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《华中农业大学》 2006年
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柑橘原生质体融合及体细胞杂种核质遗传研究

徐小勇  
【摘要】:原生质体融合技术能有效克服柑橘有性杂交不亲和、雌和/或雄性败育以及珠心胚干扰等问题,实现核DNA和胞质DNA重组,为柑橘遗传改良提供了一条新的途径。本研究旨在针对我国一些优良柑橘品种种子多的问题,拟采用“胞质体-原生质体”融合和非对称融合,将温州蜜柑控制雄性不育的胞质因子转入有籽品种中,以获得新的柑橘无核种质。此外,本研究对本实验室以前通过原生质体融合获得的4个组合的体细胞杂种植株进行了核质遗传分析。主要研究结果如下: 1.开展了柑橘胞质体分离的研究,建立了高效的柑橘胞质体分离体系。首先以柑橘胞质雄性不育材料-温州蜜柑国庆1号(Citrus unshiu)的胚性悬浮系为试材分离原生质体,再通过不连续的甘露醇-蔗糖梯度和超速离心方法分离胞质体;比较了不同的离心速度、离心时间、离心温度、梯度组分的体积和浓度对胞质体分离的影响,结果表明,转速为38000r/min,温度为25℃,离心20min,15%蔗糖浓度(悬浮原生质体的下层溶液)是分离胞质体最适宜的条件,可获得纯度为90%的胞质体;胞质体的平均直径为23.2μm;使用FDA染色,发现胞质体的活力在75-85%之间;采用低熔点琼脂糖包埋培养,48h后胞质体破裂死亡。 2.开展了柑橘“胞质体-原生质体”融合,获得了国庆1号(C. unshiu,cv. GuoqingNo. 1)+诺瓦橘柚(C. reticulata×C. paradisi)、国庆1号(C. unshiu,cv. Guoqing No. 1)+默科特橘橙(C. reticulata×C. sinensis)2个组合的再生愈伤组织和胚状体。前一组合得到的愈伤组织在诱导胚状体的2%甘油培养基上未见进一步生长和分化;从后一组合,挑出的44个单个小愈伤培养在2%甘油培养基上,有3个分化出胚状体。对后一组合再生的三个细胞系进行倍性和核质基因组分析,结果表明,再生的细胞系均为二倍体,核DNA来自默科特橘橙,而线粒体DNA来源于国庆1号。 3.研究了紫外线(UV)照射柑橘原生质体作为喂养层培养目标原生质体的效果,发现UV照射的原生质体作饲养层具有促进愈伤原生质体生长的作用,而对叶肉原生质体的生长无促进作用;研究了UV对柑橘原生质体DNA片段化的影响。结果表明,UV处理后的原生质体比未处理的原生质体发生较高的DNA片段化。 4.开展了UV处理供体的非对称融合研究,获得了国庆5号(C. unshiu,cv. Guoqing No. 5)+默科特橘橙(C. reticulata×C. sinensis)、国庆1号(C. unshiu,cv. Guoqing No. 1)+诺瓦橘柚(C. reticulata×C. paradise)、国庆1号(C. unshiu,cv. Guoqing No. 1)+锦橙(C. sinensis)共3个组合的再生愈伤组织和芽。其中前2个组合获得了愈伤组织,后一个组合再生了芽,采用FCM、RAPD、AFLP和CAPS对再生的四个芽系进行鉴定,结果表明,再生的芽系为二倍体、三倍体或四倍体的体
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S666

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 邢延豪;周延清;楚素霞;郭静佩;周鹏;范念斯;;CAPS标记技术及其应用进展[J];江苏农业科学;2011年05期
2 彭邵锋;陆佳;陈永忠;王瑞;陈隆升;马力;王湘南;;木本植物原生质体培养体系研究进展[J];中国农学通报;2013年01期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
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2 李玉珠;苜蓿与百脉根原生质体培养及体细胞杂交的研究[D];甘肃农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
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2 谢该生;椪柑原生质体培养过程中的氧化胁迫分析[D];华中农业大学;2011年
3 白生军;草地早熟禾原生质体的培养及影响其分裂生长的生理因素分析[D];甘肃农业大学;2011年
