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《华中农业大学》 2005年
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球孢白僵菌对亚洲玉米螟毒力检测的研究

刘智辉  
【摘要】:白僵菌属(Beauveria vuillemin)属于半知菌类(Deuteromycotina)、丝孢纲(Hyphomycetes)、丛梗孢目、丛梗孢科、白僵菌属(Beauveria vuillemin)。是现在应用规模和前景仅次于苏云金芽孢杆菌的生物农药。在我国大规模应用主要是防治马尾松毛虫和玉米螟。 本研究以人工饲养的亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis(guenee))幼虫为供试虫,建立了球孢白僵菌的毒力生物测定的标准方法和程序。并通过检验其它方法与生物测定毒力的相关性,验证毒力生物测定的替代或者补充方式。 首先,测定了人工饲养的亚洲玉米螟幼虫的几个生理指标遗传稳定性,其雌雄比、化蛹率、雌蛹重、雄蛹重几个指标的RSD(%)值分别为3.2、4.7、3.1、2.2,遗传稳定。17株球孢白僵菌的1.0×10~7孢子/ml浓度的分生孢子悬液对人工饲养的亚洲玉米螟5d龄幼虫的最终致死率为76.67~96.67%。确定人工饲养的亚洲玉米螟幼虫遗传性状稳定,对球孢白僵菌中高度敏感,可以用来作为生物测定的标准试虫。 其次,从17个生产和保藏菌株中通过测定其产孢子能力、抗紫外能力、抗高温能力、生长速率、抗杀真菌药剂能力等指标。通过灰关联度分析筛选出SC-2作为标准菌株;应用不同培养基和培养条件培养该菌株,测定其产孢子能力;用不同的干燥和保藏措施处理所得到的菌粉,测定其孢子萌发率和毒力的变化,确定标准品的生产和保藏措施。 摸索各个生物测定条件对生物测定结果的影响,确定了生物测定标准程序中,供试虫的虫龄、样本数量、接种浓度、感染时间、感染湿度等要素,选择以5d龄幼虫为供试虫,接种5个十倍梯度的白僵菌分生孢子悬液,每个处理10头幼虫,3个重复,接种后第5天数死虫数,计算致死率,换算成校正死亡率,查表转化成致死几率值,用最小二乘法计算LC_(50),通过与标准菌株的LC_(50)的比值,计算每个菌株的效价。 通过重复测定几个菌株孢子粉样品还有6个厂家产品的测定,用生物化学方法对与毒力相关的胞外蛋白酶和胞外几丁质酶的活性进行测定,并检测酶活性与累积致死率和LT_(50)值的相关性,得出在两个酶的活性和对玉米螟的毒力的相关性非常低,不能作为毒力生物测定的替代甚至补充指标。但是通过对同一出发菌株的几株菌的两个酶活性和累积致死率的相关性分析,胞外蛋白酶与累积致死率的最大r~2可以达到0.95(6d),具有极高的相关性。说明在遗传关系很近的条件下,胞外蛋白酶作为毒力生物测定的补充指标具有相当的可靠性。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S482.3

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【引证文献】
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【同被引文献】
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