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《华中农业大学》 2004年
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杀虫晶体蛋白和低聚异麦芽糖的毛细管电泳分析

操丽丽  
【摘要】:本文利用毛细管电泳对苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白和低聚异麦芽糖产品中主要组分的测定方法进行了研究,结果如下: 通过石油醚萃取和双水相萃取相结合的方法提取了纯度达95%的伴胞晶体。将菌株HD-73的伴胞晶体在碱性条件下溶解,在酸性条件下沉淀进行初步提纯杀虫晶体蛋白,再通过DEAE-纤维素柱层析进一步纯化,作为标准用于进一步的定性和定量分析。初步发展了毛细管区带电泳法和毛细管凝胶电泳法分析检测杀虫晶体蛋白的方法。其中毛细管区带电泳的条件为:毛细管为40cm(有效长度为30 cm)、内径75μm的未涂层的石英毛细管;以50 mmol/L硼砂(pH 9.5)、3.5 mmol/L SDS、20%(v/v)乙腈、0.1%β-巯基乙醇为运行缓冲液,柱温25℃,检测波长280nm,压力进样(0.5 psi×10 Sec),分离场强为250 V/cm。杀虫晶体蛋白可以在10分钟之内得到快速分离。在0.05/0.40 mg/ml范围内,浓度与峰面积具有很好的线性关系(相关系数为0.9997);毛细管凝胶电泳的条件为:毛细管为40 cm(有效长度30 cm)×50 μm I.D的中性涂层的石英毛细管,0.1 mol/L Tris-CHES(pH 8.6)添加0.1%SDS、2.5%PEO作为运行缓冲液,分离场强为300 V/cm,柱温25℃,检测波长214 nm。 建立了柱前衍生化测定低聚异麦芽糖中主要组分的毛细管电泳方法。在未涂渍的石英毛细管中,以75 mmol/L硼砂(pH 10.5)为运行缓冲液,在检测波长214 nm、分离电压15 kV下对低聚异麦芽糖主要组分的α-萘胺衍生物进行快速地分离测定。结果表明,该方法重现性好,迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.5%和2.0%以内。异麦芽糖、异麦芽三糖、潘糖浓度在0.005~1.000 mg/ml范围内,含量均与其峰面积之间呈现良好的线性关系。该法灵敏度高、成本低,为测定低聚异麦芽糖产品中主要组分提供了一种高效快速的方法。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:O658.9

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