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《华中农业大学》 2007年
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棉花杂交种与亲本间DNA胞嘧啶甲基化及其基因差异表达分析

赵云雷  
【摘要】: 利用杂种优势可以提高作物产量,节约土地资源,并创造了巨大的经济和社会效益,是遗传学应用于实践最成功的范例之一。对杂种优势机理的研究已将近一个世纪,然而在许多方面仍然是一个谜。棉花是世界上最重要的纺织作物,在世界经济、政治、以及社会事务中起了很重要的作用。杂交棉在中国和印度已经得到广泛的商业化利用,并研究了许多年。然而到目前为止,关于棉花杂种优势的分子方面的研究报道却很少。本研究以不同优势棉花杂交组合为材料,系统研究了它们在营养生长、产量及品质性状以及根系性状上的杂种优势,然后进一步分析了不同发育阶段棉花杂交种和亲本间的DNA甲基化差异以及基因表达差异,最后将基因差异表达模式与产量性状的表现及杂种优势进行了相关分析,分别从表观遗传调控和功能基因转录水平对杂种优势的分子机理进行了探讨。其实验结果和主要结论如下: 1.以同一母本与两个不同的父本杂交获得两个杂交组合,经田间比较试验,结果表明,组合石远345×CRI41是一个优势比较高的杂交组合,其优势不仅表现在营养生长和一些产量相关性状上,而且还表现在根系性状上;而组合石远345×SGK321是一个在地上部的优势相对比较低的组合,但是在某些根系性状上却存在比较高的杂种优势。 2.为探讨DNA甲基化与杂种优势的关系,采用甲基化敏感的扩增多态性技术(MSAP),以杂交组合石远345×CRI41和石远345×SGK321为材料,分析了花期阶段这两个杂交组合中杂交种和双亲中的胞嘧啶甲基化水平。结果表明棉花基因组中至少有20%的CCGG位点发生胞嘧啶甲基化。 3.依据特定位点的胞嘧啶甲基化从亲本向杂交种的遗传及其变异,我们比较了杂交种与亲本之间的胞嘧啶甲基化模式。研究结果表明杂交种与其双亲相比,发生了广泛的胞嘧啶甲基化变化,这种变化包括超甲基化和去甲基化同时还包括甲基化类型的潜在转变(如从外部胞嘧啶甲基化到内部胞嘧啶甲基化的转变或从内部胞嘧啶甲基化到外部胞嘧啶甲基化的转变);对于表现出杂交种相对于亲本的甲基化水平降低的类型,在高优势组合石远345/CRI41(Hybrid A)中的去甲基化位点数高于在低优势组合石远345/SGK321(Hybrid B)中的去甲基化位点数。尽管有一类表现为在杂交种中的甲基化水平升高,但是这些超甲基化位点仅仅占两个杂交组合中总多态性位点数的很少一部分。 4.通过对三个亲本系和两个杂交种在苗期阶段和花期阶段的5′-CCGG位点的胞嘧啶甲基化进行总体分析,我们发现花期阶段比苗期阶段有更多的位点发生去甲基化。说明棉花中的胞嘧啶甲基化具有组织特异性。 5.存在于低拷贝基因组区域的胞嘧啶甲基化变化可以被Southern杂交证实。对杂交种相对于亲本表现甲基化变化的位点进行测序表明同功能已知的基因同源,包括转录调控、信号识别、富含亮氨酸重复、钙离子通道、类PDR的ABC转移、 同工酶、脱羧酶、磷酸酶以及ATP酶等。 6.以高优势组合石远345×CRI41和低优势组合石远345×SGK321的叶片组织为材料,用mRNA差异显示方法分析了两个杂交组合的杂交种与其亲本在苗期阶段、蕾期阶段、花期阶段和铃期阶段的基因表达差异,结果表明两个棉花杂交种与其亲本间在四个阶段均存在显著的基因表达差异,我们既观察到量上的表达差异也观察到质上的表达差异,而主要的基因表达差异发生在质的水平,包括:(ⅰ)双亲共沉默型,即该条带在双亲都有,而F_1中没有(BPnF_1);(ⅱ)单亲表达沉默型,即该条带仅出现亲本之一,而在另一亲本和F_1中没有出现(UPnF_1);(ⅲ)杂种特异表达型,即该条带仅在F_1中出现,在双亲中均不出现(UF_1nP);(ⅳ)单亲表达一致型,即该条带在双亲之一和杂种中出现,而在另一亲本中不出现(UPF_1)。 