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《华中农业大学》 2006年
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月季再生体系的建立及叶盘法转化月季‘萨蔓莎’的研究

李敬蕊  
【摘要】:月季以其花朵美丽、花色多样、香味浓郁、四季开花等深受人们的喜爱。月季在我国广泛栽培,是城市绿化的主要材料。作为世界四大鲜切花之一,月季有很高的商品价值。本试验以切花月季‘萨蔓莎’小叶片为外植体优化了其再生体系和遗传转化体系。同时以离体小叶片为外植体,建立了15个切花月季品种的直接器官发生的再生体系。其主要研究结果如下: 1.通过‘萨蔓莎’小叶片离体培养探讨暗培养时间和碳源种类对再生的影响,优化了通过器官发生途径诱导形成不定芽的再生体系。结果表明:月季小叶片外植体在诱导培养基(1/2MS+1.5mg/L TDZ+0.05mg/L NAA+10mg/L AgNO_3+3%Gluose+0.25%GEL)上黑暗培养15d,之后转入扩繁培养基(MS+0.5mg/LBA+0.004mg/L NAA+0.1mg/L GA_3)中光下培养,再生效果最好,在小叶片叶柄及主脉的切口处都可以再生不定芽。其不定芽诱导率最高可达到95.0%以上,其不定芽在扩繁培养基上培养4周后植株再生率达60.0%以上,平均再生枝数为2.0个/小叶片。 2.建立了15种月季切花品种叶片直接再生体系,比较了不同基因型和不同植物生长调节剂组合对月季再生的影响。研究结果表明:基因型是影响叶片直接再生的首要因素。在8种添加TDZ的培养基上,‘蒙特苏玛’的植株再生率最高,其不定芽诱导率和植株再生率最高分别为86.5%和50.0%,‘格伦娣·盖拉’再生芽率最低为5.7%。‘蝴蝶玫瑰’植株再生率最低为2.9%。基因型不同,再生所需最适植物生长调节剂组合不同。当诱导培养基中细胞分裂素(TDZ)与生长素(NAA)比值为10-30时,多数品种可获得最高不定芽诱导率。同时,取其中8个品种的小叶片为外植体,试验BA对诱导植物再生的影响,结果表明:尽管在诱导培养基中加入BA可以诱导月季不定芽的产生,但是最终没有再生成植株。 3.通过对GUS基因瞬时表达率及抗性芽率的分析,优化了以月季品种‘萨蔓莎’小叶片作为根癌农杆菌介导的转化的受体的遗传转化体系,结果表明:渗透处理是影响月季‘萨蔓莎’遗传转化成败的关键,用0.3mol/L的甘露醇高渗处理2h的小叶片GUS瞬间表达率最高可达50%。不用甘露醇处理的则完全检测不到GUS瞬间表达。另外,叶片的生理状态、共培养时间、侵染后的选择方式对转化效率都有一定的影响。最后利用优化好的转化条件侵染了近千张小叶片,直到目前为止,已获得了13个抗性芽。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S685.12

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