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猪MYOG基因和CAST基因多态性研究及部分DNA片段的测序

杨又兵  
【摘要】: MyoD基因家族编码螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白并调控着肌肉的分化与发育过程,肌细胞生成素基因(myogenin,MYOG)基因是MyoD基因家族中唯一在所有骨骼肌肌细胞系中均可表达的基因,在肌细胞融合形成肌纤维的过程中起着中心调节作用。钙蛋白酶抑制蛋白是依钙蛋白酶水解系统中的内源性抑制剂。钙蛋白酶抑制蛋白基因(calpastatin,CAST)参与肌肉生长过程中蛋白质的代谢更新,从而影响着肌肉的嫩度。本研究以2000年资源家系138头大白×梅山猪F_2代和2002年321头F_1代猪(梅山55头、大白30头、长白43头、大梅81头、梅大46头、长大35头、大长31头)为实验材料,研究了MYOG和CAST基因的遗传效应。 1.MYOG基因的多态性与猪胴体性状和肉质性状的关系 根据猪GenBank序列(X89209)设计引物,扩增到一条含有限制性内切酶MspⅠ酶切位点的特异片段(556bp),对两个资源家系进行基于MspⅠ酶PCR-RFLP多态性扫描,结果如下: (1)MYOG基因在梅山、大梅、梅大中均表现出三种基因型(AA、AB、BB),在大白、长白、大长、长大中表现出两种基因型(AB、BB); (2)MYOG基因的多态性与瘦肉率显著相关。MYOG~(BB)基因型个体比MYOG~(AA)基因型个体高3.57%(P=0.0151),比MYOG~(AB)基因型个体高3.28%(P=0.0118); (3)在2000年家系中,MYOG基因的多态性与眼肌pH值、股二头肌pH值呈显著性相关;在2002年81头大白×梅山猪F_1代猪中其多态性与股二头肌大理石纹呈显著性相关。 2.CAST基因片段的克隆与PCR-RFLP分析 根据猪cDNA序列(M20160)和人、鼠CAST基因的保守序列设计含有限制性内切酶MspⅠ酶切位点和HinfⅠ酶切位点的猪CAST基因引物,建立了基于MspⅠ酶和HinfⅠ酶的PCR-RFLP分析技术,对两个资源家系进行CAST基因的多态性扫描和遗传效应研究,结果如下: (1)克隆的CAST基因片段有3个MspⅠ酶切位点和4个HinfⅠ酶切位点,各有一个MspⅠ酶切和一个HinfⅠ酶切多态性位点。 (2)CAST基因MspⅠ位点多态性与眼肌宽度呈显著性相关,CAST~(CD)基因型个体比CAST~(CC)基因型个体高8.60%(P=0.0108);与眼肌面积极显著性相关,CAST~(CD)基因型个体比CAST~(CC)基因型个体高9.40%(P=0.0095)。 (3)CAST基因HinfⅠ位点多态性与眼肌宽度和眼肌面积呈显著性相关。对于眼肌宽度,CAST~(EF)基因型个体比CAST~(EE)基因型个体高8.17%(P=0.0168);对于眼肌面积,CAST~(EF)基因型个体比CAST~(EE)基因型个体高9.40%(P=0.0103)。 (4)在2000年家系中,CAST基因MspⅠ位点、CAST基因HinfⅠ位点多态性均与肌 华中农业大学2003年硕士学位论文 内脂肪显著相关,cAS兀基因杂合子个体比cAS月募因纯合子个体高13.01%(卢七叹口么卯); 与肌内水分极显著相关(卢七叹口伏万)。cAS堪因Hz’刀月位点还与股二头肌PH值呈显著 相关(卢七叹久尧移)。在2002年81头大白X梅山猪F:代猪中,CAS7基因J丈劝I位点与眼肌 pH值显著相关(卢七叹例夕李)。


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