收藏本站
《华中农业大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

分子标记技术在红曲菌菌种鉴别中的应用

许璐  
【摘要】: 红曲菌(Monascus spp.)是我国重要的微生物资源,在我国已有上千年的使用历史,被广泛用于食品发酵剂、食品着色剂和中药配伍的生产。由于红曲菌在发酵过程中能产生多种具有生理活性的代谢产物:如红曲色素、Monacolin类物质、γ-氨基丁酸以及多种酶类,近年来,国内外关于红曲菌及其代谢产物的研究成为热点。但是,关于红曲菌的分类,特别是属以下种的分类鉴定仍然存在许多争议和混乱,这对于红曲菌的研究和应用是不利的。随着分子生物学技术的发展,分子标记技术作为传统分类鉴定方法的补充正逐步引入红曲菌菌种鉴别和亲缘关系研究中。 本研究以67株红曲菌为材料,从形态学、生物化学、分子生物学等方面探索了红曲菌菌种的鉴别方法,以期为红曲菌菌种鉴别和亲缘关系研究提供借鉴。主要研究结果如下: 1.从全国各地采集了24份样品,经分离纯化,获得53株红曲菌株;索要和购买得到14株红曲菌菌株作为参考菌株,共67株菌株。根据李钟庆等人的分类方法,通过观察菌落形态和显微特征,初步鉴定这些菌株中有39株安卡红曲菌(M.anka)、9株紫色红曲菌(M.purpureus)、7株丛毛红曲菌(M.pilosus)、4株巴克红曲菌(M.barkeri),另外,还有橙色红曲菌(M.aurantiacus)、发白红曲菌(M.albidus)、烟灰色红曲菌(M.fuliginosus)、红色红曲菌(M.ruber)、新月红曲菌(M.lunisporas)和阿根廷红曲菌(M.argentinensis)各1株,共10个种。另有2株(M-3和M-26)归属关系待定。 2.在形态学鉴定基础上,从上述67株菌株中选出51株(14株参考菌株和37株分离菌株)代表性菌株进行了酯酶同工酶分析。结果表明,不同种间的酯酶同工酶电泳带型具有多样性,种内菌株间带型基本一致,与形态鉴定结果基本吻合。聚类分析结果显示,在相似水平为70%处,51个菌株分为4个群:橙色红曲菌、发白红曲菌、烟色红曲菌、巴克红曲菌和丛毛红曲菌为一群;紫色红曲菌、安卡红曲菌、红色红曲菌为一群;新月红曲菌和阿根廷红曲菌各代表一群。 3.从14条ISSR引物中筛选出7条引物(808~#、810~#、811~#、834~#、835~#、841~#、842~#)对上述51株红曲菌进行PCR扩增。7条引物共扩增出108条带,其中97.2%呈多态性,相似系数范围为0.48~1.00。在相似水平为70%处,51个菌株分为4个群:发白红曲菌、烟色红曲菌、巴克红曲菌和丛毛红曲菌为一群;橙色红曲菌、紫色红曲菌、安卡红曲菌、红色红曲菌为一群;新月红曲菌和阿根廷红曲菌各为一群。 4.从30对SRAP引物中筛选出8对引物(mel-em2、mel-em4、mel-em5、me2-em4、me3-em2、me3-em6、me4-em4、me5-em6)对51株红曲菌进行扩增。8对引物共扩增出183条带,其中94.5%呈多态性,相似系数范围为0.46~1.00。聚类分析结果与ISSR分析结果类似,在相似水平为70%处,51个菌株分为4个群:发白红曲菌、烟色红曲菌、巴克红曲菌和丛毛红曲菌为一群;橙色红曲菌、紫色红曲菌、安卡红曲菌、红色红曲菌为一群;新月红曲菌和阿根廷红曲菌各为一群。 5.对51个菌株进行IGS扩增。结果显示,所有供试菌株均未能扩增出IGS2片段,但均扩增出清晰稳定的IGS1片段,并且具有很好的多态性,相似系数范围为0.42~1.00。聚类分析结果显示,在相似水平为70%处,51个菌株分为3个群:紫色红曲菌OUT2011、OUT2014和分离菌株M-8、M-10、M-17、M-18、M-19、M-20、M-21为一群;新月红曲菌CBS113675为一群;其它菌株为一群。 研究结果显示,ISSR、SRAP和IGS标记技术均能在一定程度上区分不同的红曲菌种,可以作为红曲菌菌种鉴别的辅助手段。并且亲缘关系分析结果有助于鉴别疑难菌株。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q93-3

