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《华中农业大学》 2010年
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细菌介导的重组伪狂犬病毒(PRV)载体的构建及转运哺乳动物细胞的方法研究

蒋思婧  
【摘要】: 伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)属于疱疹病毒科的α-疱疹病毒亚科,其宿主范围很广,能有效感染多种哺乳动物和一些禽类,引起伪狂犬病,但不感染人和高级灵长类,猪是其自然宿主。伪狂犬病是危害全球养猪业的主要传染病之一,如何预防和治疗伪狂犬病是研究伪狂犬病病毒的首要目的;此外,伪狂犬病病毒还被作为研究疱疹病毒生物学的模式系统,分析病毒的入侵、病毒粒子的包装和胞外分泌以及神经入侵等机制,PRV还作为“活”的追踪剂,被用于各种神经通路的研究。 PRV为双链DNA病毒,基因组约为150 kb,在非必需基因区能容纳大的外源DNA片段插入;此外,该病毒还具有高效感染神经细胞并在神经细胞中潜伏的能力,因此PRV适合作为疫苗和基因治疗载体。作为载体,PRV在疫苗生产、基因和肿瘤治疗等方面已有一些成功的尝试,但是,利用哺乳动物细胞内同源重组的方法构建重组PRV病毒是一项繁琐的工作,疱疹病毒基因组BAC克隆的出现极大地简化了重组PRV病毒的构建方法,为发展高效的重组疱疹病毒载体构建技术奠定了基础。 本研究以PRV-BAC载体pBecker2为基础,建立了利用交配辅助遗传整合克隆(MAGIC)技术构建重组PRV病毒载体和不依赖转染的、利用大肠杆菌感染介导的PRV-BAC DNA转入动物细胞获得重组病毒粒子的方法,具体研究内容如下: 1.表达限制性内切酶Ⅰ-SceⅠ的大肠杆菌DH10B-IS2的构建 构建打靶质粒pML294C,将pML294C中约6 kb的umuC:araC-ParaBAD-Ⅰ-SceⅠ-FRT-npt-FRT片段酶切下来,电转化已诱导Red-gam重组酶表达的大肠杆菌DH10B(pML300)。经细胞内同源重组得到araC-ParaBAD-Ⅰ-SceⅠ-FRT-npt-FRT插入染色体umuC基因中的重组大肠杆菌DH10B-ISK。将pCP20质粒转化大肠杆菌DH10B-ISK,温度诱导Flp重组酶表达,筛选得到npt基因被敲除的kans大肠杆菌DH10B-IS2,并验证了该菌株表达的Ⅰ-SceⅠ内切酶的功能。 2.受体载体pBecker2-KH的构建 将kanr基因打靶盒式结构(H1-Ⅰ-SceⅠ-kanr-Ⅰ-SceⅠ-H2)经同源重组插入pBecker2的TK基因中,得到受体载体pBecker2-KH;进一步通过限制性图谱分析、序列分析和Southern印迹分析,证明重组质粒pBecker2-KH的结构是正确的。将pBecker2-KH转染PK-15细胞,获得了有感染能力的PRV病毒vBecker2-KH。 3.通过MAGIC方法构建重组伪狂犬病病毒载体 将含供体质粒pRTRA的供体菌DH10β和受体菌DH10B-IS2 (pBecker2-KH、pML300)按比例混合,进行接合实验;用添加了Amp(100μg/ml)、Cam(12.5μg/ml)和Ara(0.2% w/v)的LB固体平板培养;用引物F5和Rsv40进行菌落PCR筛选重组克隆。PCR结果表明这些随机挑选的克隆中均含重组质粒pBecker2-red。进一步通过限制性图谱分析、序列分析和Southern印迹分析,证明重组质粒pBecker2-red的结构是正确的。 将pBecker2-red转染PK-15细胞,产生的细胞蚀斑呈现红色荧光;从细胞中收获了有感染能力的PRV病毒vBecker2-red。病毒一步生长曲线显示重组病毒vBecker2-red和vBecker2-KH与亲本vBecker2的体外增殖特征一致。 将PRRSV的ORF5通过MAGIC方法克隆至PRV BAC载体上,得到重组病毒载体pBecker2-O5,经转染后获得相应的重组病毒vBecker2-O5。Western印迹检测表明融合了His标签的PRRSV ORF5蛋白在PK-15细胞中实现了表达。 4. MAGIC方法构建重组伪狂犬病病毒载体的效率分析 构建质粒pRThGA,该质粒与pRTRA供体质粒不同的是:在两个同源臂之间仅克隆了gfp表达盒式结构,没有串联Ampr基因作为筛选标记。以pRThGA作为供体质粒,进行接合实验,然后用含Cam和Ara的LB固体平板培养;用引物F5和Rsv40进行菌落PCR,48个克隆中,有43个扩增得到了-1.7 kb的DNA片段,与gfp的表达盒式结构的大小一致,表明这些克隆含有重组质粒pBecker2-gfp;阳性率为89.4±8.5%。 