转化小麦的研究[D];扬州大学;2013年
10 马小波;农杆菌介导获得的转基因棉花基因组中外源基因结构与整合方式[D];山东师范大学;2007年
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