4 徐颖;梨矮化砧木预选指标及矮化性状相关分子标记的研究[D];延边大学;2010年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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10 刘继红,徐小勇,邓秀新;柑橘体细胞杂种及其核质遗传研究进展[J];农业生物技术学报;2004年03期
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 郝玉金;柑桔和苹果等果树种质资源的离体保存及其遗传变异[D];华中农业大学;2000年
2 蔡兴奎;原生质体融合创造抗青枯病的马铃薯新种质及其遗传分析[D];华中农业大学;2004年
3 付春华;原生质体融合创造柑橘新材料及其遗传分析[D];华中农业大学;2004年
4 程运江;柑橘体细胞胞质遗传及叶绿体SSR引物开发研究[D];华中农业大学;2004年
5 王敏琴;柴胡体细胞杂种的异源染色体消除及片段化研究[D];山东大学;2005年
6 向凤宁;小麦远缘体细胞杂交及体细胞杂种的遗传研究[D];山东大学;2003年
7 陈春丽;柑橘体细胞杂种细胞遗传学及抗CTV等基因对枳的FISH分析[D];华中农业大学;2005年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘强;高新学;刘铁山;张成华;董瑞;郭庆法;叶金才;张春庆;;SRAP技术在水稻品种鉴定和纯度检测中的应用研究[J];山东农业科学;2008年01期
2 陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技术体系的优化[J];山东农业科学;2008年05期
3 刘静;;AFLP分子标记的发展及应用[J];山东农业科学;2010年05期
4 霍雨猛;缪军;杨妍妍;刘冰江;张一卉;吴雄;何启伟;;洋葱SRAP-PCR体系的优化研究[J];山东农业科学;2011年04期
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7 聂振朋;温明霞;徐建国;李丽;罗君琴;何建;;439桔橙胚乳培养研究初报[J];安徽农学通报;2007年19期
8 黄磊;唐光绪;田东;何庆元;;新型分子标记的开发和利用[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年23期
9 邓军蓉;何坪华;;我国柑橘商品化处理的组织运作特点·弊端及对策[J];安徽农业科学;2006年11期
10 赵新亮;马强;;玉米SRAP反应体系的建立与优化[J];安徽农业科学;2006年15期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 胡威;张文;黄婷;邓子牛;;利用胚抢救技术获得枸橼杂交后代[A];园艺学文集5[C];2010年
2 史倩倩;王雁;周琳;;基于毛细管电泳技术牡丹的SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
3 于翠;刘春;明军;袁素霞;;安祖花SRAP-PCR反应体系的建立及优化[A];中国球根花卉研究进展2011[C];2011年
4 乐文全;魏建梅;韩继成;张海娥;郝宝锋;冉辛拓;;梨红色果皮性状基因的SRAP标记[A];梨科研与生产进展(五)[C];2011年
5 刘振;赵洋;杨培迪;成杨;杨阳;;茶树SRAP反应体系优化及引物筛选[A];科技创新 转型升级 做大做强湖南特色茶叶——湖南省茶叶学会2011年学术年会论文集[C];2011年
6 梁俊敏;宛琼;骆勇;马占鸿;;小麦条锈菌群体遗传结构研究进展[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
7 农向群;吴正铠;;丝状真菌原生质体的分离再生和融合[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第一卷)[C];1986年
8 孙振久;王松文;刘霞;;电场条件对甘蓝与萝卜原生质体融合效果的影响[A];21世纪作物科技与生产发展学术讨论会论文集[C];2002年
9 郭文武;邓秀新;;体细胞杂交与柑橘遗传改良[A];中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文集[C];2000年
10 刘继红;邓秀新;;原生质体融合与柑橘遗传改良[A];植物组织培养与脱毒快繁技术——全国植物组培、脱毒快繁及工厂化生产技术学术研讨会论文集[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 林荔辉;应用分子和常规技术通过籼粳交选育亲籼型水稻雄性不育系[D];福建农林大学;2010年
2 王发明;柚(citrus grandis Osbeck)单染色体AFLP分子标记体系及文库的建立[D];福建农林大学;2010年
3 侯钰荣;伊犁绢蒿生理生态适应性的研究[D];新疆农业大学;2010年