将pBecker2-gfp转染PK-15细胞,产生的细胞蚀斑呈现绿色荧光;从细胞中收获了有感染能力的PRV病毒vBecker2-gfp。Western印迹检测表明融合了His标签的绿荧光蛋白在PK-15细胞中实现了表达。 5.感染性大肠杆菌转运PRV-BAC进入哺乳动物细胞的能力 质粒pGBQinv-hly克隆有Yersinia pseudotuberculosis入侵素基因(inv)和Listeria monocytogenes的李斯特溶菌素LLO基因(hly)。将质粒pGBQinv-hly分别转化大肠杆菌DH10B (pBecker2)、DH10B (pBecker2-KH)和DH10B (pBecker2-red)获得了感染性大肠杆菌DH10B-pBGih1、DH10B-pBGih2和DH10B-pBGih3,用这3株大肠杆菌分别感染PK-15细胞,从中都获得了PRV病毒粒子;病毒滴度分析表明这三株细菌转运BAC DNA的效率相似。感染性大肠杆菌也将重组PRV-BAC载体pBecker2-O5转运至PK-15细胞内,获得了相应的重组病毒。用DH10B-pBGihl分别感染PK-15、IBRS-2、Hela和Vero细胞,前三种细胞均会发生病变,而Vero细胞无病变出现。 6.感染性大肠杆菌细胞感染条件的研究 其最佳感染条件为:DH10B-pBGih1感染IBRS-2和Hela细胞的最佳时间均是60min,在60-150 min的范围内,被感染细胞中释放的病毒滴度差异不大;而细菌对IBRS-2和Hela细胞最佳的感染剂量分别为900 MOI和600 MOI;在300-3000之间,IBRS-2细胞中释放的PRV病毒量接近,而MOI在600-3000之间时,Hela细胞中释放的PRV病毒滴度也无显著差异。 7.感染性大肠杆菌小鼠感染的研究 将DH10B-pBGih1按1×109CFU的接种量、通过肌肉或腹腔注射BALB/c鼠,以vBecker2和pBecker2为对照,DH10B-pBGih1感染后,在小鼠的主要器官,如脾脏、肝脏和脑组织的匀浆液中均没有检测到PRV病毒的存在。DH10B-pBGih1免疫小鼠后,也不能诱发小鼠的免疫应答,小鼠不能抵御强毒的攻击,这表明感染性大肠杆菌不能有效的将PRV-BAC DNA转运至小鼠的体细胞中。 综上所述,本研究建立了基于PRV-BAC的交配辅助遗传整合克隆系统,使用该系统构建了几种PRV重组病毒载体;还建立了通过大肠杆菌将PRV-BAC基因组DNA直接转运至哺乳动物细胞的技术;这两种技术结合使用,使获得重组病毒的时间缩短至7天,为PRV载体在疫苗生产、基因和肿瘤治疗以及神经通路研究等领域的广泛应用奠定了基础。该方法也适用于构建其他BAC化的疱疹病毒载体以及将BAC DNA有效转运至哺乳动物细胞内,为疱疹病毒的遗传修饰和重组工程研究也提供了技术支撑。
【学位授予单位】:华中农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q78

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 方六荣,陈焕春,肖少波,张辉,牛传双;表达绿色荧光蛋白突变体的重组伪狂犬病毒的构建及其增殖特性[J];生物化学与生物物理学报;2002年06期
2 琚春梅,陈焕春,樊惠英,刘正飞,曹胜波;猪2型圆环病毒ORF1与ORF2基因和伪狂犬病毒基因的重组与表达的研究[J];生物工程学报;2005年03期
3 江云波,方六荣,肖少波,张辉,陈焕春;表达猪繁殖与呼吸综合征病毒修饰型GP5m蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其在小鼠的免疫反应[J];生物工程学报;2005年06期
4 姜焱,侯玉峰,陈溥言;伪狂犬病病毒上海株(PRV-SH)gE~-/gI~-/GFP~+缺失株的构建[J];微生物学报;2003年01期
5 赵武;肖少波;方六荣;江云波;宋云峰;严琳;余晓岚;陈焕春;;共表达与牛疱疹病毒1型VP22融合的猪繁殖与呼吸综合征病毒E及M蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性观察[J];畜牧兽医学报;2006年04期
6 张辉;方六荣;赵骞;薛念波;江云波;肖少波;陈焕春;;伪狂犬病毒UL14基因缺失突变株的构建及其生物学特性研究[J];畜牧兽医学报;2007年04期
7 陈陆,郭万柱,徐志文,徐静,王小玉;伪狂犬病基因缺失疫苗株(SA215)某些生物学特性研究[J];中国预防兽医学报;2000年S1期
