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《湖北中医药大学》 2011年
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固本祛瘀方对多囊卵巢综合征模型大鼠下丘脑—垂体—卵巢轴功能影响的实验研究

宋俐  
【摘要】:目的: 多囊卵巢综合征(poly cystic ovarian syndrome, PCOS)是育龄期妇女常见生殖内分泌紊乱性疾病,临床上以持续无排卵、高雄激素血症和胰岛素抵抗(insulin resistance, IR)为特征,是女性无排卵性不孕的主要原因之一。其发病率在生育期妇女中高达5-10%,占无排卵性不孕的70%左右。随着年龄的增长,PCOS也是妇女Ⅱ型糖尿病、心血管疾病等发生的主要诱因。有研究表明由于多毛、肥胖及不孕等临床表现导致高达33%的PCOS患者伴有焦虑和抑郁,对女性的身心健康和生活质量造成极大影响。从1935年Stein和Leventhal首次报道本病以来,各国学者对其研究不断深入,但由于其临床表现呈多态性,发病原因至今尚未阐明。目前国内外较为一致的看法认为下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovarian axis, HPOA)调节功能异常是其主要发病机制之一。 临床研究表明,中医治疗生殖内分泌疾病有很好的优势和经验。中医治疗PCOS,可促进生殖功能恢复,调节内分泌及代谢紊乱,作用持久,毒副作用小。导师黎烈荣教授从医四十载,治疗中医妇科疑难病经验丰富。固本祛瘀方是黎教授治疗PCOS的经验方。临床观察表明,固本祛瘀方能降低PCOS患者雄激素水平,降低黄体生成素(luteinizing hormone, LH)水平及LH/卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH)比值,有效调节月经周期,促进排卵,提高妊娠率。本课题拟应用双氢睾酮(dihydrotestosterone, DHT)诱导复制的PCOS大鼠模型,采用放射免疫法、组织病理学方法、免疫组织化学染色法、荧光免疫双标记组织化学法等实验方法,从整体-细胞-分子水平,较为全面地探讨固本祛瘀方对DHT诱导复制的PCOS模型大鼠HPOA功能影响的作用机制,以了解固本祛瘀方治疗PCOS的可能作用机理,为其临床推广应用提供依据。 方法: 雌性Wistar新生幼鼠,饲养于12h光照/12h黑暗的环境中,至21日龄时随机分为4组:正常对照组、模型对照组、西药对照组和固本祛瘀组,每组12只。模型对照组、西药对照组和固本祛瘀组大鼠颈部埋植双氢睾酮缓释片剂(DHT,7.5mg,90d缓释,相当于1.66m/kg,每天释放83μg)制备PCOS大鼠模型。造模6周后,即大鼠64日龄起,固本祛瘀组和西药对照组开始分别给药治疗。固本祛瘀方由菟丝子等12味中药组成,由本院制剂室按特定流程煎制、浓缩,制成浓缩液。西药对照组治疗用药为非甾体类抗雄激素制剂氟他胺(Flutamide)。通过人与大鼠体表面积比率换算法计算给药量。固本祛瘀组、西药对照组大鼠每日灌胃给药,每次1ml,早晚各1次/天,连续4周。模型对照组、正常对照组大鼠每日灌胃蒸馏水,每次1ml,早晚各1次/天,连续4周。 治疗时,每周观察各组大鼠体重、活动、饮食等变化;每天阴道脱落细胞学检查研究各组大鼠的动情周期变化;治疗结束后,组织病理学方法研究各组大鼠卵巢、子宫及垂体的形态及组织病理学改变;放射免疫法(radioimmunoassay, RIA)研究各组大鼠血清性激素雌二醇(estradiol,E2)、睾酮(testosterone, T)、孕酮(progesterone, P)、LH、FSH水平变化,结合垂体组织离体静态孵育方法研究垂体离体活细胞LH释放水平;免疫组织化学染色法、荧光免疫双标记组织化学法研究各组大鼠垂体促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor, GnRH-R)表达水平变化,下丘脑内侧视前区(medial