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《湖北中医学院》 2004年
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补脾法对脾虚证大鼠~(59)Fe代谢和转铁蛋白受体mRNA表达影响的实验研究

王进  
【摘要】: 目的:本课题从药代动力学、药效动力学二方面运用放射性示踪技术动态观察脾虚证大鼠对铁吸收和/或转运代谢过程和运用RNA斑点杂交技术研究脾虚证大鼠对转铁蛋白受体mRNA表达的影响,以及补脾法对脾虚证大鼠铁吸收和/或转运代谢过程和对转铁蛋白受体mRNA表达的影响,实验研究脾主运化/脾失健运与铁代谢的关系,探讨脾主运化生物学意义,揭示脾主运化、脾为后天之本等重要中医理论的科学内涵,并为脾的功能和/或脾虚证本质研究提供实验依据。 方法:从实验Ⅰ到实验Ⅴ层层深入,实验研究补脾法对脾虚证大鼠~(59)Fe代谢和转铁蛋白受体mRNA表达的影响。 实验Ⅰ雄性SD大鼠80只随机分为正常组、正常补脾组、脾虚组、脾虚补脾组、缺铁组、缺铁补脾组、脾虚缺铁组、脾虚缺铁补脾组8组,按动物模型规范化的要求造模后,8组一次性灌服~(59)FeCl_3水悬液0.2ml/220g/只,同时依照人和鼠体重换算,正常补脾组、脾虚补脾组、缺铁补脾组、脾虚缺铁补脾组4组即时灌服1:1四君子汤药液1.5ml~±,其它4组用1.5ml~±生理盐水灌胃,日一次。分别在0.5h、1h、1.5h、3h、6h、12h、24h大鼠尾部取血0.2ml,用γ放射免疫计数器测量其放射性~(59)Fe计数,观测放射性铁经大鼠胃肠道进入全身循环系统的药代动力学变化; 实验Ⅱ至实验Ⅴ雄性SD大鼠160只随机分为正常组、正常补脾组、脾虚组、脾虚补脾组、缺铁组、缺铁补脾组、脾虚缺铁组、脾虚缺铁补脾组8组,按动物模型规范化的要求造模后,8组一次性灌服~(59)FeCl_3水悬液0.2ml/220g/只,同时依照人和鼠体重换算,正常补脾组、脾虚补脾组、缺铁补脾组、脾虚缺铁补脾组4组即时灌服1:1四君子汤药液1.5ml~±,其它4组用1.5ml~±生理盐水灌胃,日一次。每组分别在第0.5d、1d、2d、4d、8d、14d随机选取3只大鼠,眼球放血法处死,取出脾、肝、小肠、胃、肾器官组织备用。其中,实验Ⅱ用γ放射免疫计数器分别测量大鼠脾、肝、小肠、胃、肾器官组织放射性~(59)Fe计数,观测放射性铁由全身循环系统向大鼠组织器官转运、分布的药代动力学变化;实验Ⅲ和实验Ⅳ取出正常组、正常补脾组、脾虚组、脾虚补脾组4组大鼠脾脏,机械研磨法制备单细胞悬液,细胞淘洗法分离细胞,制备脾巨噬细胞单细胞悬液备用。实验Ⅲ用γ放射免疫计数器检测放射性~(59)Fe含量,观测放射性铁由全身循环系统向大鼠器官组织细胞转运代谢变化,以监测大鼠细胞内外铁的转运效率或利用效力。实验Ⅳ取出正常组、正常补脾组、脾虚组、脾虚补脾组4组在第2d、4d大鼠脾巨噬细胞单细胞悬液,采用流式细胞术检测脾巨噬细胞转铁蛋白受体阳性表达的细胞数,检测大鼠器官组织细胞转铁蛋白受体表达情况;实验Ⅴ取出正常组、正常补脾组、脾虚组、脾虚补脾组4组在第0.5d、1d、2d、4d、8d、14d大鼠脾,从大鼠脾组织中分离纯化RNA,用DIG标记DNA探针作RNA斑点杂交,检测大鼠器官组织转铁蛋白受体mRNA基因表达情况。 结果:实验Ⅰ研究各组对~(59)FeCl_3经大鼠胃、大小肠消化吸收进入全身循环系统的药代动力学变化,主要比较在脾虚状态下和在补脾状态下对~(59)FeCl_3的吸 湖此中医学陀 医于博士学位伦丈 收存在明显差别,辛l.)摔法促进了大鼠对”FeCI,的吸收。实验n研究各组对经大 鼠胃、大小肠消化吸收进入全身循环系统的”Fe向大鼠脾、肝、小肠、胃、肾 器官组织转运、分布的药代动力学变化,比较在脾虚状态下和在补脾状态下对 sgFe的转运存在明显差别,辛卜脾法促进了大鼠对’,Fe的转运分布;实验m研究各 组大鼠器官组织细胞内的放射性”Fe含量变化,辛卜脾较之脾虚状态下大鼠细胞 内的放射性’,Fe含量变化有明显差异,补脾法促进了大鼠细胞内外铁的转运和 利用;实验w研究各组大鼠器官组织细胞转铁蛋白受体表达阳性细胞数,脾虚 状态下大鼠器官组织细胞转铁蛋白受体表达阳性细胞数少于补脾状态下大鼠器 官组织细胞转铁蛋白受体表达阳性细胞数,补脾法增强了组织细胞转铁蛋白受 体表达;实验V研究各组大鼠器官组织转铁蛋白受体mRNA基因表达情况,脾虚 状态下大鼠器官组织转铁蛋白受体mRNA基因表达图谱面积小、密度小,补脾状 态下大鼠器官组织细胞转铁蛋白受体mRNA基因表达图谱面积大、密度大。 结论:实验I:脾虚证大鼠降低了”FeCI,的生物利用度,不能有效促进精微 物质吸收,辛卜脾法提高了大鼠铁的生物利用度,促进了’,FeC13的吸收; 实验n:在脾虚状态下”Fe由全身血液循环系统向器官组织转运代谢过程减 缓而使’gFe滞留于血液,而补脾促进了”Pe在大鼠器官组织内的转运,尤其是 向脾脏本身的集中,显示四君子汤通过补脾理脾纠正脾虚而调节机体物质运输 系统的功能; 实验m:脾虚证大鼠在补脾后逐渐加强了存在于大鼠器官组织间液的放射 性’,Fe与细胞内放射性’,Fe的交换,辛}、脾法促进了大鼠细胞内外铁的转运效率 和利用效力,供细胞代谢利用; 实验W和实验v:辛卜脾法激活了大鼠器官组织细胞物质铁的转运系统,从 而促进放射性’,Fe在大鼠体内的转运。具体表现在:脾虚下向调节巨噬细胞转 铁蛋白受体及其基因表达,使脾巨噬细
【学位授予单位】:湖北中医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R256.3

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