8 田志军,仇华吉,倪健强,周艳君,王云峰,童光志;伪狂犬病病毒gE/TK基因缺失突变株的构建[J];中国预防兽医学报;2004年03期
9 彭金美;王瑜;田志军;周艳君;陈瑾;安同庆;童光志;;带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究[J];中国预防兽医学报;2009年01期
10 琚春梅;陈焕春;郗鑫;刘正飞;曹胜波;;表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定[J];中国农业科学;2006年08期
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1 何启盖;猪伪狂犬病基因缺失疫苗研究[D];华中农业大学;2000年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 连京华,秦卓明,黄波;鸡传染性支气管炎研究进展[J];山东农业科学;2000年01期
2 钱凤芹,刘长梅,任红梅,李爱芹,庄文忠;鸡新城疫病毒山东分离株F蛋白基因的克隆与鉴定[J];山东农业科学;2001年03期
3 东野传现;史玉颖;黄中利;刘玉山;亓丽红;傅剑;;“禽喘康颗粒冲剂”对鸡人工感染新城疫病毒临床效果的研究[J];山东农业科学;2007年02期
4 李子剑;李云龙;陈苏;艾武;宋敏训;李玉峰;;鸭肠炎病毒US2基因的序列测定与分析[J];山东农业科学;2008年03期
5 蔺芳;尹双辉;尚佑军;刘艳红;刘湘涛;;建立多重PCR方法快速鉴别猪伪狂犬疫苗毒和野毒(英文)[J];Animal Husbandry and Feed Science;2009年02期
6 李祥辉;黄大鹏;黄玉兰;;鸡抗小鹅瘟病毒IgY提取方法的比较试验[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年23期
7 张小飞,潘孝成,汪秀娟,赵瑞宏,蒋书东;绩溪县浩寨兔病毒性出血症的诊断[J];安徽农业科学;2002年02期
8 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡传染性法氏囊病病毒冻干保护剂热稳定性研究[J];安徽农业科学;2004年01期
9 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡新城疫病毒耐热冻干保护剂的研究[J];安徽农业科学;2004年02期
10 赵坤,张慧辉,郭东升;猪繁殖和呼吸综合征组织灭活苗的研制[J];安徽农业科学;2005年07期
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1 庄金秋;梅建国;沈志强;;赤羽病病毒检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 庄金秋;梅建国;沈志强;;犬瘟热病毒实验室检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 蒋再学;陈征兵;林文;余邵华;竺薇;张晓明;罗满林;;仔猪伪狂犬PCR鉴定及病毒分离[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 陈宗艳;朱英奇;李传峰;李露;付玉志;王超;刘光清;;新发鸭源呼肠孤病毒(TH11株)的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
5 王珊;刘冰;李德朋;孙远;马勇;田秀丽;宋宇;王承宇;张乃生;;马蹄香治疗犬细小病毒性肠炎的疗效观察[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
6 程晶;荫硕焱;盖新娜;郭鑫;杨汉春;;2006—2008年我国部分地区规模化猪场PRV血清流行病学调查[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
7 赵东升;盖新娜;孙栋;郭鑫;杨汉春;;猪脑心肌炎灭活疫苗的制备及小鼠免疫研究[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
8 方忠意;崔保安;;动物基因工程疫苗研究进展[A];新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会论文集[C];2010年
