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农杆菌介导的板栗疫病菌的转化技术研究

黄浩  
【摘要】:本论文建立了农杆菌介导的板栗疫病菌的转化技术(Agrobactirium tumfaciencemediated-transformant,ATMT),构建了板栗疫病菌T-DNA插入突变体库,并对插入体库进行初步的质量评价。获得如下结果: 对农杆菌介导T-DNA插入突变转化板栗疫病菌的技术条件进行了优化。确定以培养20天的板栗疫病菌分生孢子(10~8/ml)为受体,共培养温度为23℃的条件为适宜的转化体系进行板栗疫病菌的遗传转化。采用此技术,本研究已获得235个转化子。 根据T-DNA上的潮霉素磷酸转移酶基因序列设计引物,应用PCR技术对获得的转化子进行了鉴定。任意选取10个菌株PDA上继代培养6代,结果发现各子代均能在含潮霉素35ug/ml的PDA上正常生长,而出发菌株7-6不能生长,表明T-DNA标记转化子在遗传上是稳定的。转化子的菌丝扩展速度与出发菌株没有显著的差异。 自235个转化子中筛选出3个产孢缺陷型菌株,它们在生长速度和菌落形态上与出发菌株7-6存在明显的差异。


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