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 黄颖颖;杨成龙;;分子标记技术在红曲霉分类鉴定中的研究进展[J];福建轻纺;2013年09期
2 蔡丽;易响;陈福生;吴佳佳;;传统米酒酒曲的评价及根霉的分类鉴定[J];中国酿造;2010年12期
3 吕金芝;张凤英;刘金梅;涂瑾;;高活性生淀粉糖化酶菌株F7的鉴定及其酶学性质的研究[J];中国调味品;2013年08期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 李琦;红色红曲菌交替氧化酶基因Mraox1克隆与功能初步研究[D];华中农业大学;2010年
2 徐晓波;产生GABA酵母菌资源多样性和分子系统学研究[D];浙江师范大学;2010年
3 任道援;红曲菌的分离鉴定及酯酶特性研究[D];四川农业大学;2010年
4 杨勇;方便甜酒酿的关键技术的研究[D];江西农业大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐忠东,肖家军;同工酶研究及其应用进展[J];安徽教育学院学报;2000年03期
2 俞艳玲,邢旺兴,陈士景;7种红曲霉的扫描电镜观察[J];浙江中医学院学报;2005年01期
3 孙庆磊,梁月荣,丁兆堂,陆建良;AFLP分子标记及其在茶树遗传育种中的应用[J];茶叶;2004年04期
4 贾建航,刘国振,李莉云,刘振岳;酯酶同工酶IEF电泳及香菇品种鉴别[J];河北农业大学学报;1997年01期
5 段会军,姬惜珠,张彩英,李兴红,郭小敏,马峙英;几种瓜类枯萎病菌专化型的AFLP分析[J];河北农业大学学报;2005年05期
6 秦旭升,刘学敏,于荣利;运用PCR-RFLP标记检测南瓜疫病菌[J];东北农业大学学报;2003年04期
7 李莹,文景芝,刘春来;大豆疫霉ISSR-PCR反应体系的建立[J];东北农业大学学报;2005年02期
8 宓鹤鸣,邢旺兴,程荣珍,贺祥,吴玉田;随机扩增多态性DNA技术在中药红曲基原菌系统分类中的应用[J];第二军医大学学报;2000年10期
9 王彪,陈体强;核酸、蛋白质电泳及其相关技术在食用真菌学上的应用(综述)[J];福建农业学报;2004年02期
10 孙洪,程静,詹克慧,张相武,杨艳会;ISSR标记技术及其在作物遗传育种中的应用[J];分子植物育种;2005年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 潘欣;四川省松树散斑壳菌的种类及其rRNA基因ITS区的PCR、克隆和序列分析[D];四川农业大学;2004年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邓艳美;叶绍辉;;牛血清LDH同工酶遗传多样性及其在遗传育种中的应用[J];山东农业科学;2006年01期
2 刘强;高新学;刘铁山;张成华;董瑞;郭庆法;叶金才;张春庆;;SRAP技术在水稻品种鉴定和纯度检测中的应用研究[J];山东农业科学;2008年01期
3 李瑾;宫志远;任鹏飞;任海霞;曲玲;于淑芳;;山东省35个黑灰色平菇菌株的酯酶同工酶分析[J];山东农业科学;2008年04期
4 张庆华;赵新海;钟丽娟;徐冲;;酯酶同工酶分析鉴别生产用平菇菌种真实性研究[J];山东农业科学;2009年06期
5 霍雨猛;缪军;杨妍妍;刘冰江;张一卉;吴雄;何启伟;;洋葱SRAP-PCR体系的优化研究[J];山东农业科学;2011年04期
6 戴杨;温丽伟;高克祥;何邦令;吴海燕;刘畅;;生防真菌球毛壳ND35的RAPD特异序列的标记转换[J];山东农业科学;2011年10期