9 曾政;任远志;叶昭辉;凌洪权;杨泽林;熊仲良;;重庆市2009年犬狂犬病检测及流行病学调查[A];重庆微生物学会第九届会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2009年
10 薛传华;何林;赵志模;;朱砂叶螨β-actin基因cDNA片段的克隆及实时荧光定量PCR方法的建立[A];庆祝重庆市植物保护学会成立10周年暨植保科技论坛论文集[C];2007年
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1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 赵鹏;猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体选择压下的变异[D];山东农业大学;2010年
3 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
4 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
5 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 黄馨;端粒缩短影响原发性高血压及其并发症的发生[D];北京协和医学院;2010年
7 张琪;KLT对中脑神经系统疾病的影响及KLT、NDV、SW联合抗肿瘤作用机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
8 熊义;IRES调控α-干扰素的抗FMDV研究[D];武汉大学;2009年
9 孙亚妮;免疫组织化学技术在鸡三种病毒性肿瘤病鉴别诊断中的应用[D];山东农业大学;2011年
10 邱玉玉;A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备和不同亚群禽白血病病毒共感染相互影响的研究[D];山东农业大学;2011年
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1 许媛媛;鸭瘟的动态病理学研究和鸭CD4的克隆[D];华中农业大学;2010年
2 李爽;鸭源禽呼肠孤病毒感染雏鸭的免疫病理学研究[D];华中农业大学;2010年
3 何永龙;猪伪狂犬病、细小病毒病和乙型脑炎三联灭活疫苗的研制[D];华中农业大学;2010年
4 徐珊珊;重组杆状病毒介导的高致病性猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2010年
5 肖犟;PRRSV对断奶仔猪生产性能和免疫力相关指标的影响[D];华中农业大学;2010年
6 胡智斌;湖北省高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)试用报告[D];华中农业大学;2010年
7 许莹;H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究[D];南京医科大学;2010年
8 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
9 史平玲;猪FcγRⅢ介导PRRSV抗体依赖增强作用研究[D];郑州大学;2010年
10 巩艳艳;抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的变异[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
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1 陈焕春,周复春,方六荣,何启盖,吴斌,洪文洲;伪狂犬病病毒鄂A株TK~-/gG~-/LacZ~+突变株的构建[J];病毒学报;2001年01期
2 曹胜波,陈焕春,肖少波,赵俊龙,吕建强,钱平;猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组克隆与序列分析[J];病毒学报;2002年02期
3 范伟兴,张雪莲,赵宏坤,陈溥言;猪伪狂犬病毒鲁A株TK基因的序列测定及其结构功能与进化分析[J];病毒学报;2002年03期
4 吕建强,陈焕春,赵俊龙,方六荣,何启盖,熊符;表达猪细小病毒VP_2基因的重组伪狂犬病毒的构建及其生物学特征研究[J];病毒学报;2004年02期