4 李秉玲;芍药属植物超低温保存花粉的差异表达蛋白质研究及花粉库的建立[D];北京林业大学;2010年
5 王俊峰;川西獐牙菜体细胞杂交及其环烯醚萜类化合物合成相关基因香叶醇-10羟化酶的克隆和功能验证[D];山东大学;2010年
6 曾兴权;小麦抗条锈病种质的鉴定及其抗性相关基因的差异表达和克隆[D];西北农林科技大学;2010年
7 崔法;高密度小麦遗传连锁图谱构建及产量相关性状QTL定位[D];山东农业大学;2011年
8 翁天均;基于45S rDNA-FISH与GISH分析的草莓属(Fragaria)野生种亲缘关系与系统分类研究[D];西南大学;2011年
9 张轲;利用三亲本复合杂交群体构建陆地棉遗传连锁图谱与纤维品质QTL定位[D];西南大学;2011年
10 孙宇涵;秋水仙素诱导银杏2n雄配子低得率的机理研究[D];北京林业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 罗杨;柑橘变异材料的遗传鉴定与品质分析[D];华中农业大学;2010年
2 李辉;柑橘新种质的创造及鉴定[D];华中农业大学;2010年
3 范锐;脐橙(Citrus sinensis Osbeck)果实采后商业贮藏中基因表达的芯片分析及候选基因的表达验证[D];华中农业大学;2010年
4 孙明伟;基于SRAP标记的部分百合种及品种的遗传关系及亲和性分析[D];华中农业大学;2010年
5 乔芬;柑橘衰退病和碎叶病新型脱毒方法的研究[D];华中农业大学;2010年
6 罗丽;柠檬形克勒克酵母(34-9)对柑橘意大利青霉抑菌机理的研究[D];华中农业大学;2010年
7 蒋诗媛;我国柑橘产业化中地理标志保护与发展法律问题研究[D];华中农业大学;2010年
8 郭一鸣;全球白菜型油菜遗传多样性分析[D];华中农业大学;2010年
9 房剑锋;利用2n卵创制无核甜柿新种质的研究[D];华中农业大学;2010年
10 吴茜;中国香菇自然种质遗传多样性SRAP和IGS2分析[D];华中农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙庆华;韩振海;;果树多倍体鉴定研究进展[J];山东农业科学;2008年02期
2 贺辉;贾春林;盛亦兵;陈本建;;草木樨愈伤组织的诱导及其原生质体的制备[J];山东农业科学;2008年04期
3 李超敏;韩梅;张良;陈锡时;;细胞固定化技术——海藻酸钠包埋法的研究进展[J];安徽农业科学;2006年07期
4 刘小平;;梨矮化性预选研究[J];安徽农业科学;2006年11期
5 赵江涛;李晓峰;李航;徐睿忞;;可溶性糖在高等植物代谢调节中的生理作用[J];安徽农业科学;2006年24期
6 胡选萍;;我国植物组织培养研究进展[J];安徽农业科学;2008年10期
7 王红霞;范雪晖;;芦荟原生质体的分离[J];安徽农业科学;2008年19期
8 冯雪;王彬;孙艳香;;百脉根谷胱甘肽硫转移酶基因的载体构建与检测[J];安徽农业科学;2011年29期
9 井春芝,王允栋;库尔勒香梨矮化中间砧的筛选试验初报[J];北方果树;2002年01期
10 刘延杰;秋子梨不同类型生长势与枝叶解剖构造的研究[J];北方园艺;2000年05期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 熊兴耀;苎麻体细胞杂交研究[D];湖南农业大学;2000年
2 金红;三种豆科牧草的原生质体培养及体细胞杂交[D];西北大学;2002年
3 潘增光;苹果原生质体培养再生及融合研究[D];华中农业大学;1998年
4 王孝宣;增强番茄果实颜色基因的精细定位及相关基因的差异表达[D];中国农业科学院;2004年
5 付春华;原生质体融合创造柑橘新材料及其遗传分析[D];华中农业大学;2004年
6 郭英华;生姜原生质体培养与体细胞变异[D];中国农业大学;2005年
7 向凤宁;小麦远缘体细胞杂交及体细胞杂种的遗传研究[D];山东大学;2003年
8 陈穗云;小麦与长穗偃麦草体细胞杂种后代的遗传特征及基因组分析[D];山东大学;2003年
9 张新忠;利用2n配子创新园艺作物种质的研究[D];沈阳农业大学;2002年
10 李付振;一个水稻早衰突变体pse(t)的遗传分析、定位及生理学研究[D];浙江大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 向素琼;利用染色体倍性技术培育长寿沙田柚与红江橙多倍体新种质的研究[D];西南农业大学;2002年
2 孙庆华;不同倍性苹果花芽细胞学的比较研究[D];中国农业大学;2003年
3 刘艳玲;柑桔体细胞杂种育性和柚瘪籽果实发育的研究[D];华中农业大学;2001年
