收藏本站
《华中农业大学》 1999年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

苏云金芽胞杆菌对鳞翅目昆虫广谱高毒基因工程菌的构建

鲁松清  
【摘要】: 本论文主要是围绕构建苏云金芽胞杆菌对鳞翅目昆虫特别是针对甜菜夜蛾的高效广谱基因工程菌而开展的研究工作。研究结果总结如下: 1 菌株对甜菜夜蛾的毒力与基因类型的关系 PCR扩增检测了九个苏云金芽胞杆菌菌株所含杀虫晶体蛋白(Insecticidal CrystalProtein,ICP)基因,根据扩增结果将它们分为5种基因类型。高毒力菌株属于基因类型1和2。基因类型1含cry1Aa和cry1Ac,基因类型2含cry1Aa。这一结果为基因工程菌的构建提供了理论依据。国内尚未见基因类型与毒力关系的相关报道。 2 依赖芽胞形成ICP的cry1C启动子(P_(1C))对野生菌株特性的影响 将带P_(1C)及cry1C的质粒pBMBLC分别转入野生菌株YBT-1535,YBT-1520和YBT-833。结果菌株YBT-1535的转化子对甜菜夜蛾的毒力有非常显著的提高(8倍以上),对棉铃虫和小菜蛾的毒力影响不大,转化子的综合毒力高于YBT-1535。菌株YBT-1520的转化子不论是对棉铃虫还是对小菜蛾的毒力均有不同程度的下降,对甜菜夜蛾的毒力也无大的变化。质粒pBMBLC电脉冲转入菌株YBT-833,得到了几个ICP基因背景不同的转化子,它们的综合毒力较出发菌YBT-833都没能得到提高。综合这三个菌株的实验结果,虽然菌株YBT-1535转化子的综合毒力有所提高,但那是建立在YBT-1535较低毒力水平之上的,转化子的毒效离实际应用相差甚远,工程菌构建的基本思路可能需作大的改变。将ICP基因转入野生菌株国内尚无人报道。 3 非依赖芽胞形成ICP的cry3A启动子(P_(3A))对野生菌株特性的影响 带P_(3A)和cry1C基因的重组质粒pBMB827转入YBT-1520,转化子对所测昆虫的毒力下降非常明显,芽胞和晶体也很难脱落。此外,PCR扩增发现转化子比出发菌YBT-1520多了cry1Ab的特异带,SDS-PAGE电泳证实Cry1Ab的存在。至于为何质粒pBMB827的转入导致隐性cry1Ab的表现及表达则不清楚。国内尚未有人报道P_(3A)对野生菌株特性影响的相关研究。 4 高毒力工程菌株YBT-833-2-1的遗传改造及其特性 对YBT-833-2进行无抗性压力选择,得到一株高毒力工程菌株YBT-833-2-1。YBT-833-2-1比其原始出发菌株YBT-833少了一条带cry1Ab的质粒。生物测定结果表明,它对小菜蛾的毒力比YBT-833有明显提高(P>0.95):对棉铃虫和甜菜夜蛾的毒力比YBT-833有大幅上升。与生产菌株YBT-1520比较,除对棉铃虫的毒力存在差距外,对小菜蛾和甜菜夜蛾的毒力都明显提高(P>0.95)。工程菌株YBT-833-2-1的综合毒力明显高于菌株YBT-833和YBT-1520,它具有极高的商业开发价值。通过消除cry1Ab提高菌株毒力在国内外均未见相关报道。 5 影响菌株毒力的因素 体外将Cry2和Cry1Ab分别与菌株YBT-833,YBT-833-2-1的胞晶混合物混合测定,结合HD-1与HD-1-80-21,HD-133与HD-133-5的生测结果,发现Cry1Ab与其它ICP不存在拮抗作用。工程菌株YBT-833-2-1毒力远高于YBT-833的原因是:a.cry1Ab的丢失导致其它ICP量的增加(包括Cry2);b.Cry2对其它ICP的增效作用。本文结果国内外均未见相关报道。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:1999
【分类号】:Q781