5 方六荣,肖少波,江云波,牛传双,张辉,陈焕春;表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5的重组伪狂犬病毒TK~-/gG~-/GP5~+的构建及其生物学特性初步探讨[J];病毒学报;2004年03期
6 李海燕,于康震,辛晓光,李雁冰,蔡雪辉,杨焕良,毕英佐,王自振;部分省市猪群猪流感的血清学调查及猪流感病毒的分离与鉴定[J];动物医学进展;2003年03期
7 刘蓬勃;抗体依赖的病毒感染增强作用[J];国外医学.流行病学传染病学分册;2000年01期
8 李海燕,于康震,辛晓光,杨焕良,毕英佐;猪流感的世界流行及公共卫生[J];黑龙江畜牧兽医;2002年12期
9 曹胜波,陈焕春,肖少波,何启盖,徐引弟,刘军发;猪环状病毒2型的PCR检测方法的建立及应用[J];华中农业大学学报;2001年01期
10 方六荣,陈焕春,肖少波,王革非,马相如;伪狂犬病病毒gG基因缺失通用转移载体的构建[J];华中农业大学学报;2001年04期
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1 ;哺乳动物转座因子系统创立[J];山东中医药大学学报;2005年05期
2 张定校,樊斌,刘榜,李奎;RNA干涉(RNAi)技术应用于哺乳动物细胞的研究策略[J];遗传;2005年05期
3 邬刚;吴英松;董文其;陈白虹;李明;;HCV亚基因复制子支持细胞的筛选[J];热带医学杂志;2006年05期
4 程通;杨炳春;许辰煜;张涛;杜海莲;王颖彬;张军;夏宁邵;;应用离心方法提高杆状病毒对哺乳动物细胞转导实验效率[J];生物工程学报;2007年03期
5 王鹏雁;陈创夫;郭志儒;;哺乳动物中RNA干扰研究进展[J];动物医学进展;2008年05期
6 郭建强;陈爱珺;姚立红;刘晓宇;付金奇;徐鹏卫;张智清;;稳定表达甲型流感病毒血凝素蛋白的哺乳动物细胞系的建立[J];中国生物制品学杂志;2011年04期
7 张一鸣,任贵方,王申,朱既明;adw与adr亚型乙型肝炎表面抗原基因在哺乳动物细胞中的表达[J];病毒学报;1985年03期
8 高罗以;应用哺乳动物细胞同源重组的基因置换[J];国际遗传学杂志;1988年05期
9 徐香;孙文种;丁广治;魏康;;DNA探针的高效标记和哺乳动物细胞转化子的检测[J];军事医学科学院院刊;1988年04期
10 袁中一;;哺乳动物细胞的固定化及生物反应器[J];生命的化学;1992年06期
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1 吴金美;R.W.Lim;吴祥甫;Grace Sun;吕鸿声;;家蚕核多角体病毒iap基因的克隆、序列分析及其对哺乳动物细胞核因子-κB的调节作用的研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
2 李风知;程度胜;林建波;张宏权;;不同转染方法对外源基因在哺乳动物细胞中表达特点的影响[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
3 刘庆伟;邱亚峰;王晓杜;郭林;刘超;沈阳;李向东;单虎;马志永;;抗PRV gC抗体制备及PRV gC表达的分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
4 袁顺宗;谭江琳;马兵;彭旭;贺伟峰;黄正根;程文广;贾雄飞;王晓娟;胡婕;甘成军;陈希炜;胡晓红;张小容;罗高兴;吴军;;ITGB4BP与P311在细胞中的共定位研究[A];第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年
5 雷春亮;杨湛;唐小平;黄呈辉;;腺病毒载体介导HBsAg基因在哺乳动物细胞中的表达[A];中华医学会第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2005年
6 袁顺宗;谭江琳;彭旭;马兵;贺伟峰;黄正根;程文广;贾雄飞;王晓娟;甘成军;胡婕;陈希炜;易绍萱;胡晓红;张小容;罗高兴;吴军;;荧光共振能量转移技术检测ITGB4BP与P311间的相互作用[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年
7 袁顺宗;谭江琳;马兵;彭旭;贺伟峰;黄正根;程文广;贾雄飞;王晓娟;胡婕;甘成军;陈希炜;胡晓红;张小容;罗高兴;吴军;;激光共聚焦技术检测ITGB4BP与P311间的相互作用[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
