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《华中农业大学》 2007年
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多杀菌素高产菌株的诱变育种

徐晴雨  
【摘要】: 通过对多杀菌素产生菌(Saccharopolyspora Spinosa)Co329菌株进行分离复壮,获得一株遗传性能较为稳定的菌株Co329-21,以Co329-21为出发菌株进行紫外线诱变育种,获得比出发菌株Co329-21效价(25μg/mL)提高9.7%的菌株UV125,对UV125进行NTG诱变,获得比UV125效价(27μg/mL)提高8.6%的菌株N263,以N263为出发菌株进行了~(60)Coγ7射线诱变,得到比N263效价(302μg/mL)提高21.5%的菌株Co305。以菌株Co305为出发菌株,进行原生质体紫外诱变,得到一株发酵效价提高18.7%的菌株PU446(43μg/mL),通过对PU446进行链霉素筛选获得一株发酵效价提高11.4%的菌株S119(485μg/mL)。通过以上育种多杀菌素菌种发酵效价提高了91.7%。 以S119、PU131(试验室筛选,长势较好,发酵效价286μg/mL)为出发菌株,通过测定生长曲线,探索甘氨酸浓度和溶菌酶的酶解浓度、时间、温度对原生质体形成的影响,确定制备原生质体的最佳条件为:种子液中加入甘氨酸浓度0.4mg/mL、培养48小时,酶解浓度4mg/mL、酶解温度32℃、酶解时间90min。对4种再生培养基的比较,确定以改良高氏培养基为较优的再生培养基。通过原生质体灭活方式融合亲本S119、PUl31筛选得到一株分别比亲本菌株效价提高12.6%和90.9%的融合子R287菌株(54μg/mL)。传代试验表明菌株UV125、N263、C0325、PU446、S119和R287传代均比较稳定。 另外,对菌株R287摇瓶发酵过程中的还原糖、总糖、铵离子及可溶性磷的测定,为多杀菌素工业发酵提供参考指标。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S482.2

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