7 孔小卫,于敏,查向东;安徽蜜环菌酯酶同工酶的研究[J];安徽大学学报(自然科学版);2004年02期
8 罗海燕;陈业渊;;ISSR分子标记及其应用[J];安徽农学通报;2008年19期
9 吕岩桢;王雷;张兴旺;郭传友;;山核桃ISSR反应体系的优化[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年07期
10 朱美霞;李英芝;王建书;侯英梅;孟艳玲;;利用SSR方法鉴定棉花品种纯度[J];安徽农业科学;2005年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王永清;付燕;杨芩;罗楠;邓群仙;严娟;;41份枇杷属植物的ISSR分析[A];第五届全国枇杷学术研讨会论文(摘要)集[C];2011年
2 张林;成海钟;周玉珍;娄晓鸣;吕文涛;张文婧;;62个朱顶红品种ISSR遗传多样性分析[A];中国球根花卉研究进展2011[C];2011年
3 杜广祖;李正跃;陈斌;;我国大陆自然保护区虫生真菌物种多样性研究概述[A];云南省昆虫学会2011年学术年会论文集[C];2011年
4 殷凤鸣;陈权才;何雪香;何立平;吕尊德;郭桂林;李祖文;;白僵菌优良菌株筛选及其酯酶同工酶测定[A];中国虫生真菌研究与应用[C];1991年
5 郭闯;韩晓磊;盖建军;邹宏海;陈焕根;龚培培;;江苏省2个日本沼虾群体的遗传多样性ISSR分析[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(上册)[C];2010年
6 潘俊松;王刚;李效尊;吴爱忠;蔡润;;黄瓜SRAP遗传连锁图的构建及侧枝性状的基因定位[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
7 任羽;杨光穗;尹俊梅;;石斛种质资源遗传多样性的SRAP分析[A];2007年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会论文集[C];2007年
8 罗淑萍;孙晋科;曾斌;李疆;;野扁桃ISSR—PCR反应体系的优化[A];第五届全国干果生产、科研进展学术研讨会论文集[C];2007年
9 李亚利;陈书霞;孟焕文;程智慧;柴丹丹;;与黄瓜果皮绿色性状相关的SRAP分子标记[A];2008园艺学进展(第八辑)——中国园艺学会第八届青年学术讨论会暨现代园艺论坛论文集[C];2008年
10 王燕;翟欣;朱长志;龚义勤;曾琦;柳李旺;;茄子主要品种指纹图谱的分子标记分析[A];2008园艺学进展(第八辑)——中国园艺学会第八届青年学术讨论会暨现代园艺论坛论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 何小勇;翅荚木种源遗传多样性及其抗低温胁迫能力研究[D];中南林业科技大学;2007年
2 杜萍;中国野生毛木耳遗传多样性研究[D];北京林业大学;2011年
3 刘华晶;基于不同分子标记的黑龙江省野生黑木耳遗传多样性分析[D];东北林业大学;2011年
4 李志勇;扁蓿豆种质资源遗传多样性机理的研究[D];中国农业科学院;2011年
5 高苇;我国黄瓜棒孢叶斑病的病原学及诊断技术的研究[D];中国农业科学院;2011年
6 付伟;罗汉果二倍体及四倍体遗传变异研究[D];北京协和医学院;2011年
7 陈美霞;红麻遗传连锁图谱构建及重要性状基因定位与SCAR标记的开发[D];福建农林大学;2011年
8 陈美元;双孢蘑菇基质降解能力退化分子机理的初步研究[D];福建农林大学;2011年
9 陈辉;杜氏盐藻耐盐渗透调节与Ca~(2+)介导的渗透信号传导[D];华南理工大学;2011年
10 王璐;农杆菌介导转化及原生质体融合法选育红曲菌Monacolin K高产株[D];江南大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李琦;红色红曲菌交替氧化酶基因Mraox1克隆与功能初步研究[D];华中农业大学;2010年