8 王菊芳;李文建;周光明;卫增泉;;经羟自由基处理的哺乳动物细胞的旁观者效应[A];中华医学会放射医学与防护学分会第三次全中国青年学术交流会论文摘要汇编[C];2001年
9 郑胡镛;张瑞东;胡亚美;;哺乳动物细胞对丝裂霉素诱导的DNA链间交联的修复[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
10 周光明;李文建;王菊芳;李强;党秉荣;温小琼;李兴林;颉红梅;卫增泉;高清祥;;HO和γ射线对细胞的致死效应[A];第十一届全国核物理大会论文集[C];2000年
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1 闫鑫杜永武;哺乳动物细胞高效表达国家工程实验室落户鲁南制药[N];中国医药报;2008年
2 记者  陈超;大肠杆菌有望制成生物微型马达[N];科技日报;2006年
3 裴那;Oxoid公司推出快速确认食品中大肠杆菌的方法[N];中国医药报;2009年
4 ;杆菌速灭[N];中国畜牧水产报;2001年
5 沧州河间市畜牧水产局 程红利;一例肉鸡类巴氏杆菌和大肠杆菌混感的诊治[N];河北农民报;2011年
6 编译 王金元;新型相机用大肠杆菌做底片[N];北京科技报;2005年
7 记者 冯卫东;除菌香皂其实并不除菌[N];科技日报;2007年
8 陈勇;菠菜生菜相继被“毒”,灌溉水是“凶嫌”[N];新华每日电讯;2006年
9 冯立中;致泻大肠杆菌是腹泻病祸首[N];健康报;2006年
10 宁夏隆德县畜牧兽医站 罗志轶;中西医治疗獭兔球虫和大肠杆菌混合感染[N];江苏农业科技报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋思婧;细菌介导的重组伪狂犬病毒(PRV)载体的构建及转运哺乳动物细胞的方法研究[D];华中农业大学;2010年
2 初小辉;吉林省猪伪狂犬病流行病学调查与防控措施的研究及应用[D];吉林大学;2011年
3 牛勃;大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因在哺乳动物细胞中表达的研究[D];中国协和医科大学;1990年
4 张敬东;应用假狂犬病毒(PRV)和c-fos基因示踪脑瘫状态下腰段和颈段脊髓神经元之间的联系[D];吉林大学;2005年
5 阳洪波;一种新的哺乳动物蛋白质合成校正机制HDTD的初步研究[D];中国协和医科大学;2004年
6 徐晨;抗CD_3基因工程嵌合抗体的研究[D];中国协和医科大学;2001年
7 黄晓斌;突变分析NHA2在酵母中的功能及其在哺乳动物细胞和小鼠中的表达作用研究[D];北京协和医学院;2010年
8 刘金毅;EcoRII R-M基因在大肠杆菌中的表达及EcoRII(M)特异性甲基化对正常和肿瘤细胞的影响研究[D];中国协和医科大学;1999年
9 王迪;β_2受体的表达、纯化及在快速检测中的应用[D];中国农业科学院;2008年
10 丁昇;piggyBac转座系统[D];复旦大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 于志凤;狂犬病病毒糖蛋白哺乳动物细胞稳定表达细胞系建立及特性研究[D];吉林大学;2006年
2 赖翔;饲粮添加苏氨酸对PRV诱导的免疫应激仔猪生长性能和免疫功能的影响[D];四川农业大学;2012年
3 陈振瑞;采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库[D];南方医科大学;2010年
4 徐倩倩;白头翁素对小鼠PRV、E.coli混合感染性腹泻防治机制的研究[D];河北农业大学;2010年
5 林艳;MAR特征性元件能介导载体在哺乳动物细胞中附着存在[D];新乡医学院;2012年
6 刘珺;鼠bcl-2α基因在哺乳动物细胞中的表达[D];苏州大学;2003年
7 郭永清;大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因在哺乳动物细胞中表达的研究[D];山西医科大学;2002年
8 张繁;结核分枝杆菌哺乳动物细胞入侵因子mce家族Rv0590A基因的性质及功能研究[D];西南大学;2011年
9 杨禅堂;乙型肝炎病毒X蛋白与人RECQL解旋酶的相互作用研究[D];湖北大学;2011年
10 张国强;哺乳动物细胞高效表达载体的优化[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
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