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《华中农业大学》 2008年
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胸膜肺炎放线杆菌JL03株的全基因组测序与flp操纵子的结构分析

李良军  
【摘要】: 猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种猪的传染性呼吸道疾病。该病分布广泛,遍布世界各地,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。APP血清型众多,目前已经发现有15种血清型,各个国家和地区有不同的流行血清型,我国主要流行1、2、3和7型。由于不同血清型之间的交叉保护力较低,给对该病的预防控制带来了极大的困难。 传统的全菌灭活疫苗和亚单位疫苗只能对同源血清型菌株感染产生保护力,而不能对异源血清型菌株的感染提供保护,因此全菌灭活疫苗和亚单位疫苗的适用范围有限,不能被广泛应用。但自然感染或试验感染能够诱导抗异源血清型菌株的感染,因此弱毒活疫苗也许是弥补当前疫苗缺点的一种可行方法。要开发合理有效的弱毒活疫苗需要对APP的整个遗传背景有充分的了解,同时需要在APP中进一步寻找和研究潜在的毒力因子。 1.胸膜肺炎放线杆菌JL03株基因组测序及初步拼接 目前全基因组测序技术已经成熟,在此时开展对APP的全基因组测序能对APP的基础及应用研究产生广泛的影响。由于血清3型APP菌株是我国的流行血清型,因此测序菌株选取从国内临床分离的血清3型菌株JL03。这为研究我国流行菌株的致病发病机理及PCP的预防控制提供基本资料。通过测序和初步的拼接,所测序列被拼接成186个重叠群,总有效测序碱基18,471,205 bp,达到8.03倍基因组覆盖率,为进一步填补基因组空缺及对基因组进行生物信息学分析奠定了基础。 2.胸膜肺炎放线杆菌flp操纵子的结构分析及序列比较 在伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)和杜克雷嗜血杆菌(Haemophilus ducreyi)中,flp操纵子与细菌的黏附和毒力相关。同时伴放线放线杆菌、杜克雷嗜血杆菌和胸膜肺炎放线杆菌同为巴氏杆菌科中的病原菌。基于这个背景,对APP中的flp操纵子的结构和功能展开了相关研究。 通过对APP标准1型4074株flp操纵子的分析,在APP中flp操纵子有15个基因,并包含有完整的启动子和终止子。通过对APP标准1型菌株4074,标准5型菌株L20和临床分离血清3型菌株JL03的flp操纵子序列进行比较分析,发现JL03株flp操纵子5′端有约3.7kb的缺失,并且缺失包含flp操纵子的启动子区域。RT-PCR实验结果显示JL03菌株flp操纵子不能转录,而4074株flp操纵子可以转录。对实验室保存的所有标准血清型1-15(不含14型)和临床分离3型菌株HB0504,LZ-03和GDSB的PCR实验结果显示这些菌株的flp操纵子不包含有类似JL03菌株的缺失。透射电镜实验结果显示,具有完整flp操纵子的4074株能产生Flp菌毛,而不具有完整flp操纵子的JL03株不能产生Flp菌毛。 3.胸膜肺炎放线杆菌血清1型4074株tadA基因缺失突变株构建 目前对APP的Flp菌毛是否与APP的毒力相关还不清楚。因此本研究以能产生菌毛的4074株为亲本菌,使用同源重组技术缺失flp操纵子中的重要功能基因tadA。构建了重组自杀载体pBⅡSK(+)LRscm和pEMOC2LR,并以这两个质粒分别构建了标准1型4074株的单交换重组菌株TadAS1和TadAS2,为进一步筛选tadA基因缺失菌株及对flp操纵子的功能研究奠定了基础。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S852.61

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 师丽敏;胸膜肺炎放线杆菌体内诱导抗原的筛选与鉴定[D];华中农业大学;2010年
2 赵静静;巴斯德杆菌科细菌复制温敏型质粒的构建及初步应用[D];华中农业大学;2011年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前4条
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘建杰;猪传染性胸膜肺炎新型基因工程类毒素菌苗的研究[D];华中农业大学;2004年
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4 黄红亮;猪传染性胸膜肺炎鉴别诊断方法和胸膜肺炎放线杆菌外毒素单克隆抗体研究[D];华中农业大学;2005年
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6 邵美丽;猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗的研究[D];东北农业大学;2006年
7 刘军发;胸膜肺炎放线杆菌PCR定向突变系统的初步建立及胸膜肺炎放线杆菌OmlA-ELISA检测方法的建立[D];华中农业大学;2005年
8 雷连成;猪胸膜肺炎放线杆菌差减基因文库构建及免疫应答相关基因筛选[D];吉林大学;2007年
9 林荔雯;胸膜肺炎放线杆菌△apxIC/△apxIIC双基因缺失株的构建及其生物学特性和免疫原性的研究[D];华中农业大学;2007年
10 段丽丽;模拟体内应激因素对胸膜肺炎放线杆菌重要毒力基因表达影响的研究[D];四川农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 师丽敏;胸膜肺炎放线杆菌体内诱导抗原的筛选与鉴定[D];华中农业大学;2010年
2 郭丽琼;胸膜肺炎放线杆菌RTX毒素与宿主细胞相互作用的初步研究[D];华中农业大学;2010年
3 刘源;猪胸膜肺炎放线杆菌双组分调控系统ΔnarQ/narP突变株构建及功能研究[D];华中农业大学;2010年
4 李志远;杂交盘羊传染性胸膜肺炎支原体的分离和鉴定[D];石河子大学;2010年
5 刘波;山羊支原体山羊肺炎亚种的分离鉴定及膜蛋白抗体间接血凝检测方法的建立[D];内蒙古农业大学;2011年
