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《华中农业大学》 2003年
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甘蓝型油菜细胞核雄性不育的基因表达研究

贺华良  
【摘要】: 植物在生长发育过程中,很多基因都有其特有的表达模式,在不同的生长环境下,不同的组织或发育阶段,基因的表达水平都不一样。本文旨在通过对甘蓝型细胞核雄性不育材料与雄性可育材料的对照分析,用cDNA-AFLP差异显示法找出二者在花药临败育时期的差别表达基因,进一步研究差别育性基因对花药败育的影响;同时参考拟南芥中已发表的育性相关基因,根据保守同源序列设计引物在甘蓝型油菜中扩增同源基因,比较不育材料与可育材料序列之间的变异并做进一步的研究。本研究对隐性核不育材料S45进行了差异显示研究,获得以下主要结果: 1.建立了一套cDNA-AFLP差异表达分析的技术体系,并将cDNA-AFLP差异显示技术运用于油菜育性机理研究。研究表明cDNA-AFLP技术能够有效揭示核不育系的可育株与不育株的差异表达,具有稳定性好、重复性高等优点。 2.揭示了不育系中可育株与不育株的三种基因表达差异。采用三组引物512种引物对(2*16~2)进行AFLP扩增,分析表明,不同引物对扩增出的带纹数目不同,最多可达70多条,平均每对引物可扩增出约40条清楚的带纹。根据差异带纹的有无及强弱,可将其分成3类:(1)在细胞核雄性不育材料中没有而雄性可育材料中出现的差异带;(2)在细胞核雄性不育材料中有而雄性可育材料不出现的差异带;(3)雄性不育材料与雄性可育材料都出现但强弱不一致。这些丰富的多态性,对于分离与育性相关的基因和研究育性转变机理十分有用。 3.获得了22个大小在100-600bp的差异表达cDNA片段。通过筛选去除非特异性扩增的片段后有14个侯选差异表达cDNA片段,其中8个为雄性可育材料出现的差异带,另外6个雄性不育材料出现的差异带。 4.对14个候选差异表达cDNA片段进行了杂交筛选。14个差异片段经过反向Northern Blot鉴定和Northern Blot验证后,获得代号为1A-3、3B-2的两个阳性片段。对阳性片段克隆测序分析表明,1A—3片段含有与Doublesex- and mab-3相关转录因子家族的DM域(DNA-binding motif)高度同源的序列,DM域是转录因子调控动物精子发生的重要保守区域,推测油菜中含DM域的基因可能与花粉发育相关。3B-2片段的只在可育株中有Northern杂交信号,与拟南芥的一个未知功能基因高度同源,对此未知功能基因是否与败育相关需要进一步验证。 5.对油菜中与拟南芥MS1、MS2基因同源的基因进行了同源序列法研究。 华中农业大学硕士论文贺华良 扔及劲aP基因获得了全长序列,基因全长265Obp,mRNA长1928bp,含有7个内含子。 J献夕了勘aP基因目前只获得5’端1755bp,在1755bP序列中含有两个内含子。 6.对不育株和可育株的献笼肠,aP基因序列分析表明,不育株与可育株的 泌及知aP基因之间在五个位置上有单碱基差异,其中两个错义突变,三个无义突变。 不育株与可育株的献夕了BnaP基因在第一个内含子有一个碱基的差异。献夕了肠即、 J似笼肠,aP在不育株与可育株之间的差异以及与败育的可能相关性,需要进一步研究。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S565.4

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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2 洪登峰;甘蓝型油菜显性细胞核雄性不育基因Ms/Mf的定位[D];华中农业大学;2006年
3 何俊平;甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育基因ms3的精细定位[D];华中农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
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3 马爱芬;甘蓝型油菜种皮色泽相关基因差异显示及相关生理性状研究[D];西南大学;2008年
4 王家丰;高温胁迫下甘蓝型油菜发育种子相关基因的差异表达研究[D];西南大学;2009年
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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10 崔凯荣,邢更生,秦琳,王亚馥;利用mRNA差别显示技术分析枸杞体细胞胚发生早期基因的差别表达[J];遗传;1998年05期
