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《华中农业大学》 2003年
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用RAPD技术研究几种鲷科鱼类的遗传变异和系统进化

杨慧荣  
【摘要】: 用RAPD技术对取自福建和珠江口的2个天然群体黄鳍鲷和胶州湾(青岛)、台湾海峡(厦门)和北部湾(海南)的3个天然群体各24尾真鲷和黑鲷进行群体内与群体间的遗传变异和亲缘关系分析;同时用RAPD技术对鲷科鱼类的黑鲷、真鲷、二长棘鲷、平鲷和黄鳍鲷进行亲缘关系和系统进化的探讨。 通过梯度实验摸索RAPD-PCR的反应体系和循环参数。选用美国Operon公司试剂盒KitA、KitR与KitS共60个10bp的随机引物,在事先优化的反应条件下,筛选出清晰稳定的随机引物供扩增,其中无扩增产物、扩增带型模糊及不稳定的结果不作分析。研究结果如下: 在黄鳍鲷的群体研究中,使用的40个随机引物中有18个引物扩增出清晰稳定的片段,共计93条。福建和珠江口群体都有较高程度的遗传变异水平,但福建群体的遗传变异水平较珠江口群体有一定程度的降低。用UPGMA程序和NJ程序进行聚类分析,结果表明:福建和珠江口群体分别聚成一支,且两者的聚类结果一致。说明福建和珠江口群体已经出现了明显的遗传分化,分别属于2个不同的地理群体。 在真鲷和黑鲷的群体研究中,使用的60个随机引物中有31个引物扩增出清晰稳定的片段,真鲷和黑鲷各计219条和200条。其中,真鲷多态性片段176条,黑鲷多态性片段135条。真鲷和黑鲷群体间的遗传距离均为:厦门群体和海南群体间最小,青岛群体与厦门群体间次之,青岛群体与海南群体间最大。真鲷群体内的遗传距离为:厦门群体最小,海南群体次之,青岛群体最大;而黑鲷则是厦门群体最小,青岛群体次之,海南群体最大。用MEGA2.1软件的UPGMA程序和NJ程序进行聚类分析,厦门与海南群体首先聚在一起,其次是青岛群体,两者的结果相一致。研究结果与他们的地理分布、生态习性以及我国沿海的海况具有一致性。 在五种鲷科鱼类的RAPD分析中,使用的60个随机引物中有29个引物扩增出清晰稳定的片段,共计200条。五种鲷均有其特异性扩增片段,可作为种类鉴别的依据。根据MEGA2.1软件的UPGMA和NJ程序构建的分子系统树显示:同属鲷属的黄鳍鲷和黑鲷的亲缘关系最近,其次是二长棘鲷和真鲷,平鲷与二长棘鲷和真鲷的亲缘关系较近,与黄鳍鲷和黑鲷的较远,黑鲷和二长棘鲷的亲缘关系最远。研究结果与借助形态学和生化特征进行的传统系统分析具有一致性。在40个个体之间遗传距离矩阵中,最大值达0.8916。此外,多数的遗传距离指数在0.5000~0.8500之间。通过分析,认为RAPD技术对分析属级间的亲缘关系具有一定的适用性。
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