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《湖北中医药大学》 2011年
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“双固一通”针法对绝经后骨质疏松症模型大鼠OPG/RANKL/RANK系统的调节

周晓莉  
【摘要】:目的 观察“双固一通”针法对去卵巢绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis, PMO)模型大鼠调节骨吸收平衡的相关细胞因子系统——护骨素(osteoprotegerin, OPG)/核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)/核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB, RANK)系统的影响,进一步探讨“双固一通”针法治疗本病的作用机制,为针灸治疗PMO提供新的思路和方法,为临床预防和治疗PMO提供实验依据。 方法 依随机原则将50只SD大鼠分为对照组、模型组、常规取穴针刺组(简称常规组)、“双固一通”针刺组(简称双固一通组)和中成药治疗组(简称中成药组),每组10只。模型组、常规组、双固一通组和中成药组切除双侧卵巢后常规饲养,造成实验性PMO动物模型。90天后常规组、双固一通组采用电针治疗,中成药组早晚予仙灵骨葆胶囊灌胃治疗(早晚以0.4g/次灌胃,药液量以生理盐水溶解,调整至3m1),对照组、模型组早晚予生理盐水3m1灌胃,用药期间常规饲养。疗程均为8周。电针治疗(采用四川恒明科技开发有限公司生产HM-6805型经穴治疗仪,疏密波8~80Hz,疏密波转换14次/分钟,电压1.5V,强度1mA左右,通电15min),每天1次,每次15分钟,留针10分钟,连续治疗6天后休息1天,共治疗8周。常规组取穴:脾俞、胃俞、肾俞,气海俞,均为双侧;双固一通组取关元、后三里(双)、肾俞(双)、膈俞(双)、大杼(双)。用全自动生化仪测定血清钙(calcium, Ca)、磷(phosphorus,P)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)和尿钙、尿磷、尿肌酐;用放射免疫法测定血骨钙素(Osteocalcin, BGP);用酶联免疫法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)测定尿脱氧吡啶啉(Deoxypyridinoline, DPD)的含量;用化学发光免疫分析法检测雌二醇(estradiol,E2); ELISA法检测白细胞介素(interletukin, IL)-6、巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)、OPG、RANKL、RANK;双能x线骨密度仪检测骨密度(bone mass density, BMD); HE染色观察大鼠骨组织形态学的变化;反转录聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测M-CSF、OPG、RANKL-mRNA表达及OPG/RANKL。大鼠因造模手术、麻醉、灌胃死亡,取材时各组大鼠数量如下:对照组8只,模型组6只,中成药组6只,常规组6只,双固一通组7只。 结果 1模型组血Ca值明显降低、血P值明显升高、血ALP值明显升高、BGP明显升高,有非常显著性差异(P0.01)。与模型组比较,双固一通组和中成药组血Ca明显升高、血P明显降低、血ALP明显降低,BGP明显升高有非常显著性差异(P0.01);双固一通组优于常规组(P0.01)。 模型组尿Ca/Cr、P/Cr比值明显升高,有非常显著性差异(P0.01);与模型组比较,各组Ca/Cr、P/Cr比值均降低,常规组有非常显著性差异(P0.01),双固一通组Ca/Cr有非常显著性差异(P0.01),P/Cr有显著性差异(P0.05);双固一通组与中成药组和常规组比,无显著性差异(P0.05)。 模型组尿DPD明显升高,有显著性差异(P0.05)。与模型组比较,双固一通组尿DPD含量明显降低,有非常显著性差异(P0.01);双固一通组与中成药组和常规组比,无显著性差异(P0.05)。 