【共引文献】
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6 王高歌,杨官品,茅云翔,张宝红,张学成;螺旋藻胞外和胞内核酸酶活性研究[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2001年06期
7 李筠;周宏霞;刘佳琳;张跃峰;陈吉祥;张晓华;;青岛近岸特征环境中海洋异养细菌的分布规律及其分子鉴定[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2006年06期
8 姜淑芳,王珊,盛云杰,王宜军,张桂珍;弓形虫p~(22)抗原基因克隆的构建[J];实用医药杂志;2002年01期
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10 沈利群;梁华平;徐祥;吕凤林;李生茂;;核因子-κB p50亚基同源结构域相互作用多肽的筛选[J];实用医药杂志;2006年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
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2 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
3 孙其信;倪中福;吴利民;孟凡荣;王章奎;林展;;杂交种与亲本间基因差异表达与小麦杂种优势分子机理[A];21世纪作物科技与生产发展学术讨论会论文集[C];2002年
4 陈凤祥;胡宝成;李强生;侯树敏;吴新杰;费维新;;甘蓝型油菜隐性上位互作核不育的发现、研究与利用[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
5 陈凤祥;胡宝成;李强生;候树敏;吴新杰;费维新;;甘蓝型双低黄籽油菜核不育材料7024A的发现与初步研究[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
6 段绍光;卞春松;刘杰;徐建飞;庞万福;金黎平;;马铃薯育性与杂交结实研究进展[A];马铃薯产业与科技扶贫(2011)[C];2011年
7 杨晓云;;蔬菜温敏雄性不育的研究进展[A];中国园艺学会首届青年学术讨论会论文集[C];1994年
8 侯喜林;史公军;王彦华;;不结球白菜胞质雄性不育基因分子标记的筛选及特异片段的分析[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
9 黄浩;柳李旺;龚义勤;陈崇顺;张慧荣;;萝卜总RNA提取与mRNA差异显示技术初步研究[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
10 郭军;屈冬玉;王晓武;金黎平;谢开云;Rays Jiang;Francine Govers;;利用cDNA-AFLP技术鉴定马铃薯晚疫病菌小种特异无毒基因候选表达序列[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赖晓芳;中国对虾应答WSSV侵染相关基因的研究[D];中国海洋大学;2010年
2 田新惠;彩色棉GhF3'H与GhF3'5'H基因的克隆、鉴定及四种类黄酮物质的HPLC分析[D];石河子大学;2010年
3 陈洋;转cry1Ab/vip3H水稻抗螟性的鉴定及三类不同转基因水稻对其非靶标生物褐飞虱影响的评价[D];浙江大学;2010年
4 石从广;油菜EMS诱变群体的构建以及油脂代谢相关基因等位多态性与油脂品质关系的研究[D];浙江大学;2010年
5 李俊;拟南芥阿拉伯半乳糖蛋白基因AtFLA3生物学功能研究[D];武汉大学;2010年
6 万凌琳;水稻β-1,3葡聚糖苷酶基因Osg1的功能研究[D];武汉大学;2010年
7 张新梅;甘蓝显性雄性不育基因Ms-cd1的精细定位[D];西北农林科技大学;2010年
8 朱彦涛;甘蓝型油菜Polima CMS和陕2A CMS的形态和生化特征及其胞质遗传物质的比较研究[D];西北农林科技大学;2010年
9 赵会芳;新型大白菜Ogura细胞质雄性不育系RC_7不育机理研究[D];西北农林科技大学;2010年
10 王丽丽;大白菜核基因雄性不育系定向转育及分子标记辅助育种研究[D];沈阳农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王瑞文;紫薇开花生物学特性及杂交育种的初步研究[D];华中农业大学;2010年