2 徐璟煜;白灵菇和阿魏菇交配型A座位结构的初步研究[D];华中农业大学;2010年
3 吴茜;中国香菇自然种质遗传多样性SRAP和IGS2分析[D];华中农业大学;2010年
4 高伟;四倍体棉种的遗传多样性分析[D];华中农业大学;2010年
5 杨勇;青藏高原一年生野生大麦的农艺性状及品质性状分析[D];华中农业大学;2010年
6 刘辉;红曲霉发酵提高γ-氨基丁酸含量的研究[D];安徽工程大学;2010年
7 阚清华;酱油多菌种发酵关键技术研究[D];安徽工程大学;2010年
8 冯志成;酱油多菌种发酵风味物质的形成与应用研究[D];安徽工程大学;2010年
9 李伟波;核桃(Juglans regia)SRAP遗传连锁图谱的构建和QTL定位[D];山东农业大学;2010年
10 江涛;黄淮麦区85个小麦品种(系)遗传多样性的SRAP标记分析和农艺性状的变异特征[D];山东农业大学;2009年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐忠东,肖家军;同工酶研究及其应用进展[J];安徽教育学院学报;2000年03期
2 陈剑山;郑服丛;;ITS序列分析在真菌分类鉴定中的应用[J];安徽农业科学;2007年13期
3 白玉;;DNA分子标记技术及其应用[J];安徽农业科学;2007年24期
4 魏培莲,周立平,毛建卫;高产降胆固醇活性物质的红曲霉菌种选育研究[J];氨基酸和生物资源;2002年03期
5 孙中涛,闫艳春,姚良同,田林茂;R-工程菌表达产物酯酶B1的纯化及其特性[J];安全与环境学报;2003年06期
6 丁红梅;葛尔宁;王泽时;;红曲菌株的RAPD多态性分析[J];浙江中医药大学学报;2007年05期
7 章汝平,何立芳;用后道味精母液提取谷氨酸后的废液生产r-氨基丁酸[J];长沙电力学院学报(自然科学版);1998年04期
8 贾建航,刘国振,李莉云,刘振岳;酯酶同工酶IEF电泳及香菇品种鉴别[J];河北农业大学学报;1997年01期
9 宓鹤鸣,邢旺兴,程荣珍,贺祥,吴玉田;随机扩增多态性DNA技术在中药红曲基原菌系统分类中的应用[J];第二军医大学学报;2000年10期
10 林捷;林智敏;宋亚娜;黄月英;陈军;;尖刀镰刀孢病原菌ITS和5.8SrDNA的PCR鉴定[J];福建农业学报;2007年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 冯作山;优良葡萄酒酵母的选育及发酵性能研究[D];新疆农业大学;2000年
2 孙佰申;红曲霉发酵及某些生理活性物质的研究[D];浙江工业大学;2004年
3 郑和斌;核rDNA ITS序列在侧耳属分子分类学上的应用[D];华中农业大学;2005年
4 王汝毅;根癌农杆菌介导红曲霉转化库的构建及转化子性质研究[D];华中农业大学;2005年
5 王乐乐;华根霉(Rhizopus chinensis)脂肪酶的基因克隆、表达,纯化和酶学性质研究[D];江南大学;2008年
6 高强;海洋芽孢杆菌酯酶BSE-1的分离纯化和生化性质研究[D];青岛科技大学;2008年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 邓开野;林佩芳;黎尔纳;;甜酒曲中产糖化酶根霉菌株紫外诱变选育[J];食品科学;2012年07期
2 蔡柳;熊兴耀;曾璐;苏小军;;产糖化酶菌种的纯化诱变及复合酒曲制作工艺的研究[J];食品与发酵科技;2012年06期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 薛英丽;红曲霉多糖降解酶的研究[D];四川农业大学;2011年