6 龚雨恒;嵌合Hps外膜蛋白P2基因的APP缺失突变株△apxIC/ompP2的构建及其生物学特性研究[D];四川农业大学;2011年
7 谢文浩;三株猪胸膜肺炎放线杆菌apx基因缺失株生物学特性和免疫原性研究[D];四川农业大学;2011年
8 彭娟;猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及其核酸疫苗的初步研究[D];四川农业大学;2011年
9 赵静静;巴斯德杆菌科细菌复制温敏型质粒的构建及初步应用[D];华中农业大学;2011年
10 张仁良;副猪嗜血杆菌,猪传染性胸膜肺炎放线杆菌和猪链球菌2型三重PCR方法的建立与应用[D];南京农业大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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3 陈凡,何启盖,陈焕春,刘正飞;猪胸膜肺炎放线杆菌血清型研究进展[J];动物医学进展;2004年01期
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7 白淑民;猪传染性胸膜肺炎病的防治研究进展[J];甘肃畜牧兽医;1999年05期
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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4 许勇;张海英;郭绍贵;宫国义;;西瓜基因组学研究与全基因组测序计划[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
5 林峰;曾爱平;杨恩;林海燕;郑昌华;陈弘;李桦;李旭阳;郁明素;杨宁敏;金大智;余光创;伯晓晨;文思远;王升启;;WLL株博卡病毒(Bocavirus)基因组测序及生物信息学分析(包含小儿博卡病毒(Bocavirus)感染的临床与实验研究)[A];2006(第三届)江浙沪儿科学术会议暨浙江省儿科学术年会论文汇编[C];2006年
6 戚亭;崔尚金;张超范;;两株猪细小病毒分离株的分子特征分析[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
7 戚亭;崔尚金;张超范;;两株猪细小病毒分离株的分子特征分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
8 林峰;曾爱平;杨恩;林海燕;郑昌华;陈弘;李桦;李旭阳;郁明素;杨宁敏;金大智;余光创;伯晓晨;文思远;王升启;;WLL株博卡病毒(Bocavirus)基因组测序及生物信息学分析[A];浙江省中西医结合学会儿科专业委员会第十次学术年会暨省级继续教育学习班论文汇编[C];2007年
9 孙明;喻子牛;陈守文;刘子铎;阮丽芳;李林;;蜡状芽胞杆菌群基因组和比较基因组研究[A];首届全国微生物基因组学学术研讨会会程与论文摘要集[C];2006年
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中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 谭大跃 实习生 黄军 钟春艳;切叶蚁基因组测序与分析有新发现[N];深圳特区报;2011年
2 记者 贾少强 通讯员 逄莎莎;基因组测序癌症领域屡获进展[N];深圳商报;2011年
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8 冯卫东;脑癌细胞系全基因组测序完成[N];科技日报;2010年
9 记者 马芳 通讯员 蒋婷燕;华大百余基因组测序项目近半完成[N];南方日报;2010年
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1 王怡倩;深海热液区嗜热菌噬菌体D6E的分子特征及GVE2与宿主的蛋白质互作研究[D];厦门大学;2009年
2 徐卓菲;胸膜肺炎放线杆菌和猪瘟病毒的基因组测序与比较基因组学研究[D];华中农业大学;2008年
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7 马玉玲;猪链球菌2型烈性及溶原性噬菌体的分离与鉴定[D];南京农业大学;2007年
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9 陈相永;大丽轮枝菌不同毒力菌株全基因组测序及重测序分析[D];中国农业科学院;2012年
10 贝为成;猪胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ基因工程突变株构建及其生物学特性研究[D];华中农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李良军;胸膜肺炎放线杆菌JL03株的全基因组测序与flp操纵子的结构分析[D];华中农业大学;2008年
2 汤文菊;新一代基因组测序的概率统计模型[D];景德镇陶瓷学院;2010年
3 胡子业;一株属于候选门OP10的纯培养菌株GSoil348的全基因组测序研究[D];复旦大学;2010年
4 王剑峰;Paenibacillus mucilaginosus KNP414全基因组测序及分析[D];浙江理工大学;2011年
5 常月红;胸膜肺炎放线杆菌菌影(Ghost)的制备及其免疫效力评价[D];东北农业大学;2008年
6 陈建华;猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及其APXⅣA基因的PCR检测[D];四川农业大学;2005年
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8 商霖;胸膜肺炎放线杆菌萘啶酸抗性菌株的选育和信号标签突变株的构建[D];华中农业大学;2007年
9 云孟克;APP1型基因组表达文库的构建及对小鼠的免疫保护作用研究[D];内蒙古农业大学;2008年
10 杜爱庆;猪胸膜肺炎放线杆菌溶血毒素的克隆表达及表达产物对小白鼠的免疫保护性研究[D];山东农业大学;2008年
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