4 霍静;锦橙(Citrus sinensis Osbeck cv.Jincheng)种子球蛋白基因启动子的克隆及在转基因烟草中的功能分析[D];西南师范大学;2004年
5 刘可慧;瘪籽沙田柚的获得及三倍体柑桔新种质创建研究[D];湖南农业大学;2004年
6 张改娜;三种豆科牧草的原生质体的培养及骆驼刺和鹰嘴紫云英的体细胞杂交[D];西北大学;2004年
7 安骥飞;苜蓿与百脉根细胞融合的研究[D];西南农业大学;2005年
8 曾少华;离体加倍创造柑橘多倍体种质及其细胞学和分子鉴定[D];华中农业大学;2005年
9 赵仲华;拟南芥开花时间调控基因FLX的精细定位及遗传途径的鉴定[D];山西大学;2006年
10 王玉玲;无核雪柑授粉受精及种胚败育的研究[D];福建农林大学;2006年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 卢倩;;植物转化受体研究进展[J];现代农业科技;2013年06期
2 张凌云;师尚礼;;苜蓿原生质体电融合适宜条件的筛选[J];草地学报;2013年04期
3 张金鹏;杨晶;韩玉珠;张广臣;;植物体细胞杂交的研究进展[J];北方园艺;2014年01期
4 赖杭桂;陈霞;李开棉;欧文军;叶建秋;庄南生;覃秋林;;木薯小孢子母细胞减数分裂观察及花粉加倍技术研究[J];热带作物学报;2013年05期
5 金灿;许雪;曹后男;宗成文;刘淼;;生长调节物质对梨极矮化突变体生长的影响[J];延边大学农学学报;2012年02期
6 于晓玲;阮孟斌;王树昌;;橡胶树原生质体的分离及红色荧光蛋白的瞬时表达研究[J];中国农学通报;2013年28期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈雪鹃;地被菊早花与抗旱育种及早花相关AFLP分子标记筛选[D];北京林业大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙源文;茄子枯萎病抗性遗传初步研究[D];中国农业科学院;2012年
2 李龙;水稻籽粒腹切的QTL分析和一个粒形基因的精细定位[D];中国农业科学院;2012年
3 柳海东;利用半冬性甘蓝型油菜提高甘蓝型春油菜杂种优势的研究[D];青海大学;2012年
4 金灿;生长调节物质对梨极矮化突变体生长的影响及GA20-氧化酶基因克隆[D];延边大学;2012年
5 何翎;水稻白叶枯病抗病基因xa5、Xa7、Xa23分子标记的辅助选择[D];广西大学;2012年
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7 刘家勇;68份国外甘蔗种质资源分子遗传多样性研究[D];中国农业科学院;2012年
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9 常苹;水榆花楸组培快繁体系建立的研究[D];南京林业大学;2013年
10 蒋琦;拟南芥FATB蛋白的亚细胞定位及其缺失对内质网和高尔基体的影响[D];西北农林科技大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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5 丁君,张国范,常亚青,宋坚,巩宁;流式细胞术(FCM)在贝类倍性检测中的应用[J];大连水产学院学报;2000年04期
6 黄粤,翟晓灵,李栅栅,夏光敏,陈惠民;单倍体小麦与羊草的属间体细胞杂交[J];西北植物学报;1999年04期
7 杨金玲,桂耀林,郭仲琛;白木千胚性愈伤组织长期继代培养中的分化能力及染色体稳定性研究[J];西北植物学报;2000年01期
8 陈穗云,夏光敏,陈惠民,冯素萍;小麦与高冰草(长穗偃麦草)体细胞杂种株系与其亲本幼苗抗盐性的比较[J];西北植物学报;2000年03期
9 莫永胜,李仕琼;我国植物性细胞工程研究进展[J];大自然探索;1992年02期
10 赖钟雄;微核技术及其在果树育种上的应用前景[J];福建果树;1998年01期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 郝玉金;柑桔和苹果等果树种质资源的离体保存及其遗传变异[D];华中农业大学;2000年
2 庞晓明;用分子标记研究柑橘属及其近缘属植物的亲缘关系和枳的遗传多样性[D];华中农业大学;2002年
3 邵建柱;苹果等果树种质资源的离体保存研究[D];华中农业大学;2003年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 连勇,刘富中,陈钰辉,宋燕,张松林,Darasinh Sihachakr;茄子体细胞杂种游离小孢子培养获得再生植株[J];园艺学报;2004年02期