7.进一步分析了质的差异表达模式在不同阶段的变化,结果表明差异模式的数量在不同阶段是变化的,而花期阶段的差异模式的数量要相对高于其它阶段,暗示了花期阶段的基因差异表达在杂交种的产量形成和优势表现上起了关键的作用。同时在花期阶段,UF_1nP和UPF_1模式(分别代表杂种特异表达或超显性表达和显性表达)在高优势杂交种中的数量要比低优势杂交种高得多,这表明在花期阶段更高水平的这两种模式可能与杂种优势具有正向的相关关系。 8.最后以一套双列杂交组合(24个F_1,10个亲本)在盛花期的叶片为材料,用差异显示法进一步分析了四种质的差异模式的数量。以差异模式的数量为变量,与棉花5个产量性状(子棉产量、皮棉产量、铃数、铃重和衣分)的杂种表现、杂种优势进行相关分析的结果表明:单亲基因表达一致模式(UPF_1)与杂种产量性状中单位面积铃数呈显著正相关,但与杂种优势的相关却未达到显著水平,说明此模式有利于产量形成,但对杂种优势贡献不大;而杂种特异表达模式(UF_1nP)在差异表达模式中所占比例处于中等,但与产量性状杂种优势(皮棉产量优势)达到显著正相关,这在某种程度上与基于超显性假说的预测相一致;另外单亲表达沉默模式(UPnF_1)与多数产量性状杂种优势呈负相关,并且与单位面积铃数相关达显著水平,暗示了亲本基因在杂交种中的抑制不利于杂交种表现杂种优势。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S562

【引证文献】
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3 马建辉;芽黄标记棉花光敏雄性不育系的选育及花药发育机理研究[D];西北农林科技大学;2013年
4 张永山;外源基因整合及其对棉花受体亲本的影响[D];华中农业大学;2007年
5 赵云雷;棉花杂交种与亲本间DNA胞嘧啶甲基化及其基因差异表达分析[D];华中农业大学;2007年
6 朱云国;棉花转GST基因恢复系恢复力提高机理的研究[D];浙江大学;2005年
7 李成奇;棉花衣分等产量性状的遗传、QTL定位及不同衣分材料纤维初始发育的比较研究[D];南京农业大学;2007年
8 朱四元;陆地棉无蜜腺性状突变体的遗传特性及生理学研究[D];湖南农业大学;2007年
9 武耀廷;棉花产量性状杂种优势的遗传基础研究[D];南京农业大学;2001年
10 陈冬妍;陆地棉核雄性不育基因的分子标记定位及相关基因的克隆和功能分析[D];南京农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 娄善伟;密度调控对棉花光合生产、养分吸收及其棉田小气候的影响[D];新疆农业大学;2009年
2 黄殿成;我国棉花杂交种产业化现状与模式研究[D];中国农业大学;2004年
3 邓茳明;棉花对高温逆境耐性的生理生化基础研究[D];湖南农业大学;2010年
4 冯方剑;棉花不同时期抗旱机制的研究及抗旱相关性状遗传分析[D];新疆农业大学;2011年
5 唐钱虎;不同叶型棉花群体光合特性研究[D];石河子大学;2009年
6 王香河;棉花留叶枝对产量的超补偿效应研究[D];中国农业科学院;2003年
7 范玉朋;Mono基因向棉花基因组的导入及其对棉花发育的影响[D];华中农业大学;2005年
8 王笑言;不同棉花品种资源光合特性及类别的初步研究[D];石河子大学;2006年
9 代培红;棉花细胞质雄性不育系线粒体基因组细菌人工染色体文库的构建及其鉴定[D];新疆农业大学;2007年
10 王晓辉;杂交棉的发展历史及应用前景研究[D];中国农业科学院;2012年
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