preoptic area, MPO)及斜角带核水平支(horizontal limb of diagonal band, HDB)促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone, GnRH)和GnRH-R、雄激素受体(androgen receptor, AR)表达水平变化,及GnRH与AR在下丘脑的共表达情况。 结果: 1、体重变化:大鼠21日龄时造模开始,模型对照组、西药对照组和固本祛瘀组大鼠皮下DHT埋药。此时各组间大鼠体重比较无统计学差异(P0.05)。大鼠63日龄时,即埋药后6周,3组造模大鼠体重与正常对照组比较均有非常显著性差异(P0.01),3组造模大鼠体重均明显高于正常对照组,与PCOS (?)患者代谢特征一致。此后固本祛瘀组、西药对照组开始给药,治疗4周后,固本祛瘀组大鼠体重与模型对照组比较有非常显著性差异(P0.01),与正常对照组、西药对照组比较无统计学差异(P0.05)。提示经过治疗,固本祛瘀组PCOS大鼠体重明显下降,基本恢复正常水平。 2、动情周期的影响:治疗开始至实验结束,连续每天记录各组大鼠动情周期变化。正常对照组大鼠表现规律的连续4-5天动情周期。模型对照组大鼠表现动情周期延长,主要表现为间期延长,无动情表现等现象。固本祛瘀组大鼠治疗开始阶段表现同模型对照组,主要表现为间期,无动情表现,治疗2周左右,间期时间明显缩短,逐渐出现动情周期性变化,但欠规则,提示连续规律动情周期逐渐建立,卵巢功能逐步恢复,尤其在治疗第3、4周左右,可见明显好转趋势。 3、脏器系数的影响:固本祛瘀组大鼠卵巢系数与模型对照组、西药对照组比较分别有非常显著、显著性差异(P0.01、P0.05),固本祛瘀组大鼠卵巢系数明显低于模型对照组、西药对照组;与正常对照组比较无统计学差异(P0.05)。提示经过治疗,固本祛瘀组PCOS大鼠卵巢系数明显降低,基本恢复正常水平。固本祛瘀组大鼠子宫系数与各对照组比较均无统计学差异(P0.05)。提示造模及治疗对各组大鼠子宫系数无明显影响。固本祛瘀组大鼠垂体系数与各对照组比较均无统计学差异(P0.05)。提示固本祛瘀方对PCOS大鼠垂体系数无明显影响。 4、卵巢组织结构的影响:固本祛瘀组大鼠光镜下见皮质表层细胞增多,结缔组织致密,包膜下可见处于不同发育期的卵泡,包括窦状卵泡及成熟卵泡,表现出排卵迹象。卵巢髓质可见疏松结缔组织及血管。卵母细胞外围颗粒细胞层逐渐增厚,PCOS增厚的卵巢包膜变薄,增厚的卵泡膜细胞层变薄。表明固本祛瘀方具有促进颗粒细胞增生、分化和使增厚的卵泡膜细胞层、卵巢包膜变薄的作用。 5、性激素水平的影响:固本祛瘀组大鼠血清E2水平与模型对照组比较有显著性差异(P0.05),固本祛瘀组大鼠血清E2水平明显高于模型对照组;与正常对照组、西药对照组比较均无统计学差异(P0.05)。固本祛瘀组大鼠血清T水平与模型对照组比较有非常显著性差异(P0.01),固本祛瘀组大鼠血清T水平明显低于模型对照组;与正常对照组、西药对照组比较均无统计学差异(P0.05)。固本祛瘀组大鼠血清P水平与各对照组比较均无统计学差异(P0.05)。固本祛瘀组大鼠血清LH水平与模型对照组比较有非常显著性差异(P0.01),固本祛瘀组大鼠血清LH水平明显低于模型对照组;与正常对照组、西药对照组比较均无统计学差异(P0.05)。固本祛瘀组大鼠LH/FSH比值与模型对照组比较有非常显著性差异(P0.01),固本祛瘀组大鼠LH/FSH比值明显低于模型对照组;与正常对照组、西药对照组比较均无统计学差异(P0.05)。固本祛瘀组大鼠血清FSH水平与各对照组比较均无统计学差异(P0.05)。提示固本祛瘀方能降低PCOS大鼠血清T、LH水平,降低LH/FSH比值,升高血清E2水平,对血清P及FSH无明显影响。 