2 杨欢欢;高产Monacolin K红曲菌株的复合诱变及固态发酵法研究[D];武汉工业学院;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 林英任;松落针病的主要病原——松针散斑壳的研究[J];安徽农学院学报;1987年04期
2 许早时,李珂,林英任,谢云胜;黄山杜鹃上的两个散斑壳属新种[J];安徽农业大学学报;2001年04期
3 黄勃,樊美珍,李增智;两种常见拟青霉的rRNA基因ITS区及5.8SrRNA基因的克隆测序[J];安徽农业大学学报;2002年01期
4 唐晓庆,唐燕平,李增智;球孢白僵菌菌种退化及其对马尾松毛虫防治的影响[J];安徽农业大学学报;1996年03期
5 唐晓庆,黄勃,樊美珍,李增智,李华;球孢白僵菌菌落局变分离株的酯酶同工酶分析[J];安徽农业大学学报;1996年03期
6 刘小勇,田素忠,秦国夫,沈瑞祥;提取植物和微生物DNA的SDS-CTAB改进法[J];北京林业大学学报;1997年03期
7 段会军,姬惜珠,张彩英,李兴红,郭小敏,马峙英;几种瓜类枯萎病菌专化型的AFLP分析[J];河北农业大学学报;2005年05期
8 秦旭升,刘学敏,于荣利;运用PCR-RFLP标记检测南瓜疫病菌[J];东北农业大学学报;2003年04期
9 何秉章,邓兴林,杨殿清,刘桂琴,岳玉萍,刘成玉;樟子松落针病的病原菌和防治的研究[J];东北林学院学报;1985年02期
10 原戈,贾云,齐乐贤,孙军;红松落针病流行规律及最佳防治期的确定[J];东北林业大学学报;1988年06期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 刘金姐;李瑟组镰孢霉电泳核型及其核糖体DNA(rDNA)ITS区的RFLP研究[D];南京农业大学;2000年
2 许早时;我国散斑壳属及皮下盘菌属若干种的研究[D];安徽农业大学;2002年
3 李淑梅;鸭疫里默氏杆菌和鸭源致病性大肠杆菌及鸭沙门氏菌的RAPD研究[D];四川农业大学;2003年
4 曹雅男;龙胆DNA指纹图谱分析及质量相关性研究[D];东北农业大学;2004年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李钟庆,张茂良;红曲与红曲菌[J];中华医学信息导报;1997年08期
2 明金兰,朱会琴,张莉,陶上乘;红曲菌保健作用的研究[J];宁夏医学杂志;1997年06期
3 李钟庆,张茂良;红曲与红曲菌[J];中华医学信息导报;1997年07期
4 李钟庆,张茂良;红曲与红曲菌[J];中华医学信息导报;1997年06期
5 李钟庆,张茂良;红曲与红曲菌[J];中华医学信息导报;1997年09期
6 郭芳,郭东川,李钟庆;红曲菌的色素与产生菌[J];微生物学杂志;2004年06期
7 赖卫华,许杨,熊勇华,李燕萍;应用抑制性消减杂交法筛选与红曲菌产桔霉素相关的基因[J];食品科学;2005年03期
8 赖卫华,许杨,熊勇华;红曲菌cDNA消减文库的构建[J];菌物系统;2003年03期
9 王伯华;许杨;李燕萍;;红曲菌转化系统的研究进展[J];安徽农业科学;2010年29期
10 付桂明;许杨;李燕萍;吴酬飞;;产毒红曲菌中生物合成桔霉素基因——pksCT基因的保守性分析[J];食品科学;2008年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杜明松;张清辉;王剑英;施巧琴;吴松刚;;绿微康脂肪酶在浓香型白酒中的应用[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
2 刘爱英;孙伟;邹晓;梁宗琦;;提高红曲霉Monascus spp.发酵产品Monacolin K含量的研究[A];首届药用真菌产业发展暨学术研讨会论文集[C];2005年
3 盖栋梁;邹晓;刘爱英;赵杰宏;;紫红曲菌的诱变育种研究[A];中国菌物学会第二届青年菌物学术讨论会论文集[C];2006年