模型组血Ca明显降低、而血P、ALP值明显升高、血BGP明显升高(P0.01);尿Ca/Cr、P/Cr明显升高(P0.01),尿DPD明显升高(P0.05)。说明去卵巢骨质疏松症模型大鼠呈现高骨转化率,骨吸收增加,伴随骨形成代偿性增加,骨量减少,预示骨密度降低,与临床常见的PMO女性的骨高转换率极相似,提示造模成功。而“双固一通”针灸治疗后,BGP显著升高,提示成骨细胞(OB)活性增强,骨形成增加。双固一通组、中成药组均可升高血钙,降低血磷,降低尿Ca/Cr、尿P/Cr、DPD;常规组可升高血钙,降低尿Ca/Cr、尿P/Cr、DPD,对于血P无明显的降低作用。说明中医药治疗可以调节Ca、P代谢,促进骨形成,减缓骨吸收。 2模型组腰椎BMD明显降低,有非常显著性差异(P0.01)。与模型组比较,各治疗组腰椎BMD均明显升高,有非常显著性差异(P0.01)。与双固一通组比较,有显著性差异(P0.05)。与对照组比较,模型组股骨BMD明显降低,有非常显著性差异(P0.01)。与模型组比较,各治疗组股骨BMD均明显升高,有显著性差异(P0.05);与双固一通组比较,各组无显著性差异(P0.05)。 3光镜观察结果显示:模型组骨小梁稀疏、细、中断点多、间距宽,部分区域出现较大的空白区域。常规组、中成药组、双固一通组的骨小梁增多、增粗、间隙变窄,中断点减少,三组间的区别不明显。双固一通的骨小梁排列密集,相互之间的连接明显增多,宽度增宽,体积增大,间隙变窄。 4模型组血清IL-6明显升高,E2明显降低,有非常显著性差异(P0.01)。与模型组比较,各治疗组血清IL-6均降低,E2明显升高,有非常显著性差异(P0.01)。与中成药组比较,双固一通组和常规组血E2无显著性差异(P0.05)。双固一通组优于常规组和中成药组(P0.01)。在本实验中模型组E2水平降低,IL-6含量增高,与既往的研究结果一致。“双固一通”针灸治疗后,大鼠血E2显著升高、IL-6显著下降(P0.05),双固一通组优于常规组和中成药组。表明“双固一通”针法治疗能够升高雌激素,抑制IL-6分泌,抑制OC的活性,促进骨的形成。 5模型组血M-CSF明显升高、OPG明显降低、RANKL明显降低、RANK值明显降低,有非常显著性差异(P0.01);与模型组比较,双固一通组、常规组和中成药组M-CSF明显降低、OPG值明显升高、RANK明显升高,有非常显著性差异(P0.01);与模型组比较,中成药组血清RANKL升高,常规组血清RANKL有降低趋势,但均无显著性差异。双固一通组优于常规组和中成药组。说明针刺可以通过提高血OPG、RANKL、RANK的含量,降低M-CSF,从而抑制破骨细胞(osteoclast,OC)的骨吸收来减少骨量的丢失,且“双固一通,,针法优于其它方法。 6模型组骨M-CSFmRNA表达较对照组明显升高,有非常显著性差异(P0.01)。与模型组比较,各治疗组M-CSFmRNA表达均降低,有非常显著性差异(P0.01)。与双固一通组比较,常规组M-CSFmRNA表达升高,有显著性差异(P0.05),中成药组有非常显著性差异(P0.01)。中成药组、常规组、双固一通组均有效,但双固一通组效最好。 模型组骨OPGmRNA表达较对照组明显降低,有非常显著性差异(P0.01)。与模型组比较,各治疗组OPGmRNA表达均升高,有非常显著性差异(P0.01)。与中成药组和常规组比较,双固一通组有非常显著性差异(P0.01),与对照组比较,无显著性差异(P0.05)。中成药组、常规组、双固一通组均有效,但双固一通组效最好。 模型组骨RANKLmRNA表达较对照组明显降低,有非常显著性差异(P0.01)。与模型组比较,双固一通组骨RANKLmRNA表达升高,有非常显著性差异(P0.01),中成药组和常规组RANKLmRNA表达与模型组比无显著性差异(P0.05)。双固一通组与中成药组比有显著性差异(P0.05)。双固一通组有效,中成药组和常规组均无效。 模型组骨OPG/RANKL比值较对照组显著降低,有显著性差异(P0.05)。与模型组比,双固一通组骨OPG/RANKL比值升高,有非常显著性差异(P0.01),中成药组与模型组比有显著性差异(P0.05),常规组与模型组比无显著性差异(P0.05)。中成药组与双固一通组均有效,但双固一通组效更好。 