2 李智;梨抗黑星病类似基因Hcrp和启动子克隆与类受体蛋白分析[D];华中农业大学;2010年
3 杨堃;鹅CYP7A1基因克隆、表达调节及表达规律的研究[D];华中农业大学;2010年
4 李炫丽;ms2Bnap同源序列在萝卜—芥蓝异源四倍体中的克隆及表观遗传变异分析[D];华中农业大学;2010年
5 闫恒超;棉花纤维发育伸长期和次生壁加厚期数字表达谱分析[D];华中农业大学;2010年
6 呼光富;颖鲤杂种优势及其相关分子生物学初步研究[D];华中农业大学;2010年
7 樊志明;萝卜甘蓝双二倍体雄性不育性的遗传及细胞学研究[D];华中农业大学;2010年
8 韩芳;甘蓝型油菜A3染色体遗传连锁图谱的构建[D];华中农业大学;2010年
9 黎兰献;芸薹属主要蔬菜遗传特异性和多样性的快速鉴定[D];华中农业大学;2010年
10 王国栋;利用微阵列技术筛选大白猪和二花脸猪经产母猪排卵卵泡差异表达基因[D];华中农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张松莲;曾富华;喻宁华;饶力群;;植物miRNA的功能及其作用机制[J];热带亚热带植物学报;2006年05期
2 张海艳,于元杰,周玉亮;植物细胞质雄性不育的生物学研究进展[J];山东农业大学学报(自然科学版);2004年01期
3 蒙大庆,袁代斌,李芝凡,蒲定福,胥岚;甘蓝型油菜核不育系绵9AB-1不育性的遗传规律研究及初步应用[J];四川农业大学学报;2002年04期
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5 俞焙秦;刘炳亚;;miRNA的生物学特性和功能[J];上海交通大学学报(医学版);2007年05期
6 李树林;钱玉秀;吴志华;;甘蓝型油菜细胞核雄性不育性的遗传规律探讨及其应用[J];上海农业学报;1985年02期
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10 孙超才,方光华,赵华,王伟荣,钱小芳,李延莉;甘蓝型油菜(Brassica napus L.)隐性核不育两型系22118AB的基因型分析及利用途径探讨[J];上海农业学报;1997年01期
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2 陈升;应用分子标记辅助选择培育广谱、高抗白叶枯病的杂交水稻恢复系[D];华中农业大学;2000年
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5 胡胜武;甘蓝型油菜(Brassica napus)新型核不育材料Shaan-GMS的遗传及核不育的分子机制研究[D];西北农林科技大学;2003年
6 王俊霞;甘蓝型油菜Pol CMS育性恢复基因图谱定位及抗菌核病恢复系的分子标记辅助选择[D];华中农业大学;2001年
7 王玲平;十字花科植物CYP86MF同源基因的结构、功能及进化关系的研究[D];浙江大学;2004年
8 陆光远;甘蓝型油菜显性细胞核雄性不育基因和抑制基因的分子标记及其应用[D];华中农业大学;2004年
9 刘仁虎;油菜杂种优势分子标记剖析及菌核病抗性相关基因筛选[D];华中农业大学;2004年
10 危文亮;甘蓝型油菜细胞质雄性不育系NCa的研究[D];中国农业科学院;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵志伟;甘蓝型油菜(Brassica napus)BAN基因同源片段克隆分析及油菜花序浸泡法转基因研究[D];四川大学;2002年
2 何昆燕;利用DH(Doubled Haploid)群体对甘蓝型油菜菌核病抗性基因的QTL定位和分析[D];华中农业大学;2003年
3 张在宝;拟南芥雄性不育突变体遗传分析及相关基因的克隆[D];上海师范大学;2004年
4 帅琪峰;白菜核雄性不育两用系花蕾cDNA文库的构建及雄性不育相关基因的初步筛选[D];浙江大学;2004年
5 陈平平;两个新型油菜雄性不育系681A和transⅠ的细胞学机理的研究[D];湖南农业大学;2004年
6 程勇;甘蓝型油菜显性核不育基因的AFLP标记及品种(系)的SSR指纹图谱研究[D];中国农业科学院;2005年
7 付志远;玉米温敏核雄性不育系的生态学和遗传学研究及基因定位[D];河南农业大学;2005年
8 方明镜;利用MAS技术改良华玉四号的实践和理论理论探讨[D];华中农业大学;2005年
9 韦淑亚;甘蓝型油菜菌核病抗性相关基因cDNA文库构建及评价[D];华中农业大学;2005年
10 刘旭昊;两个新发现的油菜雄性不育系花药败育机理的研究[D];兰州大学;2006年
【二级引证文献】
