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《华中农业大学》 2007年
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伪狂犬病毒基因组在潜伏感染中的时空表达

刘俊磊  
【摘要】: 伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)是一种具有神经嗜性的α型疱疹病毒,可感染猪、牛、羊等多种家畜及野生动物。疫苗免疫只能阻止动物发病和临床症状的产生,但不能阻止病毒在宿主体内建立潜伏感染。如果淘汰全部PRV潜伏感染猪,需要付出巨大的经济和社会代价,不符合我国当前的国情。所以伪狂犬病毒的潜伏感染已成为预防和根除伪狂犬病的重大障碍。本试验以PRV在猪体内建立潜伏感染为基础,从DNA、RNA等不同层次水平上检测了IE180、EP0、LAT等PRV潜伏感染相关基因在潜伏感染的建立、维持和激活过程中的时空表达情况,确定影响PRV潜伏感染的关键基因,为剖析PRV潜伏感染的机理和伪狂犬病的根除计划提供实验数据和理论依据。 本试验购买30日龄PRV阴性健康仔猪,进行首免和加强免疫,用ELISA和中和试验检测仔猪血清抗体水平,当血清抗体水平达到1:2或1:2以上时,我们分别通过滴鼻和颈部肌肉注射各2 mL病毒液(PRV gG~-/LacZ~+,TCID_(50)=10~(-6.5)/0.1mL)对仔猪进行攻毒。攻毒后1周内每天上午和下午分别采集攻毒猪的鼻拭子和测量体温,通过PCR方法检测PRV的糖蛋白gD基因,发现攻毒4天后猪不再向外界排毒;体温测量结果表明,攻毒后猪只体温迅速升高,在2天左右达到峰值,而后慢慢降低;每隔一周,我们剖杀试验感染猪,采集血清和三叉神经节、脑、嗅球等神经组织及心肌、肺、肝脏、脾脏等脏器,于-80℃冷冻保存。攻毒45天后,我们按2mg/kg体重的剂量通过颈部肌肉注射地塞米松,连续注射5天,以激活PRV的潜伏感染。病毒激活后我们依然每天采集鼻拭子和测量体温,其结果与攻毒后排毒情况和体温变化结果基本一致。 在实验室条件下,我们提取冻存组织的DNA,通过gD-PCR方法检测病毒在猪体内的组织分布。验证了神经组织,尤其是三叉神经节是病毒建立潜伏感染的最主要位置。本实验中,检出率最高的器官为三叉神经节和脑干,均为100%,其次为嗅球、大脑,小脑等神经组织,此外淋巴结和脾脏等淋巴器官的检出率也较高,心、肝、肾等脏器的检出率较低。 我们知道,PRV基因组的转录是级联式的,即立即早期基因、早期基因和晚期基因是按照时间的先后顺序依次表达,后一期基因的表达依赖于上一期基因的表达。我们选取IE180、EP0和LAT等PRV潜伏感染相关基因作为研究对象,在RNA水平上检测了各基因的时空表达表达情况。检测结果发现,在潜伏感染过程中,除了LAT的大量存在和表达外,IE180基因的表达也是持续存在的;而EP0基因一旦在激活中晚期基因的表达后就立即停止自身的表达;晚期糖蛋白基因gD的表达依赖于IE180基因和EP0基因的共同作用。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S855

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