4 郭芳;李锺庆;;四种红麴菌各自固有的分子生物学和生物化学特性的补充[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
5 袁国芳;;红曲之功能基因体研发[A];中国第六届海峡两岸菌物学学术研讨会论文集[C];2004年
6 刘龙涛;张文高;何煜;孟宪忠;郑广娟;殷镜海;蔚青;王显刚;王大智;韩宝刚;卢宁;吴玉生;;超微粉碎对降脂红曲降脂、抗氧化、血管内皮保护作用的影响[A];第四次全国中西医结合养生学与康复医学学术研讨会论文集[C];2004年
7 沃兴德;程东庆;卢德赵;窦晓兵;杨贞;沃立科;;利用微生物转化技术从姜黄素中获取高效调脂新型化合物的研究[A];第四届全国血脂分析与临床学术研讨会暨第九届全国脂蛋白学术会议论文汇编[C];2008年
8 张文高;刘龙涛;何煜;孟宪忠;郑广娟;殷镜海;蔚青;王显刚;王大智;韩宝刚;卢宁;吴玉生;;降脂红曲超微粉碎对高脂血症疗效影响的临床研究——中药超微粉碎对疗效影响的研究之二[A];中国生物医学工程学会第六次会员代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2004年
9 秦人伟;王异静;董哲;王薇青;;红曲防腐剂——红曲红色素[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
10 张文高;吴玉生;刘龙涛;何煜;孟宪忠;曹炳振;;微粉中药临床疗效对比研究初步报告——水蛭微粉治疗早期脑梗死、降脂红曲微粉治疗高脂血症临床疗效对比研究[A];海峡两岸中西医结合学术研讨会论文集[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前6条
1 ;三大能力决定营销成败[N];医药经济报;2005年
2 ;细菌吃中药,心脑血管疾病的曙光[N];大众科技报;2007年
3 天宇;苗家博士谱天曲[N];中国航天报;2004年
4 张银霞;中医药为血管健康护航[N];人民政协报;2004年
5 卞敬洙;韩国mimi冰激凌甜透北京[N];市场报;2006年
6 苑宇;打造中国航天生物的健康旗舰[N];中国航天报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 许赣荣;红曲桔霉素的检测及发酵控制技术[D];江南大学;2005年
2 黄志兵;1、红曲菌两种新的荧光代谢产物的研究 2、脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金免疫层析试纸条的研制[D];南昌大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴芳彤;高产洛伐他汀红曲菌的分离鉴定及其红曲发酵条件的优化[D];福建农林大学;2014年
2 游向荣;红曲色素中桔霉素抑制条件的探讨[D];福建农林大学;2006年
3 许璐;分子标记技术在红曲菌菌种鉴别中的应用[D];华中农业大学;2007年
4 赵颖;红曲菌产GABA相关基因的初步研究[D];华中农业大学;2007年
5 徐驰;农杆菌介导的红曲菌M-7转化库中部分突变子的特性研究[D];华中农业大学;2008年
6 万成;1.红曲菌M22pksCT基因缺失株的构建 2.红色红曲菌蛋白质组学研究[D];南昌大学;2009年
7 万里;红色红曲菌M-7紫外诱变突变子特征分析[D];华中农业大学;2008年
8 杨莎;红色红曲菌mrr基因的克隆与功能初步研究[D];华中农业大学;2009年
9 朱效刚;红曲功能性成分分析及发酵法生产的研究[D];江南大学;2005年
10 涂追;橙色红曲菌(AS3.4384)SOD基因的克隆与功能分析[D];南昌大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026