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《华中农业大学》 2005年
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低浓度环丙沙星对体外模型中人大肠杆菌和粪肠球菌敏感性影响研究

张可煜  
【摘要】:残留在动物可食性组织中的抗菌药物被人体摄入后可能对人体肠道菌群产生各种不良影响,而环丙沙星等喹诺酮类药物应用广泛,已经导致了大量耐药细菌的产生。本研究利用体外人肠道消化模型,通过振荡培养人肠道菌模拟低剂量环丙沙星在人胃肠道的消化过程,同时设立无胃肠消化过程的细菌耐药性诱导模型,研究环丙沙星在可食性动物组织中发生残留时对人肠道菌耐药性的影响。肠道消化模型以人体肠道常住条件病原菌为指示菌,大肠杆菌和粪肠球菌标准菌株的细菌接种浓度为10~5、10~6、10~8CFU/mL,健康志愿者粪便中分离到的大肠杆菌、沙门氏菌敏感菌株细菌接种浓度为10~6CFU/mL;无胃肠消化过程的模型以大肠杆菌标准菌株、粪肠球菌标准菌株为指示菌,细菌接种浓度为10~6CFU/mL。各模型环丙沙星药物浓度均设0.1μg/mL、0.5μg/mL和2μg/mL三个剂量组和无药对照组,厌氧振荡培养一天或连续七天。采用美国国家临床试验室标准委员会推荐的二倍琼脂稀释法检测诱导前后细菌对环丙沙星、恩诺沙星、青霉素、庆大霉素、四环素、红霉素、氨苄青霉素、头孢氨苄、氯霉素、磺胺二甲嘧啶等十种抗菌药物敏感性的变化;采用平板稀释计数法观察经过一天诱导后细菌数量的变化;对诱导中产生的对坏丙沙星敏感性下降的菌株,进行聚合酶链反应(PCR)扩增GyrA基因(gyrA)的耐药决定区,比较耐药决定区核苷酸序列,分析耐药的分子机制。 在胃肠消化模型和无消化模型中,经一天诱导后,0.1μg/mL以上环丙沙星对大肠杆菌、沙门氏菌的生长有明显的抑制作用,对粪肠球菌生长的抑制作用不显著。七天诱导后,无消化模型中0.5μg/mL以上坏丙沙星使大肠杆菌或沙门氏菌死亡。胃肠消化模型中2μg/mL环丙沙星使10~5和10~6CFU/mL细菌接种量的大肠杆菌或沙门氏菌死亡。所有剂量组中存活的大肠杆菌、沙门氏菌对环丙沙星和恩诺沙星都产生耐药,对其它抗菌药无耐药现象。0.1μg/mL以上环丙沙星对粪肠球菌的药物敏感性影响仍不显著。GyrA基因分析发现耐药细菌GyrA基因耐药决定区核苷酸有突变,并且按核苷酸顺序推导出GyrA亚基第83或87位氨基酸也发生了改变。以上
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R965

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