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3 邓秀新,伊华林,李锋,郭文武,叶文明;以异源四倍体体细胞杂种为父本杂交培育三倍体柑桔植株的研究[J];Acta Botanica Sinica;1996年08期
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6 Iwao Oiyama;谢永红;;柑桔属和枳属间体细胞杂种的花粉在柑桔三倍体育种上的应用[J];西南园艺;1992年02期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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3 刘继红;程运江;徐小勇;邓秀新;;柑橘细胞工程研究进展[A];全国作物细胞工程与分子技术育种学术研讨会论文集[C];2003年
4 刘继红;邓秀新;;原生质体融合与柑橘遗传改良[A];植物组织培养与脱毒快繁技术——全国植物组培、脱毒快繁及工厂化生产技术学术研讨会论文集[C];2001年
5 王子成;邓秀新;;柑橘体细胞杂种离体培养及超低温保存后植株再生[A];中国植物学会七十周年年会论文摘要汇编(1933—2003)[C];2003年
6 连勇;刘富中;冯东昕;宋燕;陈钰辉;张松林;;原生质体融合再生茄子种间体细胞杂种[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
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中国重要报纸全文数据库 前8条
1 记者 樊晓燕龙华 通讯员 潘春芳;橘香溢中华[N];湖北日报;2007年
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3 刘曙甲 刘志伟;痴心向橘走四方[N];科技日报;2007年
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5 刘曙甲 王景刚 刘志伟;橘香中华春满园[N];科技日报;2006年
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7 晓华;细胞融合育种[N];山东科技报;2002年
8 李玉胜 刘敏;马铃薯专用型品种与脱毒种薯产业化项目通过验收[N];农民日报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 何礼;茄属种及其种间体细胞杂种的染色体特征分析[D];华中农业大学;2013年
2 陈琳;马铃薯体细胞杂种及其回交和自交后代遗传组分分析与青枯病抗性评价[D];华中农业大学;2013年
3 郭鲜蒲;马铃薯体细胞杂种及其回交后代的遗传稳定性分析[D];华中农业大学;2011年
4 程运江;柑橘体细胞胞质遗传及叶绿体SSR引物开发研究[D];华中农业大学;2004年
5 蔡兴奎;原生质体融合创造抗青枯病的马铃薯新种质及其遗传分析[D];华中农业大学;2004年
6 单雷;小麦耐盐体细胞杂种盐胁迫应答基因的分离、定位及其耐盐机理研究[D];山东大学;2005年
7 李菲;小麦/长穗偃麦草体细胞杂种渐渗系新种质的遗传基础研究[D];山东大学;2011年
8 陈春丽;柑橘体细胞杂种细胞遗传学及抗CTV等基因对枳的FISH分析[D];华中农业大学;2005年
9 周开兵;2种柑橘体细胞杂种砧木资源评价和穗砧互作机理的研究[D];华中农业大学;2004年
10 孙玉强;棉花原生质体培养和原生质体对称融合研究[D];华中农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 叶文宣;体细胞杂种的染色体组成鉴定和农艺性状调查[D];华中农业大学;2013年
2 王惠芹;以新开花的异源四倍体体细胞杂种为父本与二倍体杂交培育三倍体柑橘[D];华中农业大学;2010年
3 田伶俐;马铃薯体细胞杂种胞质遗传组成及其与青枯病抗性的关系[D];华中农业大学;2010年
4 汪晶;二倍体马铃薯原生质体融合创制抗青枯病的新种质[D];华中农业大学;2009年
5 杨瑰丽;柑橘体细胞杂种及其实生后代核基因组分析[D];华中农业大学;2003年
6 李映;马铃薯体细胞杂种的青枯病抗性鉴定[D];华中农业大学;2004年
7 宣俊杰;马铃薯体细胞杂种主要农艺性状及倍性研究[D];华中农业大学;2007年
8 田忠景;采用茎尖嫁接法获得柑桔体细胞融合体的研究[D];四川农业大学;2003年
9 刘霞;两种柑橘体细胞杂种砧木资源与主要砧木类型根系解剖结构的比较研究[D];华中农业大学;2007年
10 梁晓光;用体细胞杂交法创造甘薯组种间杂种的研究[D];中国农业大学;2003年
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