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《华中农业大学》 2005年
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核rDNA ITS序列在侧耳属分子分类学上的应用

郑和斌  
【摘要】:侧耳属是一类广为分布的且具有食(药)用价值的木腐生真菌,种类较多,分类较为混乱。本文利用PCR产物克隆测序测定了侧耳属7个种和中国各地区栽培的11个侧耳品种以及外群黑木耳的核rDNA ITS(内转录间隔区)序列,另外从GenBank获得23个侧耳种与外群亚侧耳的ITS序列。运用Bioedit与Phylip软件对所获得的ITS序列进行分析,构建了侧耳属系统发育树及我国各地区侧耳品种的亲缘关系树,获得了各供试侧耳之间的平均遗传距离,研究了供试侧耳的分类及系统亲缘关系。现将实验结果报告如下: 1.供试侧耳的ITS区(含ITS1,5.8S rDNA和ITS2)序列的长度范围为627-667bp,比对(alignment)后长度为731bp,变异位点为317个,信息位点为247个;其中,ITS1和ITS2的长度范围分别为225—266bp和228—262bp,变异位点分别为176个和139个,信息位点分别为142个和103个;5.8S rDNA长度范围为155-158bp,变异位点为4个,信息位点为2个。 2.以亚侧耳作为外群,利用MP(最大简约法)构建的系统发育树及它们之间的平均遗传距离表明:供试材料中已定种名的30个侧耳可以分为六组:第一组包括P.abieticola、P.fossulatus、刺芹侧耳、白阿魏蘑、杨侧耳、P.subarelatus、P.albitus、阿魏蘑、灰白侧耳、哥伦比亚侧耳、凤尾菇、佛罗里达侧耳和糙皮侧耳。第二组含P.australis、美味侧耳、肺形侧耳和P.oputiae。第三组含红侧耳、P.incarnatus、扇形侧耳和贝盖侧耳,它们之间具有非常近的亲缘关系。第四组含P.euosmus、黄白侧耳和金顶侧耳。第五组含囊盖侧耳、P.fusscosquamulosus、P.smithii和栎侧耳。第六组有P.javanicus与具核侧耳,这两者与其它侧耳的亲缘关系较远。其中金顶侧耳与黄白侧耳、佛罗早达侧耳与糙皮侧耳、红侧耳与P.incarnates、灰白侧耳与哥伦比亚侧耳为同一个种两个不同的名称;白阿魏蘑与刺芹侧耳和阿魏蘑有较密切的亲缘关系,但它们不是同一个种。而肺形侧耳与凤尾菇关系很远,应属于两个不同的种。 3.以黑木耳作为外群,利用MP(最大简约法)构建的亲缘关系树及它们之间的平均遗传距离表明:我国各地区主要栽培的侧耳品种按亲缘关系可分为五大组:第一组包括凤尾菇、灰白侧耳、佛罗里达侧耳、糙皮侧耳、缘刺侧耳、平802、日本秀珍和姬菇。其中糙皮侧耳与佛罗里达侧耳为同一个种,日本秀珍、缘刺侧耳及姬菇都为哥伦比亚侧耳下的栽培品种。第二组含杏孢菇、香侧耳、白阿魏蘑、刺芹侧
【关键词】:侧耳属 PCR ITS 分类 亲缘关系
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q949.32
【目录】:
  • 目录3-5
  • 中文摘要5-6
  • Abstract6-8
  • 1 前言8-18
  • 1.1 rDNA序列在蕈菌分类学和系统发育研究中的应用8-11
  • 1.1.1 5S rDNA序列分析9
  • 1.1.2 18S rDNA序列分析9-10
  • 1.1.3 28S rDNA序列分析10
  • 1.1.4 ITS序列分析10
  • 1.1.5 IGS序列分析10-11
  • 1.2 侧耳属真菌分类及系统发育研究进展11-18
  • 1.2.1 以形态特征为依据的分类12-13
  • 1.2.2 以交配亲和试验为依据进行分类13
  • 1.2.3 以生化特性进行分类13-14
  • 1.2.4 分子分类14-18
  • 2 研究内容、目的与意义18-19
  • 3 材料与方法19-27
  • 3.1 材料19-23
  • 3.1.1 供试菌株19
  • 3.1.2 供试培养基及其配方19
  • 3.1.3 DNA提取系列试剂19-20
  • 3.1.4 电泳系列试剂20
  • 3.1.5 PCR反应系列试剂20
  • 3.1.6 克隆用系列试剂与材料20-21
  • 3.1.7 质粒提取液21-23
  • 3.2 试验方法23-27
  • 3.2.1 菌丝体的培养与收集23
  • 3.2.2 DNA提取23-24
  • 3.2.3 PCR反应24-25
  • 3.2.4 ITS片段的回收与纯化25
  • 3.2.5 ITS片段的克隆及质粒纯化25-26
  • 3.2.5.1 转化载体的构建25
  • 3.2.5.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化25
  • 3.2.5.3 质粒DNA的制备与纯化25-26
  • 3.2.6 ITS片段测序及序列分析26-27
  • 4 结果与分析27-36
  • 4.1 ITS目的片段的扩增27
  • 4.2 ITS序列分析27-29
  • 4.3 侧耳属系统发育分析29-31
  • 4.4 各地区主要栽培侧耳品种亲缘关系的分析31-36
  • 5 讨论36-39
  • 5.1 核rDNA ITS序列在侧耳属分类鉴定和系统发育研究中的应用36-37
  • 5.2 中国各地区主要栽培的侧耳品种亲缘关系的探讨37-38
  • 5.3 核rDNA ITS序列在系统发育及分类学上的应用前景分析38-39
  • 参考文献39-45
  • 致谢45

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