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜立新;魏娟;韩丽丽;陈榛;张杰;宋福平;黄大昉;;苏云金芽胞杆菌sigK基因插入失活突变体的特点及其对cry3A基因启动子活性的影响[J];微生物学报;2011年09期
2 季思思;朱义广;彭东海;阮丽芳;孙明;;苏云金芽胞杆菌质粒p26复制功能区的克隆[J];华中农业大学学报;2011年05期
3 彭梅;尹娜;谢天宏;葛长勇;张光明;李鸿钧;孙茂盛;;重组抗菌肽基因克隆及其Pichia pastoris表达工程菌的构建[J];云南大学学报(自然科学版);2007年S3期
4 梁琳;张萍萍;刘兢;查向东;;颗粒裂解肽G13结构域引发细菌SOS反应[J];中国抗生素杂志;2011年05期
5 王贵君;郑月;陈敏;廖志华;;颠茄H6H基因的克隆及高效植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2011年17期
6 谢琦;林军;王凤山;;pGEX-4T-1/Tα1-TP5原核表达载体的构建及表达[J];生物技术通报;2011年08期
7 董磊;张晓鹏;房婷;易绍琼;于婷;侯利华;付玲;于长明;陈薇;;PSCA-HSP70融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化[J];生物技术通报;2011年06期
8 郭全海;陈陆;王川庆;吴德峰;王永生;李志娟;王艳;;猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性抗原表位重组腺病毒的构建及鉴定[J];中国兽医学报;2011年08期
9 林丽华;郭媛;庞浩;黄日波;;大肠杆菌中表达关键基因产异丁醇的研究[J];生物技术;2011年03期
10 卢晨;赵辉;邹文艺;范清林;付永标;宋礼华;;重组人干扰素α-2b在大肠杆菌中分泌表达[J];生物学杂志;2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 乐超银;孙明;喻子牛;;苏云金芽胞杆菌广谱、遗传稳定工程菌的构建[A];中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集[C];2006年
2 彭东海;陈守文;阮丽芳;李林;喻子牛;孙明;;苏云金芽胞杆菌表达营养期杀虫蛋白基因的工程菌安全性毒理学试验研究[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
3 孙明;喻子牛;陈守文;刘子铎;李林;;苏云金芽胞杆菌系列基因工程菌的构建和开发[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
4 孙明;喻子牛;陈守文;刘子铎;李林;;苏云金芽胞杆菌基因工程菌的构建和开发[A];第十届全国杀虫微生物学术研讨会暨全国生物农药与化学生物学研究与产业化会议论文摘要集[C];2006年
5 喻子牛;孟盈;孙明;何进;李明顺;郑世学;;苏云金芽胞杆菌新基因资源的发掘策略[A];第三届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会会议论文摘要集[C];2011年
6 周帼萍;闫建平;郑大胜;周晓慧;袁志明;;苏云金芽胞杆菌在食品中分布及来源分析[A];中国微生物学会《第二届全国农业微生物研究及产业化研讨会》和《第十一届全国杀虫微生物学术研讨会》暨《湖北省暨武汉市微生物学会和内蒙古微生物学会2008年会》论文摘要[C];2008年
7 彭于发;张玉勋;黄大昉;张杰;;抗病杀虫工程菌PT212存活和定殖的初步研究[A];全国生物防治学术讨论会论文摘要集[C];1995年
8 张春鸽;束长龙;高继国;宋福平;张杰;;高通量测序在苏云金芽胞杆菌基因发掘中的运用[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
9 林白雪;陶勇;;产唾液酸大肠杆菌代谢工程菌的构建[A];2010年中国科学院微生物研究所博士后学术年会暨第二届博谊论坛论文摘要集[C];2011年
10 何晓明;刘晓垒;陆琼;束长龙;张永军;张杰;宋福平;;苏云金芽胞杆菌中新型vip3基因的克隆与活性分析[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 侯曜禹;利用棉花抗虫工程菌防治棉铃虫[N];农民日报;2001年
2 本报记者 贾婧;从源头截住农药对水体的污染[N];科技日报;2005年
3 雪柯;用生物技术造饮用水[N];中国环境报;2003年
4 本报记者 李清理;从实验室到产业化的跨越[N];中国证券报;2000年
5 张树庸;巨大的影响[N];科技日报;2003年
6 王;乙肝疫苗成本有望减少[N];医药经济报;2002年
7 罗明典;嗜极生物及其功能[N];科技日报;2002年
8 雪球;企业应重视自主知识产权产品开发[N];医药经济报;2000年
9 ;生物技术展望[N];科技日报;2002年
10 张云普;大庆局二期攻关微生物驱油技术[N];中国石油报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 鲁松清;苏云金芽胞杆菌对鳞翅目昆虫广谱高毒基因工程菌的构建[D];华中农业大学;1999年
2 朱晨光;苏云金芽胞杆菌抗病杀虫和广谱工程菌的构建[D];华中农业大学;2004年
3 刘子铎;苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白和辅助蛋白基因的克隆表达[D];华中农业大学;1999年
4 邵宗泽;苏云金芽胞杆菌帮助蛋白对杀虫晶体蛋白表达的影响[D];华中农业大学;2000年
5 李林;苏云金芽胞杆菌高频转化系统的建立及其性能[D];华中农业大学;1999年
6 吴燕榕;苏云金芽孢杆菌vip3A基因及杀虫防病工程菌研究[D];福建农林大学;2004年
7 付祖姣;苏云金芽胞杆菌4.0718新菌株功能基因组的研究和高效杀虫工程菌的构建[D];湖南师范大学;2008年
8 周琴;绿色荧光蛋白基因在苏云金芽胞杆菌中的表达与应用[D];华中农业大学;2004年
9 刘廷辉;苏云金芽胞杆菌菌株Bt11和GS8的研究[D];河北农业大学;2009年
10 张琼;苏云金芽胞杆菌蛋白Aii及其对植物病原菌致病性的影响[D];华中农业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴雪云;抗生素iso-migrastatin发酵条件优化和高产机理研究[D];浙江理工大学;2010年
2 王平章;植酸酶phyA基因转化毕赤酵母的筛选及工程菌培养基研究[D];四川农业大学;2002年
3 舒正玉;重组苏云金芽胞杆菌WG-001环境安全性分析[D];华中农业大学;2003年
4 祁艳霞;热稳定性β-半乳糖苷酶工程菌构建及其培养条件优化[D];西北农林科技大学;2005年
5 刘真喜;重组hIGF-I工程菌的发酵及产物纯化的研究[D];第一军医大学;2001年
6 张沛;带有ALDC基因的青岛啤酒酵母工程菌的研究[D];江南大学;2004年
7 薛庆节;工程菌酯酶B1的分离纯化及固定化研究[D];山东农业大学;2005年
8 申泉;利用Ⅱ型机制组成型分泌表达Harpin的生防工程菌的构建[D];山西大学;2004年
9 王爽;表达Mn14-sod基因酵母工程菌的构建及其表达条件的研究[D];中国农业大学;2005年
10 王敏;构建fks1缺陷型啤酒酵母基因工程菌改良自溶性能[D];江南大学;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026