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1 李婧婧;谢彦周;洪登峰;刘平武;何庆彪;杨光圣;;甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育上位抑制基因(esp)的分子标记开发[J];中国油料作物学报;2011年06期
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1 张立武;甘蓝型油菜每角粒数的遗传和主效QTL的定位[D];华中农业大学;2010年
2 易斌;甘蓝型油菜隐性核不育基因Bnms1的精细定位和克隆[D];华中农业大学;2008年
3 何俊平;甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育基因ms3的精细定位[D];华中农业大学;2008年
4 王贵春;甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育两型系9012AB雄性不育基因的分子标记开发[D];华中农业大学;2008年
5 刘俊;甘蓝型油菜显性细胞核雄性不育基因与恢复基因的精细定位[D];华中农业大学;2008年
6 万丽丽;油菜细胞核雄性不育的细胞学研究以及育性相关基因的克隆与功能分析[D];华中农业大学;2010年
7 董发明;甘蓝型油菜核不育系9012AB的遗传模式修正与BnRf位点的物理定位[D];华中农业大学;2012年
8 李季;油菜细胞核雄性不育基因Bnms3的克隆及功能标记开发[D];华中农业大学;2012年
9 谢彦周;甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育上位抑制基因的精细定位[D];华中农业大学;2010年
10 卢卫;甘蓝型油菜细胞核雄性不育恢复基因BnMs5~α的克隆[D];华中农业大学;2013年
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2 李艳飞;三个育性相关基因在三类小麦雄性不育系中的表达研究[D];西北农林科技大学;2011年
3 李婧婧;甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育上位抑制基因(esp)的分子标记开发与评价[D];华中农业大学;2011年
4 文燕萍;分子标记辅助选择甘蓝型油菜育139隐性细胞核雄性不育系及临保系[D];华中农业大学;2011年
5 李金博;分子标记辅助选育甘蓝型油菜浙双72同核隐性不育系及临保系[D];华中农业大学;2011年
6 宋立红;两种油菜隐性核不育系综合利用及中国近年70份甘蓝型油菜品种(系)遗传多样性研究[D];西北农林科技大学;2011年
7 田海燕;黄萎病菌诱导下棉花抗病品种冀种20 SSH文库的构建[D];河北农业大学;2006年
8 张伟杰;甘蓝型油菜抗应答盘菌侵染早期表达模式分析[D];华中农业大学;2006年
9 马爱芬;甘蓝型油菜种皮色泽相关基因差异显示及相关生理性状研究[D];西南大学;2008年
10 洪晓敏;甘蓝型油菜显性细胞核雄性不育相关基因2-I05功能研究[D];华中农业大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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2 李树林;钱玉秀;吴志华;;甘蓝型油菜细胞核雄性不育性的遗传验证[J];上海农业学报;1986年02期
3 马德钦,吕文,汤岚,骆爱玲,梁峥;菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆和序列分析[J];生物工程学报;1996年01期
4 李树林;钱玉秀;尹继春;吴志华;;甘蓝型油菜雄性不育二系法的杂种优势利用研究[J];上海农业科技;1984年05期
5 宁顺斌,王玲,宋运淳;几种差别表达基因显示技术及其在植物方面的应用[J];生命科学;1999年03期
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7 艾万东;高等植物调渗蛋白与耐旱耐盐基因工程[J];生物工程进展;1994年03期
8 康毅滨,柴建华;人基因组表达图谱分析和疾病相关基因搜寻──现状与展望(续前)[J];生物工程进展;1996年01期
9 肖德兴;马尾松花粉中的淀粉粒和胼胝质[J];实验生物学报;1994年01期
10 ;油菜雄性不育二系法的研究[J];上海农业科技;1980年02期
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