6、垂体释放LH水平的影响:固本祛瘀组、西药对照组、模型对照组大鼠垂体释放LH水平分别与正常对照组比较均有非常显著性差异(P0.01),3组大鼠垂体释放LH水平明显高于正常水平。固本祛瘀组、西药对照组大鼠垂体释放LH水平与模型对照组比较分别有非常显著性、显著性差异(P0.01、P0.05),2组大鼠垂体释放LH水平明显低于模型对照组。提示经过治疗,固本祛瘀组PCOS大鼠垂体释放LH水平有一定程度降低,但尚未恢复正常水平。 7、垂体GnRH-R表达的影响:固本祛瘀组大鼠垂体GnRH-R阳性表达细胞数与模型对照组比较有显著性差异(P0.05),固本祛瘀组大鼠垂体GnRH-R阳性表达细胞数明显高于模型对照组;与正常对照组、西药对照组比较均无统计学差异(P0.05)。提示经过治疗,固本祛瘀组PCOS大鼠垂体GnRH-R表达明显升高,基本恢复正常水平。 8、下丘脑GnRH、GnRH-R、AR表达的影响: (1)GnRH:固本祛瘀组大鼠下丘脑MPO及HDB部位GnRH阳性表达神经元数与模型对照组比较分别有非常显著性、显著性差异(P0.01、P0.05),固本祛瘀组大鼠下丘脑MPO及HDB部位GnRH阳性表达神经元数明显低于模型对照组。固本祛瘀组大鼠下丘脑MPO部位GnRH阳性表达神经元数与西药对照组比较有显著性差异(P0.05),固本祛瘀组大鼠下丘脑MPO部位GnRH阳性表达神经元数明显低于西药对照组。固本祛瘀组大鼠下丘脑MPO及HDB部位GnRH阳性表达神经元数与正常对照组比较均无统计学差异(P0.05)。提示经过治疗,固本祛瘀组PCOS大鼠下丘脑MPO及HDB部位GnRH神经元表达明显降低,基本恢复正常水平。 (2)GnRH-R:固本祛瘀组大鼠下丘脑MPO及HDB部位GnRH-R阳性表达细胞数与正常对照组比较均有显著性差异(P0.05),固本祛瘀组大鼠下丘脑MPO及HDB部位GnRH-R阳性表达细胞数明显低于正常对照组;而与模型对照组、西药对照组比较均无统计学差异(P0.05)。提示经过治疗,固本祛瘀组PCOS大鼠下丘脑MPO及HDB部位GnRH-R表达有所升高,但无统计学意义,没有恢复正常水平。 (3)AR:固本祛瘀组大鼠下丘脑MPO部位AR阳性表达细胞数与模型对照组比较有显著性差异(P0.05),固本祛瘀组大鼠下丘脑MPO部位AR阳性表达细胞数明显低于模型对照组;而与正常对照组、西药对照组比较均无统计学差异(P0.05)。提示经过治疗,固本祛瘀组PCOS大鼠下丘脑MPO部位AR表达明显降低,基本恢复正常水平。 结论: 1、固本祛瘀方能显著改善PCOS肥胖、卵巢性周期紊乱、高雄激素血症、LH/FSH比值升高等病理改变。 2、固本祛瘀方能直接改善卵巢组织结构的病理改变,调节卵巢功能。主要表现在减轻PCOS增重的卵巢重量,促进卵巢颗粒细胞增生、分化,使增厚的卵泡膜细胞层、卵巢包膜变薄,改善卵巢功能,促进卵泡发育成熟并排卵。 3、固本祛瘀方不能改善垂体系数,但能通过改善垂体细胞的功能发挥治疗作用;能直接降低PCOS大鼠垂体释放LH的水平,但不能恢复完全正常水平。 4、固本祛瘀方能分别通过影响垂体GnRH-R表达水平,下丘脑MPO及HDB部位GnRH、GnRH-R、AR表达水平,调节PCOS异常增加的GnRH脉冲频率,降低垂体对GnRH的敏感性,使垂体分泌LH频率及幅度降低,恢复LH周期性改变及峰值出现,促进排卵。
【学位授予单位】:湖北中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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9 朱萱萱;王广基;刘建平;王淑云;徐轩;;口腔膜治疗实验性大鼠口腔膜溃疡的研究[A];中国制药工业药理学会20周年学术会议论文集[C];2002年