本研究结果表明:模型组骨M-CSFmRNA表达明显升高(P0.01),提示OC生成增加;各治疗组M-CSFmRNA表达均降低(P0.01),表明中医药治疗尤其是“双固一通”针法可以抑制OC数量,或降低OC活性,减缓骨吸收。模型组骨OPG、RANKLmRNA表达显著降低(P0.01),提示OPG蛋白表达降低,破骨吸收增加;RANKL蛋白表达降低,OPG与RANKL结合有一定程度的阻滞OC生成的作用,而综合作用仍表现为骨吸收的增加。OPG/RANKL比值能反映成骨细胞(osteoblast, OB)的形成,比值越大,OB介导的能力越强;englixibaoweiia促进骨吸收,限制骨矿化的速度。 模型组骨OPG/RANKL比值表达较对照组明显降低,提示骨形成降低。双固一通组骨OPG、RANKLmRNA表达明显升高(P0.01)、RANKLmRNA表达降低(P0.01),OPG/RANKL比值明显升高(P0.01),提示“双固一通”针法可能通过促进OPG蛋白表达,提高OB活性,通过与RANK竞争和RANKL的结合,阻止OC的生成,阻止骨吸收。 结论 通过本课题的研究,我们认为:“双固一通”针法对OPG/RANKL /RANK的调节是多环节、多途径的: 1“双固一通”针灸治疗后,BGP显著升高,提示成骨细胞活性增强,骨形成增加;血钙升高,血磷降低,尿Ca/Cr、尿P/Cr、DPD降低,提示“双固一通”针灸治疗可以通过增加胃肠吸收功能,促进对钙、磷等各种营养物质的吸收和利用,调节Ca、P代谢,降低尿Ⅰ型胶原分解产物DPD浓度,提高BGP浓度,从而抑制骨吸收、促进骨形成,最终使骨矿含量增加,维持甚至提高骨密度。 2“双固一通”针灸治疗能通过提高去卵巢骨质疏松症模型大鼠E2的水平,减少IL-6含量,加强雌激素对IL-6的抑制作用,减少OC的前体细胞形成,抑制骨吸收,表现为BMD的升高、模型大鼠骨组织形态结构的改善。 3“双固一通”针灸治疗能升高去卵巢骨质疏松症模型大鼠血清OPG、RANKL、RANK含量和降低M-CSF水平,以抑制OC的活性而减少骨吸收,减少骨量的丢失。 4“双固一通”针灸治疗能升高去卵巢骨质疏松症模型大鼠血清OPG、RANKL、RANK含量和降低M-CSF,以抑制OC的活性而减少骨吸收,减少骨量的丢失;“双固一通”针灸治疗能通过降低去卵巢骨质疏松症模型大鼠骨M-CSFmRNA表达来抑制OC数量,或降低OC活性,减缓骨吸收;通过升高骨OPGmRNA表达,升高RANKLmRNA的表达,提高OB活性,通过与RANK竞争和RANKL的结合,阻止OC的生成,阻止骨吸收;通过升高OPG/RANKL比值,调节OPG/RANKL/RANK,能抑制OC活性,拮抗骨吸收。
【学位授予单位】:湖北中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R245

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【引证文献】
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【同被引文献】
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5 韦秀宁;戴洌;朱浪静;莫颖倩;郑东辉;欧阳霞;邹婵娟;;罗格列酮通过抑制RANKL表达及p-ERK活化抑制RA破骨细胞分化及功能[A];中华医学会第三次骨质疏松和骨矿盐疾病中青年学术会议论文汇编[C];2011年
6 韦秀宁;;罗格列酮通过抑制RANKL表达及ERK活化抑制RA破骨细胞分化和功能[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年
7 韦秀宁;;罗格列酮通过ERK通路抑制RA滑膜成纤维细胞表达RANKL[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年
8 周学平;黄艳;王明艳;周玲玲;杨研华;;清络通痹颗粒对RA患者成纤维样滑膜细胞增殖及RANKL表达的影响[A];中华中医药学会风湿病分会2010年学术会论文集[C];2010年
9 肖宇明;孙秀娟;于燕妮;;氟对大鼠OPG、RANKL和RANK蛋白表达水平的影响及丹蓝仙硼疗氟胶囊拮抗作用[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
