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《华中农业大学》 2006年
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柑橘速衰病毒的遗传多样性研究

张建坤  
【摘要】:由柑橘速衰病毒(Citrus tristeza virus,CTV)引发的柑桔速衰病是全世界柑桔生产中破坏力最强、经济意义最为重要的病害之一。它主要危害以酸橙作砧木的柑桔,也能引起葡萄柚和某些甜橙品种的茎陷和果实变小等症状。本研究应用RT-PCR、单链构象多态性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)、DNA测序和系统发育分析等方法,目的是要调查我国柑橘CTV感染的基本情况,比较不同分离物的序列特征,探索CTV的系统进化关系,最终为开发分子标记鉴定我国CTV株系提供理论指导。结果如下: 1.以随机采样的方式,从湖北、湖南和江西3省10县的柑橘产区收集242份温州蜜柑(Citrus unshiu Marc.)、橘(C.reticulata Blanc.)、甜橙(C.sinensis Osb.))和柚(C.grandis Osb.)样品。对PAS-ELISA法检测呈阳性的样品进行CTV的CP(Coating protein,CP)基因的RT-PCR扩增,结果来自14个样品采集地的120份样品感染了CTV,单个采样点的感染率为20.0%-71.4%,总感染率达49.6%,表明CTV在这些地区已经广泛分布。SSCP分析显示,120份CP基因的RT-PCR扩增产物共产生120种SSCP谱型,每一种谱型含有2-7条不等的单链DNA带,暗示这些样品采集地区存在广泛的CTV混合感染。 以CTAB-LiCl法制备的总RNA为模板,可以对柑橘进行CTV的RT-PCR检测。该法制备总RNA的过程简单,成本低廉。 2.以柑橘叶片总RNA为模板,用RT-PCR扩增CP基因,扩增产物经克隆与测序证实,来自湖南道县和江西崇义3份橘的实牛苗样品(HN、JX-1和JX-2)都感染了CTV。通过扩增产物克隆前和克隆后的PCR-SSCP分析,发现来自HN和JX-1的CP基因各自只含有1种独特的序列,来自JX-2的序列则含有2种主要的序列。这表明来自3份样品的CTV的CP基因不仅存在序列变异,而且样品JX-2的CTV群体可能因为混合感染而呈异质性。 通过双向测序和序列分析,4个CP基因序列都没有碱基插入、缺失或终止密码子插入,含有完整的翻译区。核苷酸序列比对分析表明,4个克隆之间的相似性为93%-98%;克隆HN-K与葡萄牙分离物28C、以色列茎陷分离物VT的相似性都达到98%;克隆JX-1-1与印度茎馅分离物Pune和Bangalore的相似性都在98%以上;克隆JX-2-7、JX-2-17与日本苗黄分离物NUagA和美国加利福尼亚严重茎陷分离物SY568的相似性也在97%-98%之间。4个克隆与佛罗里达速衰分离物T36、弱毒分离物T30和西班牙弱毒分离物T385的相似性仅有91%-93%。系统树分析显示,4个中国克隆分属3个不同的分支,每个分支由中国克隆和地理来源不同的茎陷或苗黄分离物组成。 3.以SSCP分析显示CTV混合感染程度较轻的江西省于都县的1份甜橙样品为材
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S436.66

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 王彩霞;柑橘衰退病毒的血清学特性分析及其诱导寄主差异表达基因的筛选[D];华中农业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 姜波;柑桔衰退病毒血清学及分子生物学特性研究[D];华中农业大学;2007年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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5 刘德兵;魏军亚;秦岭;范崇辉;李绍鹏;;转基因技术在果树抗病育种中的应用[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
6 杨莉;徐昌杰;陈昆松;;金柑遗传体系的建立及应用[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
7 段艳欣;李鼎立;邓秀新;郭文武;;柑橘胚性愈伤组织的褐化与转化[A];2008园艺学进展(第八辑)——中国园艺学会第八届青年学术讨论会暨现代园艺论坛论文集[C];2008年
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9 邓晓云;洪霓;胡红菊;王国平;;应用改进的RT-PCR检测砂梨ACLSV和ASGV病毒[A];第三届湖北湖南植保农药学术研讨会论文集[C];2004年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 Sagheer Atta;[D];西南大学;2011年
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3 王泽琼;引起葡萄皱木复合症的两种线形病毒的分子特性研究[D];华中农业大学;2011年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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2 乔芬;柑橘衰退病和碎叶病新型脱毒方法的研究[D];华中农业大学;2010年
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7 李文慧;库尔勒香梨苹果茎痘病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达[D];石河子大学;2010年
8 周俊飞;农杆菌介导转BnTR1基因灿稻技术体系研究[D];四川农业大学;2011年
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10 胡晶;变温热处理结合茎尖培养脱除沙梨潜隐病毒研究[D];华中农业大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宋震;周常勇;周彦;王雪峰;唐科志;;柑橘衰退病毒柚类分离株的分子鉴定[J];病毒学报;2006年04期
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中国博士学位论文全文数据库 前2条
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【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【二级参考文献】
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【相似文献】
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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2 JIXIANG WU;[D];浙江大学;2001年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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5 陈瑞庆;福建橄榄(Canarium album)遗传多态性上的研究[D];福建农林大学;2005年
6 刘成;梨抗黑星病基因的AFLP分子标记[D];中国农业大学;2005年
7 韩永亮;同源四倍体高粱与约翰逊草SSR分析及杂种优势多代利用研究[D];河北农业大学;2006年
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