10 舒清明;张永亮;李灵芝;何冰;李志强;;蛋白质芯片技术检测脑损伤大鼠血清差异蛋白[A];中国生理学会应用生理学专业委员会暨《中国应用生理学杂志》二十周年纪念大会和学术讨论会论文集[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;关木通对大鼠致癌性的实验研究[N];中国医药报;2003年
2 刘霞;诱导多功能干细胞让小鼠长出大鼠胰腺[N];科技日报;2011年
3 ;丹参能加快放创复合伤大鼠创面愈合[N];中国中医药报;2005年
4 郑健刚;杜元灏;石学敏;针刺能增加脑缺血大鼠脑血流量[N];中国医药报;2005年
5 ;新抗病毒抗生素17997在大鼠体内药代动力学和组织分布研究[N];中国医药报;2003年
6 ;刺五加皂甙对大鼠血管性痴呆有防治作用[N];中国中医药报;2005年
7 ;中药复方能逆转腹主动脉缩窄大鼠心肌肥大[N];中国中医药报;2005年
8 孙忻;人类首次获得克隆大鼠[N];科技日报;2003年
9 记者 许琦敏;大鼠有望成实验室头号“明星”[N];文汇报;2010年
10 记者 姜澎;聪明大鼠 解密大脑记忆功能[N];文汇报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李明波;大鼠掠食行为的神经生物学探讨[D];中南大学;2012年
2 甘贤兵;慢性心力衰竭大鼠心交感传入反射的增强机制研究[D];南京医科大学;2012年
3 郭冠华;“双固一通”电针改善老年阳虚模型大鼠学习记忆的海马长时程增强效应机制研究[D];湖北中医药大学;2014年
4 邓郁青;心理应激及鲁比前列酮对大鼠肠道免疫的影响[D];河北医科大学;2014年
5 杨建新;腹部术后疲劳综合征模型及抗术后疲劳方作用的研究[D];湖北中医学院;2004年
6 杨丹榕;大鼠IgEFcCH2-3受体阻断与IgEFcCH2-3-FasL诱导肥大细胞凋亡的研究[D];第二军医大学;2004年
7 李玉茹;神经营养素及其受体在老年性大鼠耳蜗及下丘中表达规律的研究[D];吉林大学;2005年
8 陈党红;舒筋颗粒对卒中后肌张力增高的影响及可能作用机制探讨[D];广州中医药大学;2005年
9 卢奕;人羊膜细胞在创伤性脑损伤中应用的实验研究[D];苏州大学;2005年
10 潘静薇;NOGO-B在动脉粥样硬化病变中差异表达的研究[D];第二军医大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冷婧;限食下活性维生素D对大鼠寿命的影响[D];山西医科大学;2013年
2 孙超;硫化氢对烧伤大鼠肠道组织干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α水平的影响研究[D];青海大学;2013年
3 向芳;围产期大鼠血脂组成与乳腺炎症相关基因的表达变化研究[D];四川农业大学;2011年
4 吴芳庚;环境温度变化致大鼠小肠黏膜免疫屏障损伤的研究[D];南昌大学;2011年
5 郭亚玲;LOX-1和VCAM-1在糖尿病肾病动脉粥样硬化大鼠中的表达及普罗布考的影响[D];蚌埠医学院;2013年
6 张智;培菲康对高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病大鼠肠黏膜屏障的作用[D];广西医科大学;2013年
7 耿立敏;牛磺酸对染锰大鼠丘脑氨基酸类神经递质及其相关酶改变的干预作用[D];广西医科大学;2013年
8 杨科峰;基于BCI的大鼠运动行为控制的研究[D];郑州大学;2011年
9 贾涛;麻醉大鼠肠系膜微循环局部酸环境对微血管反应性的影响[D];山西医科大学;2013年
10 钟丽敏;中枢M受体参与毒血症大鼠星形胶质细胞激活及细胞因子分泌的研究[D];苏州大学;2011年
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