10 丁从珠;;来氟米特联合甲氨蝶呤对胶原诱导的关节炎大鼠骨破坏因子RANKL、IL-17的影响[A];2011年华东六省一市风湿病学学术年会暨2011年浙江省风湿病学学术年会论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 蒲昭和;易患骨质疏松症是什么人[N];民族医药报;2002年
2 健康时报记者  赵晴晴;别让骨头变“酥”了[N];健康时报;2006年
3 健康时报特约专家 李跃华;自我诊断骨质疏松[N];健康时报;2007年
4 叶哲伟;预防骨质疏松 贯穿生命始终[N];家庭医生报;2006年
5 谢勇丽;骨质疏松症的信号和防治[N];农村医药报(汉);2006年
6 张松伟;骨质疏松症患者谨防冬季骨折[N];中国消费者报;2007年
7 孟刚;预防骨质疏松症从年轻时做起[N];中国消费者报;2007年
8 王金山;年轻女孩也患骨质疏松症[N];中国医药报;2007年
9 熊迎;抗骨质疏松症长效新药面世[N];中国医药报;2007年
10 张东风;骨质疏松严重威胁老人健康[N];中国中医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周晓莉;“双固一通”针法对绝经后骨质疏松症模型大鼠OPG/RANKL/RANK系统的调节[D];湖北中医药大学;2011年
2 毛英杰;EphB4/ephrinB2逆向信号抑制RANKL诱导的Raw264.7破骨细胞分化的机制研究[D];浙江大学;2011年
3 唐振宁;RANKL/RANK途径对人乳腺癌细胞迁移作用及其调节机制的研究[D];第三军医大学;2011年
4 王艳;鸡核因子-κB受体激活物配基(chRANKL)基因的克隆、表达及生物学活性研究[D];南京农业大学;2008年
5 冯元;二甲双胍对高糖环境下人牙周膜细胞及糖尿病大鼠拔牙窝愈合过程中RANKL表达的作用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
6 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
7 夏琳;TNF-α对RANKL体外诱导破骨细胞分化的促进作用及其机制探讨[D];山东大学;2013年
8 夏玉坤;RLX/RXFP1、MMP9/MMP13和RANKL/OPG在关节炎软骨和骨破坏及中药治疗中的作用[D];华中科技大学;2012年
9 赵宗茂;RANKL对成人骨髓间质干细胞向神经细胞分化的影响研究[D];河北医科大学;2003年
10 唐伟;生长因子Progranulin结合肿瘤坏死因子受体家族成员及其在自身免疫性疾病中的功能研究[D];山东大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李明娜;OPG/RANKL/RANK轴在非小细胞肺癌发生及淋巴转移中的作用[D];南京医科大学;2010年
2 王丹;跳跃运动对OPG/RANKL/RANK骨代谢信号通路影响的实验研究[D];苏州大学;2013年
3 薛英;乳铁蛋白通过OPG/RANKL/RANK系统提高去卵巢大鼠骨量和骨微体系结构[D];福建医科大学;2012年
4 叶金晶;1、OPG/RANKL/RANK轴系统在牙槽骨吸收重建中的意义 2、牙周牙髓联合治疗重度牙周炎病例报告[D];浙江大学;2011年
5 聂珊;多效基因RANKL对股骨颈抗压强度指数和体重指数的影响[D];湖南师范大学;2012年
6 方良莹;RANKL蛋白的制备及其与RANK蛋白亲和力的分析[D];中国科学技术大学;2011年
7 于杨;鸡RANKL活性区基因的克隆、表达及抗体制备[D];南京农业大学;2011年
8 苑学微;RANKL介导下颌功能性前伸后髁突骨改建的机制[D];河北医科大学;2013年
9 周华;胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞RANKL表达影响及信号转导机制的研究[D];中南大学;2010年
10 袁晓军;金属(钴、铬)离子诱导成骨样细胞RANKL/OPG表达及其信号转导分子机制的实验研究[D];南昌大学;2010年
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